氣相色譜法同時測定醬腌菜中山梨酸、脫氫乙酸、苯甲酸的含量

劉煒，楊曉鳳，雷紹榮

（四川省農業科學院分析測試中心，四川成都610066）

氣相色譜法同時測定醬腌菜中山梨酸、脫氫乙酸、苯甲酸的含量

劉煒，楊曉鳳，雷紹榮

（四川省農業科學院分析測試中心，四川成都610066）

建立了毛細管柱氣相色譜法同時測定醬腌菜中山梨酸、脫氫乙酸、苯甲酸的方法。樣品經鹽酸酸化后，乙醚提取，經HP-FFAP（30.00 m×0.32 mm×0.25 μm）毛細管柱分離后，采用火焰離子化檢測器（FID）檢測醬腌菜樣品中山梨酸、脫氫乙酸、苯甲酸的含量。結果表明，山梨酸、脫氫乙酸、苯甲酸含量分別在5.0～400 mg/L線性良好（r＞0.999），平均回收率為87.6%～97.7%，RSD（n＝5）在0.8%～3.7%。該方法快速、準確，適用于同時測定醬腌菜樣品中山梨酸、脫氫乙酸、苯甲酸的含量。

山梨酸；脫氫乙酸；苯甲酸；氣相色譜；醬腌菜

苯甲酸、山梨酸、脫氫乙酸是我國目前常用的食品防腐劑[1]。食品防腐劑可抑制食品中微生物的繁殖、殺死食品中含有的有害微生物，以此來防止食品變質的化學過程，同時還不影響食品的味道[2]。據報道，過多地攝入這些防腐劑會對人體造成傷害，如導致人體酸中毒、抽搐和過度深呼吸[3]，我國對食品防腐劑在食品中的使用都有嚴格的規定[4]。因此，對醬腌菜中常用的防腐劑山梨酸、脫氫乙酸、苯甲酸的含量進行檢測非常重要。

目前，檢測山梨酸、脫氫乙酸、苯甲酸的方法有氣相色譜法[5-8]、氣相色譜-質譜法[9]、液相色譜法[10-13]等；國標方法主要有《GB/T5009.29—2003食品中山梨酸、苯甲酸的測定》和《GB/T 5009.121—2003食品中脫氫乙酸的測定》[14-15]。在氣相色譜法中，3種防腐劑的前處理方法不盡相同，給日常的檢測工作無疑增加了難度及強度。因此，有必要建立一種同時測定山梨酸、脫氫乙酸、苯甲酸的檢測方法。

本研究建立了一種同時測定醬腌菜中山梨酸、脫氫乙酸、苯甲酸的檢測方法，樣品經鹽酸酸化、乙醚提取，用氣相色譜火焰離子化檢測器分析，該法操作簡單快速，測定結果滿意，適合于同時測定醬腌菜樣品中3種防腐劑的含量。

1 材料和方法

1.1 主要儀器與試劑

美國Agi7890A氣相色譜儀，配有自動進樣品、FID檢測器；色譜柱為Agilent HP-FFAP石英毛細管柱（30.00 m×0.32 mm×0.25 μm）。

丙酮為色譜純；乙醚、無水硫酸鈉、氯化鈉均為分析純。

山梨酸、脫氫乙酸、苯甲酸標準品均購自Dr. Ehrenstorfer公司。

1.2 色譜條件

色譜柱：Agilent HP-FFAP石英毛細管柱；載氣為氮氣（純度≥99.999%）；恒流模式，流量2 mL/min；尾吹氣為氮氣，流量為28 mL/min；檢測器溫度為250℃，空氣流量400mL/min，氫氣流量30mL/min；進樣口溫度為200℃，分流進樣，分流比為10∶1，進樣量為1 μL；柱溫采用升溫程序：初始溫度150℃，以30℃/min速率升至220℃，保持3 min；后運行：220℃保持5 min。

1.3 試驗方法

1.3.1 標準溶液配制標準儲備液配制：分別稱取山梨酸標準品、脫氫乙酸標準品、苯甲酸標準品各50.0 mg，分別置于3個50 mL容量瓶中，均用丙酮定容至刻度，制成濃度為1 000 mg/L的山梨酸、脫氫乙酸、苯甲酸標準儲備液，保存于4℃下。稱取山梨酸、脫氫乙酸、苯甲酸標準品50.0 mg置于50 mL容量瓶中，用丙酮溶解并定容至刻度，制成濃度均為1 000 mg/L的混合標準儲備液，保存于4℃下。使用前，用丙酮稀釋成不同濃度的標準使用液。標準工作液系列的配制：丙酮稀釋混合標準溶液得到5.0，10.0，50.0，100.0，200.0，400.0 mg/L的混合標準溶液。

