白芷有效成分含量測定及其指紋圖譜研究

席 梅 王 欣 陸 艷

(1 首都醫科大學附屬北京中醫醫院，北京，100010； 2 中國中醫科學院廣安門醫院，北京，100053；3 北京大學藥學院實驗教學中心，北京，100191)

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白芷有效成分含量測定及其指紋圖譜研究

席 梅1王 欣2陸 艷3

(1 首都醫科大學附屬北京中醫醫院，北京，100010； 2 中國中醫科學院廣安門醫院，北京，100053；3 北京大學藥學院實驗教學中心，北京，100191)

目的：通過對白芷指紋圖譜研究，分析判斷不同產地、種屬的白芷藥材質量。方法：選取2012年3月北京中醫醫院購進的不同產地的白芷7批，按照種屬不同分為4大組，并未每組內按采購批次分為7個小組。采用高效液相色譜法對其進行成分含量的測定，根據特征峰的選取原則進行白芷藥材HPLC指紋圖譜的建立，同時對7批白芷進行指紋圖譜的測定確定4個峰為共有特征色譜峰并進行相似度比較，并判定白芷質量。結果：杭白芷20120305(重慶萬州)、滇白芷20120307(云南)為偽品，其余批次品質為一般或優，其中禹白芷2個批次品質均為優，優于其他組別的批次。結論：白芷藥材指紋圖譜的建立可以對藥材有效成分進行精準測量，該方法穩定性高，重現性好，對不同產地的白芷品質辨識提供有利的方法，達到快速、準確評價藥材質量的目的，值得推薦。

白芷；有效成分含量測定；指紋圖譜；特征峰

白芷Angelicadahurica，傘形科植物，在傳統醫學中藥用歷史悠久，其主要功能為解熱、鎮痛以及抗炎等[1]，主要用其干燥根。隨著白芷的藥材植物來源、生態環境等因素的影響，市場上越來越多的白芷代用品、類似品開始流通起來，間接對使用白芷類藥物治療的病患產生不小影響[2]。白芷根據其變種主要有以下4大類可入藥，祁白芷主產于河北，禹白芷主產于河南，杭白芷主產于四川、重慶、浙江等，及滇白芷主產于云南。白芷主要成為為香豆素類，其中歐前胡素與異歐前胡素為2種代表性香豆素化合物。目前，建立全面以及系統地控制白芷質量的分析方法顯得尤為重要。指紋圖譜質量控制模式可以較為綜合地反映藥材中各主要成分及其相對含量，能更全面地提供質量評價信息[3]。鑒于此，我們通過研究對不同產地白芷中的有效成分進行含量測定及其指紋圖譜的建立，通過相似度及特征峰比較提供一種藥材品質的判斷方法，現總結報道如下。

1 資料與方法

1.1 實驗材料

1.1.1 儀器與試劑 島津LC-10ATVP高效液相色譜儀；島津SPD-10AVP紫外檢測器；TB328B型電光分析天平(上海天平儀器廠)；歐前胡素對照品來源于中國藥品生物制品鑒定所。甲醇為色譜純，水為重蒸水，其余試劑為分析純。

1.1.2 中藥材 白芷藥材由北京大學藥學院實驗中心標本室提供，經鑒定為白芷Angelica dahurica的干燥根。白芷7個批次根據種屬不同分為祁白芷、禹白芷、杭白芷、滇白芷，具體產地詳見表1。

表1 不同種屬白芷的批次和產地

1.2 研究方法

1.2.1 供試品溶液制備 將10批次白芷藥材每批選取1 g藥材制成粗粉，過12目篩，精密稱定。于50 mL圓底燒瓶中加入25 mL甲醇溶液超聲提取30 min。取濾液減壓蒸干，并用甲醇溶液精密定容至50 mL容量瓶種，用45 μm微孔濾膜取20 mL，做好批號待用。

