早產(chǎn)患者宮頸長度超聲檢測與血清IL-18水平的關(guān)系研究

楊 敏，牛銘鋼

（1.吉林農(nóng)業(yè)科技學(xué)院，吉林吉林，132001；2.哈爾濱和美婦產(chǎn)醫(yī)院，黑龍江哈爾濱，150040）

早產(chǎn)患者宮頸長度超聲檢測與血清IL-18水平的關(guān)系研究

楊 敏1，牛銘鋼2

（1.吉林農(nóng)業(yè)科技學(xué)院，吉林吉林，132001；2.哈爾濱和美婦產(chǎn)醫(yī)院，黑龍江哈爾濱，150040）

檢測早產(chǎn)患者在會陰超聲下宮頸長度及IL-18在早產(chǎn)患者外周血清中的水平表達(dá)，并探討二者與早產(chǎn)的關(guān)系，評價其預(yù)測早產(chǎn)的可行性。結(jié)果表明：（1）經(jīng)會陰超聲測量宮頸長度可作為預(yù)測早產(chǎn)的可行性指標(biāo)，其預(yù)測早產(chǎn)的警戒值為宮頸長度＜3.0cm。（2）早產(chǎn)組孕婦血清IL-18水平較正常組孕婦顯著升高，IL-18有助于早產(chǎn)的預(yù)測，有望成為早產(chǎn)預(yù)測的一種輔助性指標(biāo)。經(jīng)會陰超聲宮頸長度測量和血清IL-18水平的聯(lián)合應(yīng)用對早產(chǎn)具有一定的預(yù)測價值。對預(yù)測早產(chǎn)、提高早產(chǎn)的診斷率，具有一定的指導(dǎo)意義。

早產(chǎn)；彩色多普勒超聲；會陰超聲；酶聯(lián)免疫吸附試驗；宮頸長度；IL-18

早產(chǎn)（premature delivery）作為圍生醫(yī)學(xué)中的一個重要、常見而又復(fù)雜的妊娠并發(fā)癥,目前已經(jīng)成為一個世界性的衛(wèi)生問題，原因在于其發(fā)病率、死亡率和后遺癥較足月者有較顯著的升高［1］。關(guān)于早產(chǎn)，世界衛(wèi)生組織將其定義為在37孕周前或者＜259d終止者，在我國目前是指自末次月經(jīng)第一日開始計算,妊娠滿28周但不滿37周之間分娩者稱為早產(chǎn)，在中醫(yī)來講早產(chǎn)先兆或胎動而未產(chǎn)，一般認(rèn)為屬中醫(yī)的胎動不安。如孕胎已形成而墮者中醫(yī)稱為“小產(chǎn)”或“半產(chǎn)。

目前早產(chǎn)的預(yù)測指標(biāo)除了較常用的物理指標(biāo)以為還有生化指標(biāo)和免疫指標(biāo)。物理指標(biāo)中超聲測量宮頸長度對有早產(chǎn)征象的孕婦發(fā)生早產(chǎn)有一定預(yù)測意義,其中經(jīng)會陰超聲測量方法準(zhǔn)確,成功率高,是值得推廣的一種測量方法。在免疫指標(biāo)中近年研究發(fā)現(xiàn)輔助T細(xì)胞(Th細(xì)胞)在妊娠免疫中發(fā)揮重要作用。最新研究發(fā)現(xiàn)先兆早產(chǎn)時IL-18也異常增高，推測可以用白介素18預(yù)測早產(chǎn)。本試驗以國內(nèi)外最新的研究成果為基準(zhǔn)，擬采用經(jīng)會陰超聲技術(shù)檢測宮頸長度的方法聯(lián)合酶聯(lián)免疫吸附試驗法(enzymelinkedimmunoadsordentassay，ELISA)檢測早產(chǎn)患者外周血清中IL-18水平，探討其變化規(guī)律、掌握其與早產(chǎn)之間的關(guān)系。

