中藥艾葉組合物對雛雞免疫功能的影響

高俊波 ， 張華琦 ， 陳 敏 ， 郁建生

(1.銅仁職業技術學院 ， 貴州銅仁554300 ； 2.貴州省中獸藥工程研究中心 ， 貴州銅仁554300)

中藥艾葉組合物對雛雞免疫功能的影響

高俊波1,2， 張華琦1， 陳 敏1， 郁建生1,2

(1.銅仁職業技術學院 ， 貴州銅仁554300 ； 2.貴州省中獸藥工程研究中心 ， 貴州銅仁554300)

為了探討中藥艾葉組合物對雛雞免疫功能的影響。將艾葉、陳皮、魚腥草、益母草、穿心蓮5味中藥按一定比例制成復方散劑，選取1日齡本地土雞200只，隨機分為試驗低、中、高劑量組及對照組，低、中、高劑量組的日糧中分別添加0.3%、0.6%、1%中藥艾葉組合物，對照組只飼喂基礎日糧。分別于14、28、42日齡測定雛雞的新城疫抗體效價、免疫器官指數、T淋巴細胞百分率、血清免疫球蛋白含量。結果試驗高劑量組的新城疫抗體效價、免疫器官指數、T淋巴細胞百分率、免疫球蛋白含量與對照組相比差異顯著(P<0.05)或極顯著(P<0.01)，中劑量組對上述指標均有不同程度的增強作用，低劑量組的作用效果較差。表明本試驗中藥艾葉組合物能夠通過不同途徑有效增強雛雞的免疫功能。

中藥 ； 艾葉 ； 組合物 ； 雛雞 ； 免疫功能

隨著人民生活水平的不斷提高，綠色、安全、健康的飲食理念深入人心，土雞以其豐富的營養價值深受消費者青睞。但由于雛雞病死率較高，在一定程度上制約了土雞養殖業的發展。大量研究表明，化學類抗生素可以增強雛雞的免疫功能，有效的降低其發病率，但長期使用化學類抗生素作為飼料添加劑，可造成藥物殘留和耐藥性的產生，嚴重危害了人類的健康和土雞養殖業的發展。

中藥含有多種天然化學成分,且無毒副作用，可通過綜合調節作用來增強動物的免疫機能。本試驗選用艾葉、陳皮、魚腥草、益母草、穿心蓮5味中藥作為研究對象,將其制作成復方散劑，采用新城疫疫苗對雛雞進行免疫，通過分析抗體效價、免疫器官指數、T淋巴細胞百分率及血清免疫球蛋白等指標的變化，探討該中藥艾葉組合物對雛雞免疫功能的影響, 旨在為生產上開發優質高效的中藥飼料添加劑提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 中藥艾葉組合物的組方及加工 選取艾葉、陳皮、魚腥草、益母草、穿心蓮5味中草藥作為原料，購自貴州省銅仁市民生大藥房。將上述原料在熱風循環干燥箱50 ℃烘干2 h，超微粉碎，80目過篩，按30%、15%、20%、15%、20%的比例混合，攪拌均勻，裝袋備用，密封保存，防止藥材質量發生變化。

1.2 基礎日糧配方 基礎日糧自配，配方參照土雞飼養標準[1]。日糧配方及營養成分為：玉米61.17%、豆粕30.05%、魚粉6%、蛋氨酸0.19%、食鹽0.37%、石粉1.22%、多維預混料1%。

1.3 試驗動物分組及處理 200只1日齡的本地雛雞，由銅仁職業技術學院生態養殖園提供。采取隨機分組的方式，將200只雛雞分為4組，分別為對照組和試驗低、中、高劑量組，每組50只。7日前統一飼喂基礎日糧，7日齡以滴鼻點眼的方式接種新城疫 LaSota 株活疫苗。7日后分別在試驗低、中、高劑量組的基礎日糧中添加0.3%、0.6%、1%中藥艾葉組合物，對照組只飼喂相同質量的基礎日糧。每組均采取自由飲水，24 h光照，試驗用具嚴格清洗消毒。