1.2.2 對照品溶液制備 精密稱取歐前胡素對照品5 mg，異歐前胡素對照品2 mg，置于50 mL量瓶中，使用甲醇溶解并定容待用。

1.2.3 色譜條件 流速為0.8 mL/min，檢測波長為254 nm，色溫為室溫，每次進樣量50 μL。平衡色譜柱時間為10 min。洗脫總時間為80 min，流動相為甲醇：水，梯度洗脫，甲醇體積百分比從15%增加到90%。

圖1 歐前胡素和異歐前胡素對照品色譜圖

圖2 白芷高效液相色譜4個特征指紋峰

1.2.4 方法 將7批次藥材按種屬不同分為祁白芷組、禹白芷組、杭白芷組、滇白芷組4個組別，每組里每批藥材分別制備供試品溶液進行HPLC分析，分析各個樣品的指紋特征峰及相似度。

選取白芷特征圖譜中指紋峰占總峰面積10%以上的4個特征峰。詳見圖2。標記為1號、2號、3號和4號峰。比較不同批次種4個指紋峰的相對峰面積。

1.3 判斷標準 通過以下標準進行判定[5]：若相似度在0.900以上，則判定為優質藥材；若相似度在0.800～0.900之間，則判定為藥材質量一般；若相似度低于0.800，則判定為偽品。

1.4 統計學方法 采用SPSS 13.0統計軟件分析。數據比較采用χ2檢驗。以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 4個組別相似度比較 杭白芷20120305(重慶萬州)、滇白芷20120307(云南)為偽品，其余批次品質為一般或優，其中禹白芷2個批次品質均為優，優于其他組別的批次。

表2 4個組別各批次相似度及品質結果比較

2.2 4個組別共有特征峰相對峰面積比較 與2.1中藥材品質相對應，偽品的2個批次種特征峰面積較小，與其他組別差異有統計學意義(P<0.05)，優質品與一般品特征峰面積差異有統計學意義(P<0.05)。

表3 2個組別共有指紋峰相對峰面積的RSD

3 討論

白芷因其藥材來源、種屬的不同，采收、炮制的差異，生長環境的差異，不同產地的白芷必然存在顯著的差異。白芷根據其種屬不同可分為四大類，因此需要建立起一種有效的質量控制方法以區別不同產品白芷的品質。白芷藥材指紋圖譜的建立及檢測效果顯著，方法穩定，具有重復性，在檢測白芷質量方面有積極作用[8]。目前，由于白芷在藥劑制作上的需求較多，多種多樣的白芷開始出現在市場上。杭白芷為白芷商品藥材的主流品種，其數量約占白芷產量的70%。四大類白芷雖然杭白芷產量最大，但是否品質最佳，含有效成分較高，這亟待分析[7]。

我們通過建立完整的白芷藥材高效液相色譜指紋圖譜對不同產地、種屬的白芷進行分析和評價，發現指紋圖譜具有較高的精準度。這與TabitCE等人[9-10]的報道相一致，表明指紋圖譜分析方法穩定，可靠，能直觀地反映出白芷的有效成分，符合張慧等人[8]的報道，表明指紋圖譜檢測具有見較高的重復性以及穩定性[11-12]。通過對特征指紋峰分析及相似度分析，不難看出河南地區白芷質量最佳，其次為河北地區，雖然杭白芷產量較高，但重慶地區所產白芷因其有效成分含量遠低于其他種屬，應為偽品，滇白芷也不應入藥。

我們認為指紋圖譜根據產地不同，選擇的共有模式結合系統聚類分析結果，保證了共有模式建立的代表性和科學性，導致指紋圖譜檢測結果清晰可信，為多批次同科屬藥材的分析提供了客觀科學的方法。

綜上所述，白芷藥材指紋圖譜的建立可以對藥材有效成分進行精準測量，該方法穩定性高，重現性好，對不同產地的白芷品質辨識提供有利的方法，達到快速、準確評價藥材質量的目的，值得推薦。

[1]陸洋，白潔，王玥，等.正交試驗結合藥效學實驗優選復方南星止痛膏處方提取工藝[J].中國中醫雜志，2013,38(16)：2590-2593.