1 超聲測宮頸長度與早產(chǎn)的關(guān)系研究

1.1 實(shí)驗資料

選擇2014年12月一2015年12月在哈爾濱紅十字中心醫(yī)院診治的有早產(chǎn)癥狀的患者35例，年齡19～39歲，平均年齡（28.2±5.6）歲。孕周28～36周，平均孕周（32.4±2.5）周。同時選取同期來本院就診的正常妊娠婦女30例作為對照組，年齡20～39歲，平均年齡（27.7±5.3）歲，孕周28～36周，平均孕周（32.1±2.6）周。兩組孕婦年齡、孕周差異比較,無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。早產(chǎn)組入選標(biāo)準(zhǔn)，(1)孕周28一36+6周;(2)規(guī)律宮縮，宮縮≥2次/10分，每次宮縮持續(xù)30秒;(3)宮頸擴(kuò)張＜30mm;(4)胎膜完整或胎膜早破;(5)測試前未使用任何藥物;（6）孕周末次月經(jīng)日期確定，如未確定選擇超聲估計的孕周。其中因發(fā)生合并醫(yī)源性早產(chǎn)或剖宮產(chǎn)者5例，不納入統(tǒng)計。診斷標(biāo)準(zhǔn)參照樂杰主編，全國高等醫(yī)學(xué)院校統(tǒng)編教材《婦產(chǎn)科學(xué)》（第7版）。早產(chǎn)：早產(chǎn)的主要臨床表現(xiàn)是子宮收縮，最初為不規(guī)律宮縮，常伴有少許陰道流血或血性分泌物，以后可發(fā)展為規(guī)律宮縮，其過程與足月臨產(chǎn)相似，胎膜早破較足月臨產(chǎn)多。宮頸管先逐漸消退，然后擴(kuò)張，妊娠滿28周至不足37周出現(xiàn)至少10min一次的規(guī)則宮縮 （20min≥4次，持續(xù)≥30s），伴宮頸短縮≥75%，宮頸擴(kuò)張2cm以上，診斷為早產(chǎn)臨產(chǎn)，部分患者可伴有少量陰道流血或陰道流液，以往有晚期流產(chǎn)、早產(chǎn)及產(chǎn)傷史的孕婦容易發(fā)生早產(chǎn)。診斷早產(chǎn)并不困難，但應(yīng)與妊娠晚期出現(xiàn)的生理性子宮收縮相區(qū)別。生理性子宮收縮一般不規(guī)則、無痛感，且不伴有宮頸管消退和宮口擴(kuò)張等改變。

1.2 檢測方法

1.2.1 儀器

德國西門子公司Acuson.Sequoia512型彩色多普勒超聲診斷儀

1.2.2 經(jīng)會陰超聲檢查宮頸方法

囑患者排空膀胱取截石位,將保護(hù)膜覆蓋在涂有耦合劑的探頭上,大腿充分外展,經(jīng)會陰前區(qū)掃查,將探頭以矢狀位置置于大陰唇之間、尿道口和陰道口之間,進(jìn)行矢狀掃查。經(jīng)會陰后區(qū)掃查,將探頭以矢狀位置置于肛門口和陰道口之間。置于大小陰唇之間,超聲掃描顯示宮頸內(nèi)口、外口和先露部最低點(diǎn),準(zhǔn)確記錄宮頸長度(內(nèi)外口間距),內(nèi)口寬度、宮頸回聲強(qiáng)度、位置、先露部距陰道口距離。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

應(yīng)用SPSS17.0中文統(tǒng)計軟件進(jìn)行統(tǒng)計，計量資料數(shù)據(jù)結(jié)果以均數(shù)與標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，差異顯著性用配對樣本T檢驗進(jìn)行測量，以α＝0.05為檢驗水準(zhǔn)，若P＜0.05則此數(shù)據(jù)有顯著性差異，P＞0.05則無顯著性差異。

1.4 結(jié)果（見表1）

表1 各組孕婦超聲下宮頸長度的比較（±s）

表1 各組孕婦超聲下宮頸長度的比較（±s）

組別 例數(shù) 宮頸長度(mm)正常組早產(chǎn)組 30 30 34.87±3.31 23.90±3.53

從表中可以看出： 正常組平均宮頸管長度為(34.87±3.31)mm，早產(chǎn)組平均宮頸管長度為(23.90 ±3.53)mm，與正常組相比顯著變短(P＜0.001)。如圖1～圖4所示。