1.4 血樣和臟器采集 分別于14、28、42日齡時，從各組雛雞中隨機抽取10只精確稱量體重，翅下靜脈采血并制作血涂片，心臟采血2 mL，離心分離血清，-20 ℃保存備用。采血后將雛雞頸靜脈放血致死，摘取胸腺、脾臟、腔上囊等器官，分離脂肪組織，濾紙吸去表面水分，精確稱重。

(1)新城疫抗體水平的測定：采用紅細胞凝集抑制試驗檢測雛雞新城疫抗體效價，結果以log2表示。

(2)免疫器官指數的測定：免疫器官指數= 免疫器官重(mg)/體重(g)。

(3)T淋巴細胞百分率測定[2]：采用酸性 A -醋酸萘酯酶(ANAE) 染色法檢測血涂片中 T 淋巴細胞百分率。對已采集的血涂片鏡檢，凡胞漿內出現大小和數量不等的深紅色顆粒者為ANAE陽性細胞(T淋巴細胞)，無此顆粒為B淋巴細胞。計數100個淋巴細胞，計算ANAE 陽性細胞率。ANAE陽性率=100個淋巴細胞中ANAE 陽性細胞數/100×100%。

(4)血清免疫球蛋白的測定：采用間接酶聯免疫吸附分析法測定IgA、IgM和IG的含量。

1.5 數據分析 試驗數據用 SPSS19.0分析軟件進行處理，LSD進行多重比較，數據用平均值±標準差表示，P<0.05表示差異顯著，P<0.01表示差異極顯著。

2 結果

2.1 中藥艾葉組合物對雛雞新城疫抗體效價的影響 見表1。

表1 中藥艾葉組合物對雛雞新城疫抗體效價的影響±s, n=10) log2x

注：同行數據右肩注大寫字母完全不同表示差異極顯著(P<0.01)； 小寫字母完全不同表示差異顯著(P<0.05)，含有相同字母表示差異不顯著(P>0.05)，下表同

由表2可知，雛雞14、28、42日齡時，中藥艾葉組合物高、中、低劑量組的ND-HI抗體效價均高于對照組，高、中劑量組與對照組相比差異極顯著(P<0.01)，低劑量組與對照組相比差異不顯著(P>0.05)。

2.2 中藥艾葉組合物對雛雞免疫器官指數的影響 見表2。

由表2可知，雛雞14日齡時，各組間胸腺、脾臟指數差異不顯著(P>0.05)，高劑量組的腔上囊指數與對照組相比差異顯著(P<0.05)；雛雞28日齡時，各組間胸腺指數差異不顯著(P>0.05)，高劑量組的脾臟指數與對照組相比差異顯著(P<0.05)，高劑量組的腔上囊指數與對照組相比差異極顯著(P<0.01)，中、低劑量組的腔上囊指數與對照組相比差異顯著(P<0.05)；雛雞42日齡時，高劑量組的胸腺、脾臟、腔上囊指數與對照組相比差異極顯著(P<0.01)，中劑量組的胸腺、脾臟指數與對照組相比差異顯著(P<0.05)，中劑量組的腔上囊指數與對照組相比差異極顯著(P<0.01)，低劑量組的腔上囊指數與對照組相比差異顯著(P<0.05)。

表2 中藥艾葉組合物對雛雞免疫器官指數的影響±s, n=10) mg/g

2.3 中藥艾葉組合物對雛雞外周血液T淋巴細胞百分率的影響 見表3。

表3 中藥艾葉組合物對雛雞外周血液T淋巴細胞百分率的影響±s, n=5) %

表4 中藥艾葉組合物對雛雞血清免疫球蛋白含量的影響±s, n=5) g/L

由表4可知, 雛雞14日齡時，各組間IgA、IgG、IgM含量差異不顯著(P>0.05)；28日齡時，高劑量組的IgG含量與對照組相比差異顯著(P<0.05)；42日齡時，高劑量組的IgA、IgG、IgM含量與對照組相比差異顯著(P<0.05)，中劑量組IgG含量與對照組相比差異顯著(P<0.05)。

