流式細(xì)胞術(shù)篩查血小板抗體方法的建立及應(yīng)用

韓博文

（天津曠博協(xié)和生物技術(shù)有限公司，天津 300384）

流式細(xì)胞術(shù)篩查血小板抗體方法的建立及應(yīng)用

韓博文

（天津曠博協(xié)和生物技術(shù)有限公司，天津 300384）

目的 建立一種用流式細(xì)胞術(shù)篩查血小板抗體的方法，并將其應(yīng)用于臨床治療中。方法 將78例需進(jìn)行血小板抗體檢測(cè)的患者進(jìn)行AB兩組試驗(yàn)，分別用常規(guī)處理法和流式細(xì)胞術(shù)來進(jìn)行檢測(cè)，觀察兩組的檢測(cè)結(jié)果。結(jié)果 A組的檢出率為25.65%，而B組的檢出率為35.90%，相比而言，B組的檢出率明顯高于A組，而且檢測(cè)的時(shí)間也要短于A組，但是兩者的陽性率無明顯差異。經(jīng)檢測(cè)，B組中還發(fā)現(xiàn)有10例含抗HLA抗體，有1例含抗HPA-5b抗體，有9例為自身抗體。結(jié)論 對(duì)于篩查血小板的抗體，流式細(xì)胞術(shù)的建立以及應(yīng)用為臨床治療提供了很大的便利，該方法不僅檢測(cè)速度快，操作簡(jiǎn)單，還實(shí)現(xiàn)了標(biāo)準(zhǔn)化，非常適用于臨床檢測(cè)。

流式細(xì)胞術(shù)；血小板抗體；方法建立；臨床應(yīng)用

通過對(duì)常規(guī)處理法和流式細(xì)胞術(shù)的比較來具體探討流式細(xì)胞術(shù)在臨床檢測(cè)中的應(yīng)用與效果，并作如下分析。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2016年本市醫(yī)院的共100例血小板患者的資料，對(duì)不同年齡，不同癥狀的患者進(jìn)行檢查，針對(duì)血小板來進(jìn)行針對(duì)性檢查。患者均無其他相關(guān)疾病，并且滿足了患者檢測(cè)的相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)，保證了醫(yī)院數(shù)據(jù)處理中的準(zhǔn)確性。且并未注射激素或進(jìn)行免疫性抑制等治療。將患者進(jìn)行AB兩組不同的檢測(cè)試驗(yàn)。

1.2 方法

所有患者均在本省同一家醫(yī)院內(nèi)進(jìn)行治療，A組采用常規(guī)處理法，即經(jīng)典酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA），B組采用流式細(xì)胞術(shù)（FCM）。

（1）制備樣本：采取的靜脈血應(yīng)該在15毫升以上，然后放入抗凝試管中，防止血液凝固。15 ml血液中13 ml用于血小板自身抗體檢測(cè)試驗(yàn)盒檢測(cè)，即ELISA，用離心法分離血小板，之后進(jìn)行冷卻。剩余的2 ml用于流式細(xì)胞術(shù)（FCM）檢測(cè)。

（2）經(jīng)典酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）技術(shù)檢測(cè)：按照使用說明書來進(jìn)行檢測(cè)。

（3）流式細(xì)胞術(shù)（FCM）技術(shù)檢測(cè)：將2 ml周血600轉(zhuǎn)離心，得1 ml上清，加入1 ml多聚甲醛（2%）混勻，2000轉(zhuǎn)離心，棄上清，加入2 mlPBS洗滌，2000轉(zhuǎn)離心，棄上清，加入2 mlPBS重懸備用，取100 ul重懸液與20 ulCD41-PE（北京曠博生物技術(shù)股份有限公司）混勻，孵育20分鐘后上機(jī)檢測(cè)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，計(jì)數(shù)資料以百分?jǐn)?shù)（%），例（n）表示，采用x2檢驗(yàn)；計(jì)量資料以“±s”表示，采用t檢驗(yàn)；以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