圖1、2：正常妊娠組宮頸長度超聲圖（妊娠28+3周右，妊娠35+3周左）

圖3、4：早產(chǎn)組宮頸長度超聲圖（妊娠29+1周左，妊娠35+3周右）

2 血清IL-18水平與早產(chǎn)的關(guān)系研究

2.1 實(shí)驗資料

2.1.1 研究對象

選擇2014年12月一2015年12月在哈爾濱紅十字中心醫(yī)院診治的有早產(chǎn)癥狀的患者35例，年齡19～39歲，平均年齡（28.2±5.6）歲。孕周28～36周，平均孕周（32.4±2.5）周。其中因發(fā)生合并醫(yī)源性早產(chǎn)或剖宮產(chǎn)者5例，不納入統(tǒng)計。選取同期在本院婦產(chǎn)科產(chǎn)檢的正常妊娠婦女30例為對照組，年齡22～37歲，平均年齡（27.7±5.3）歲，孕周28～36周，平均孕周（32.1±2.6）周。兩組孕婦年齡、孕周差異比較無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。診斷標(biāo)準(zhǔn)參照樂杰主編，全國高等醫(yī)學(xué)院校統(tǒng)編教材《婦產(chǎn)科學(xué)》（第7版）。

2.2 實(shí)驗方法及原理

本實(shí)驗采用酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）法對早產(chǎn)患者和正常妊娠孕婦外周血中的IL-18濃度進(jìn)行測定。試劑盒由上海心語科技有限公司提供，在2-8℃的溫度下保存。板內(nèi)、間變異系數(shù)均＜10%。本試劑盒通過人白細(xì)胞介素-18（IL-18）為標(biāo)本采用雙抗體夾心法測定其水平。用純化的人IL-18抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加IL-18，再與HRP標(biāo)記的IL-18抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過徹底洗滌后加底物 TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的IL-18呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中IL-18濃度。

2.3 實(shí)驗器材

熱恒溫水浴箱，型號：HH.W21.600（上海躍進(jìn)醫(yī)療器械廠）；低速離心機(jī)，型號：LD5-2A（北京雷勃爾有限公司）；AP-960全自動酶標(biāo)儀（日本東曹公司）；-80℃冰箱，4℃冰箱（SANYO）；10μl、50μl、100μl、500μl、1000μl精密移液器 （Eppendorf公司）；吸水紙：量筒：蒸餾水。

2.4 實(shí)驗操作

2.4.1 實(shí)驗準(zhǔn)備

實(shí)驗前將血清樣本從-80℃冰箱中取出，置于室溫下解凍至完全溶解。實(shí)驗前30min將試劑盒從冰箱中取出，以平衡至室溫，再進(jìn)行測定。嚴(yán)格按照試劑盒的說明于實(shí)驗前將標(biāo)準(zhǔn)品振蕩混勻，進(jìn)行倍比稀釋。標(biāo)本用標(biāo)本稀釋液1：1稀釋。洗滌液：蒸餾水50倍稀釋。

2.4.2 實(shí)驗具體步驟

1）加樣：分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。在空白孔中加入樣品稀釋液50μl，其余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品和待測樣品50μl，立即加入50μl的生物素標(biāo)記的抗體。避免產(chǎn)生氣泡，將樣品加在酶標(biāo)板底部，避免觸及孔壁。用封板膜封板后輕輕振蕩混勻，37℃溫育60min。

2）棄去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。

3）每孔加入60μl的親和鏈酶素-HRP，空白孔除外。輕輕振蕩混勻，37℃溫育30min。

4）棄去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。

5）依序每孔加底物A液50μl，再加入底物B液50μl，輕輕振蕩混勻，37℃避光溫育10min。

6）取出酶標(biāo)板，迅速依序每孔加終止溶液50μl，終止反應(yīng)，此時藍(lán)色立即轉(zhuǎn)為黃色。

⑺.用酶標(biāo)儀在450nm波長處依序測量各孔的OD值，在加終止液后15min之內(nèi)進(jìn)行檢測。

2.5 計算血清中IL-18濃度

橫坐標(biāo)設(shè)定為標(biāo)準(zhǔn)物的濃度，縱坐標(biāo)為OD值，繪出標(biāo)準(zhǔn)的曲線，由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度依據(jù)樣品算出的OD值；用稀釋倍數(shù)加以相乘。