3 討論

3.1 中藥添艾葉組合物提高雛雞免疫功能的機理 大量研究表明，諸多中草藥均可不同程度地提高動物機體免疫力，其作用機理包括促進免疫器官發育，增強和活化免疫細胞，促進和調節補體、抗體和溶菌酶的產生。如黃芪、枸杞、香菇中的多糖成分可以增加免疫器官指數、激活補體、提高抗體水平來實現增強動物機體免疫功能；黨參、柴胡、淫羊藿中的皂苷成分對提高動物機體免疫力均有作用[3]。本文選用的艾葉、陳皮、魚腥草、益母草、穿心蓮等5味中藥，含有豐富的多糖、黃酮、生物堿等有機成分，通過測定新城疫抗體水平、免疫器官指數、T淋巴細胞變化、血清免疫球蛋白含量等指標，研究該中藥組合物對雛雞特異性免疫和非特異性免疫的影響。

3.2 中藥艾葉組合物對雛雞新城疫抗體水平的影響 體液免疫是由B細胞介導的特異性免疫，抗體水平的高低是衡量體液免疫的重要標志。研究表明，中藥能有效地改善和提高機體體液免疫功能,與抗原同時使用能促進抗體的生成，延長免疫期[4]。本試驗高、中劑量組的新城疫抗體水平與對照組相比差異極顯著(P<0.01)，且抗體高峰維持時間長，抗體下降慢。表明中藥艾葉組合物能顯著提高雛雞新城疫抗體效價，且存在量效關系，高劑量組效果明顯優與低劑量組。3.3 中藥艾葉組合物對雛雞免疫器官指數的影響 胸腺、脾臟和腔上囊是禽類的主要免疫器官，三者參與機體的體液免疫和細胞免疫，其相對質量的增加提示機體細胞免疫和體液免疫機能增強[5]。試驗高、中劑量組的腔上囊、胸腺、脾臟指數在不同時期與對照組相比差異顯著或極顯著。表明，不同劑量的中藥艾葉組合物能有效地提高雛雞的胸腺指數、脾臟指數、腔上囊指數，特別對與腔上囊指數的提高更為明顯，且各組間存在量效關系，高劑量組的效果明顯優與中、低劑量組。

3.4 中藥艾葉組合物對雛雞外周血液T淋巴細胞百分率的影響 ANAE陽性率代表了機體的細胞免疫水平，ANAE陽性率提高表明活化的T細胞顯著增多，機體的細胞免疫水平提高。本試驗組ANAE陽性率14日齡時與對照組相比變化不明顯，但在雛雞28、42日齡時顯著高于對照組。表明隨著日齡的不斷增加，中藥艾葉組合物能顯著提高雛雞的外周血液T淋巴細胞百分率。

3.5 中藥艾葉組合物對雛雞血清免疫球蛋白的影響 免疫球蛋白是介導體液免疫的主要杭體，是參與黏膜免疫反應的主要活性物質，血清抗體的高低在一定程度上反映機體對疾病的抵抗能力[6]。通常檢測IgG、IgM、IgA就可以代表血清免疫球蛋白的水平。本試驗結果表明,不同劑量組的IgG、IgM、IgA含量在42日齡時明顯高于對照組，表明中藥艾葉組合物有利于增強雛雞免疫球蛋白水平。

綜上所述，艾葉、陳皮、魚腥草、益母草、穿心蓮5味中藥組合物能夠顯著提高雛雞的新城疫抗體水平、免疫器官指數、T細胞百分率及血清免疫球蛋白等指標，增強雛雞的免疫功能。

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2016-02-26

貴州省銅仁市科技計劃項目(銅市科研(2013)10-3號)

高俊波(1982-)，男，副教授，碩士，研究方向為基礎獸醫學.E-mail:751213716@qq.com

S831.5

B

0529-6005(2016)11-0073-03