[2]趙亮，曹紅.白芷有效成分提取工藝的優化及其中藥材質量研究[J].現代生物醫學進展，2011,11(14)：2759-2766.

[3]鄭光雅，米小琴，郭沛琳，等.白芷提取物的HPLC指紋圖譜研究[J].華西藥學雜志，2013,28(4)：398-400.

[4]張翠珍，陳雅民.牽正散治療面癱誤區探析[J].河北中醫，2012,34(1)：57-58.

[5]李玲，鄧才富，羅川，等.渝產白芷質量綜合分析和評價[J].時珍國醫國藥，2013,24(10)：2515-2516.

[6]李小芳，陳錫林.浙江地產藥材香白芷生藥學鑒定研究[J].浙江中醫雜志，2013,48(8)：614-615.

[7]盧曉琳，馬羚，馬逾英，等.與熏硫加工相關的白芷化學成分研究[J].中國實驗方劑學雜志，2013,19(22)：74-78.

[8]張慧，呂潔麗，張崇，等.白芷藥材水提液指紋圖譜的研究[J].天然產物研究與開發，2013,25(4)：506-510.

[9]Tabit CE， Chung W B，Hamburg NM，et al.Endothelial dysfunction in diabetes mellitus： molecular mechanisms and clinical implications[J]. Rev Endocr Metab Disord， 2010，11(1)：61-74.

[10]Endemann DH， Schiffrin EL.Endothelial dysfunction.[J].J Am Soc Nephrol， 2010， 15(8)：1983-1992.

[11]Izzard AS， Rizzoni D， Agabiti-Rosei E， et al.Small artery structure and hypertension： adaptive changes and target organ damage[J].J Hypertens，2011，23(2)：247-250.

[12]Nicolls MR， Haskins K，Flores S C.OXidant stress， immune dysregulation， and vascular function in type I diabetes[J].AntioXid RedoX Signal， 2012，9(7)：879-889.

(2016-08-26收稿 責任編輯：洪志強)

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Determination of Effective Ingredient and Fingerprint of Dahurian Angelica Root

Xi Mei1,Wang Xin2,Lu Yan3

(1AffiliatedBeijingChineseMedicineHospital,CapitalMedicalUniversity,Beijing100010,China; 2Guang′anmenHospital,ChinaAcademyofChinesemedicalScience,Beijing100053,China; 3ExperimentalTeachingCenterofCollegeofPharmacyatPekingUniversity,Beijing100191,China)

Objective:To determinate the effective ingredient and fingerprint of Dahurian Angelica Root.Methods:A total of 7 batches of Dahurian Angelica Root purchased in May 2012 in our hospital were divided into 4 major groups based on its batches. The effective ingredients were determined by high performance liquid chromatography and established HPLC fingerprint according to the principle of characteristic peaks of Dahurian Angelica Root. The 7 batches were determined by fingerprint and four peaks were determined and compared to evaluate Dahurian Angelica Root′s quality.Results:Hang Dahurian Angelica Root (Chongqing Wanzhou) and Dian Dahurian Angelica Root (Yunnan) were fake the other batches were average or had good quality. Two batches of Yu Dahurian Angelica Root had better quality than the others.Conclusion:The result of the fingerprint detection can make accurate measurement of the effective components of medicinal materials, with high stability, good reproducibility, which is a reliable method on the quality of identification of Dahurian Angelica Root from different habitats. Its rapid and accurate evaluation of the quality of Chinese medicine is recommended.

Dahurian Angelica Root; Content determination; Fingerprint; Characteristic peaks

R284.1

A

10.3969/j.issn.1673-7202.2016.11.060