經(jīng)統(tǒng)計(jì)，經(jīng)典酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）檢測(cè)中，血小板抗體的檢出患者有20例，血小板自身抗體陽性為14例，陽性率為70%。其中，血小板表面自身抗體13例（66.70%），游離在血漿中的血小板自身抗體9例（47.60%）。在流式細(xì)胞術(shù)（FCM）法檢測(cè)中，血小板抗體的檢出患者有28例，檢出率為35.90%；血小板自身抗體陽性為24例，陽性率為85.70%。其中，血小板表面自身抗體22例（78.60%），游離在血漿中的血小板自身抗體16例（57.10%）。此外，流式細(xì)胞術(shù)（FCM）法檢測(cè)出有10例含抗HLA抗體，有1例含抗HPA-5b抗體，有9例為自身抗體。經(jīng)分析，常規(guī)處理法，即經(jīng)典酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）與流式細(xì)胞術(shù)（FCM）檢測(cè)血小板自身抗體陽性率差異并無統(tǒng)計(jì)意義（P=0.227＞0.05），流式細(xì)胞術(shù)（FCM）血小板表面自身抗體檢出率高于游離在血漿中的血小板自身抗體檢出率（P=0.039＜0.05）， 經(jīng)典酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）血小板表面自身抗體檢出率高于游離在血漿中的血小板自身抗體檢出率（P=0.043＜0.05）。

3 討 論

血小板作為一種血液中常存在的一種物質(zhì)，一旦數(shù)量發(fā)生了異常，就很容易引起其他種類疾病。例如，血小板自身抗體（PAIgG）在血小板膜上與其相應(yīng)抗原結(jié)合后，會(huì)使血小板很容易就被單核吞噬細(xì)胞系統(tǒng)大量破壞，從而會(huì)減少血小板的壽命，使血小板的數(shù)量銳減，這樣會(huì)影響人類自身的免疫系統(tǒng)，使得自身免疫系統(tǒng)的免疫能力下降，體液免疫和細(xì)胞免疫功能下降，因此，對(duì)于常規(guī)檢測(cè)方式來說，耗血量比較大，增加患者負(fù)擔(dān)。相反，流式細(xì)胞術(shù)（FCM）作為一種克服了原本障礙的新型抗體檢測(cè)技術(shù)，在臨床上的使用逐漸增多。耗血量大大減少，對(duì)單個(gè)細(xì)胞也可以進(jìn)行檢測(cè)，除此之外，檢測(cè)速度快，操作簡(jiǎn)便，而且流式細(xì)胞術(shù)還可以將檢測(cè)方法標(biāo)準(zhǔn)化。

本文采用78例患者進(jìn)行研究分析，將這78為患者分別進(jìn)行免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）和流式細(xì)胞術(shù)（FCM）進(jìn)行檢測(cè)，流式細(xì)胞術(shù)（FCM）的檢出率為35.90%，陽性率為85.70%。經(jīng)典酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）的檢出率為25.65%，陽性率為71.40%。上述兩種方法的陽性率的差異沒有統(tǒng)計(jì)意義（P＞0.05）。但是兩者的耗時(shí)相差較大，流式細(xì)胞術(shù)（FCM）僅用一個(gè)多小時(shí)，而酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）卻耗時(shí)五小時(shí)。由此可見，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)的速度非常快，而且結(jié)果也具有可靠性。

綜上，相較于經(jīng)典酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）來說，流式細(xì)胞術(shù)（FCM）會(huì)更加便捷，同時(shí)在速度上可以有更大的進(jìn)步，在樣本采取中，需要的血量很少。非常適用于臨床醫(yī)學(xué)中對(duì)于血小板抗體的檢測(cè)。

[1] 陳 雪.流式細(xì)胞儀在臨床醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用[J].重慶.2014(5).

[2] 張之南.血液病診斷及療效標(biāo)準(zhǔn)[M].北京.2008(8).

[3] 宋一芳.全血法流氏細(xì)胞術(shù)檢測(cè)血小板抗體[J].醫(yī)學(xué).2015(2).

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ISSN.2095-6681.2017.29.106.01

李 豆