2.6 統(tǒng)計學(xué)處理

應(yīng)用SPSS17.0中文統(tǒng)計軟件進(jìn)行統(tǒng)計，計量資料數(shù)據(jù)結(jié)果以均數(shù)與標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，差異顯著性用配對樣本T檢驗進(jìn)行測量，以α=0.05為檢驗水準(zhǔn)，若P＜0.05則此數(shù)據(jù)有顯著性差異，P＞0.05則無顯著性差異。

2.7 實(shí)驗結(jié)果（表2）

表2 各組孕婦血清中IL-18水平比較（±s）

表2 各組孕婦血清中IL-18水平比較（±s）

組別 例數(shù) IL-18(ng/L)正常組 30 5.60±1.47早產(chǎn)組 30 15.06±3.85

從表中可以看出：早產(chǎn)患者外周血清中IL-18水平與正常組相比較，早產(chǎn)患者外周血清值IL-18明顯高于正常妊娠組；正常組孕婦血清IL-18水平是5.60± 1.47ng/L，而早產(chǎn)組血清IL-18水平為15.06±3.85ng/L，兩者相比較有極顯著性差異（P＜0.01）。

3 早產(chǎn)患者會陰超聲下宮頸長度與血清IL-18的相關(guān)性研究

在服從正態(tài)分布經(jīng)會陰超聲下測宮頸長度和血清IL-18的情況下，分析二者的相關(guān)性采用Pearson相關(guān)分析。結(jié)果研究給出早產(chǎn)組會陰超聲下宮頸長度與血清IL-18水平之間關(guān)系，r=-0.114,P＞0.05。絕對值中相關(guān)系數(shù)越大，相關(guān)性越強(qiáng)，越接近于1或-1，相關(guān)度越強(qiáng)，越接近于0，相關(guān)度越弱。

通常情況下通過以下取值范圍判斷變量的相關(guān)強(qiáng)度：相關(guān)系數(shù)0.8-1.0極強(qiáng)相關(guān)，0.6-0.8強(qiáng)相關(guān)，0.4-0.6中等程度相關(guān)，0.2-0.4弱相關(guān)，0.0-0.2極弱相關(guān)或無相關(guān)。在這里看來早產(chǎn)組會陰超聲下宮頸長度與血清IL-18水平經(jīng)研究有極弱相關(guān)關(guān)或無相關(guān)，因本研究樣本量較小，所得出的結(jié)論以及超聲下宮頸長度與外周血IL-18水平值之間的相互關(guān)系，尚有待大樣本研究的進(jìn)一步證實(shí)。將超聲測量宮頸長度與早產(chǎn)患者外周血清IL-18的檢測相結(jié)合，將有助于進(jìn)一步闡明早產(chǎn)發(fā)生、發(fā)展的病理生理機(jī)制；同時也為早產(chǎn)的預(yù)測提供了一種新的思路。

4 結(jié)論

1）經(jīng)會陰超聲宮頸長度測量可作為預(yù)測早產(chǎn)的一種預(yù)測指標(biāo)，具備可行性，其預(yù)測早產(chǎn)的警戒值為宮頸長度<3.0cm。

2）早產(chǎn)組孕婦血清IL-18水平較正常組孕婦顯著升高，其有助于早產(chǎn)的預(yù)測，有望成為早產(chǎn)預(yù)測的一種輔助性指標(biāo)。

3）經(jīng)會陰超聲宮頸長度測量和血清IL-18水平的聯(lián)合應(yīng)用對早產(chǎn)具有一定的預(yù)測價值。對預(yù)測早產(chǎn)、提高早產(chǎn)的診斷率，具有一定的指導(dǎo)意義。

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