1.3.2 樣品的前處理稱取2.50 g醬腌菜樣品于50 mL具塞比色管中，加入6 mol/L鹽酸1 mL后，分別用25 mL乙醚提取2次，每次振搖2 min后靜止，將上層乙醚提取液轉移至另一支具塞比色管，合并乙醚提取液。用40 g/L酸性氯化鈉溶液5 mL洗滌乙醚提取液1次，靜止2 min，棄去下層溶液。加入無水硫酸鈉，振搖1 min，將乙醚提取液于35℃旋轉蒸發濃縮至近干，5 mL丙酮溶解定容后過0.45 μm濾膜備用。

2 結果與分析

2.1 色譜柱的選擇

考察了山梨酸、脫氫乙酸及苯甲酸在Agilent HP-5（30.00 m×0.32 mm×0.25 μm），Agilent DB-17（30.00 m×0.32 mm×0.25 μm），Agilent HP-FFAP（30.00 m×0.32 mm×0.25 μm）3種不同極性毛細管柱相同的程序升溫條件（初始溫度為60℃，以35℃/min速率升至220℃，保持10 min）下的色譜保留行為，結果如圖1所示。綜合山梨酸、脫氫乙酸、苯甲酸色譜峰的對稱性及峰高響應情況，結果發現，極性FFAP柱分析山梨酸、脫氫乙酸、苯甲酸時峰形對稱，峰高較高，因此，本試驗選擇HP-FFAP石英毛細管柱。

2.2 色譜條件的優化及其色譜圖分析

柱溫對化合物的出峰時間和色譜峰形有較大的影響。在1.2色譜條件下，3種化合物色譜峰形較好，出峰時間短，實現了基線分離，且樣品中無干擾雜質峰，表明試驗條件良好。圖2為1.2色譜條件下山梨酸、脫氫乙酸、苯甲酸標準品、醬腌菜空白樣品及醬腌菜空白加標樣品的色譜圖。由圖2可知，山梨酸保留時間為2.589 min，脫氫乙酸的保留時間為2.894 min，苯甲酸的保留時間為3.634 min。

2.3 前處理方法的確定

一般生產時防腐劑添加的是山梨酸鉀或苯甲酸鈉或脫氫乙酸鈉，加鹽酸酸化后，會形成山梨酸、脫氫乙酸及苯甲酸，因此，極性大大減弱，這樣就較容易被弱極性的乙醚所提取，加入酸性氯化鈉后，由于鹽析作用，會使乙醚層中的微量水盡可能釋放出來，促進分層。

另外，試驗探討了乙醚用量對山梨酸、脫氫乙酸及苯甲酸萃取率的影響。用25 mL乙醚萃取，結果發現，用25 mL乙醚萃取一次山梨酸、脫氫乙酸及苯甲酸的萃取率大于90%；經過2次25 mL乙醚萃取，山梨酸、脫氫乙酸、苯甲酸能完全萃取。

因此，本試驗選擇的前處理方法確定為1.3.2分析步驟的前處理方法。

2.4 標準曲線和檢出限分析

在本試驗條件下，采集不同濃度標準品信號繪制其標準曲線，結果表明，3種防腐劑在質量濃度為5.0～400.0 mg/L時，質量濃度（C）與其峰面積（A）呈良好的線性關系，相關系數均大于0.999。以S/N＝3計，檢出限在0.12～0.21 mg/kg。3種防腐劑的相關系數和檢出限如表1所示。

表1 回歸曲線的基本參數

2.5 方法的準確度和精密度分析

在不含有山梨酸、脫氫乙酸、苯甲酸的醬腌菜樣品中分別添加混合標準溶液，使添加質量分數分別為5.0，50.0，200 mg/kg，每個質量分數水平重復5次，按照1.3.2分析步驟處理樣品，進行精密度與準確度的測定，3種添加質量分數的方法回收率及精密度列于表2。從表2可以看出，該方法的回收率在87.6%～97.7%，RSD在0.8%～3.7%，表明該方法結果準確可靠，重現性良好。在四川省農業科學院分析測試中心2015年1月至2016年4月間，有179個醬腌菜樣品使用本研究的方法同時高效檢測山梨酸、苯甲酸、脫氫乙酸項目，共有28個樣品有檢出，其中，23個樣品中僅山梨酸檢出未超標，3個樣品中苯甲酸檢出未超標，2個樣品中脫氫乙酸檢出未超標。

表2 方法的回收率和精密度試驗（n＝5）

3 結論

本研究方法對3種防腐劑山梨酸、脫氫乙酸、苯甲酸的色譜分離效果良好、檢出限低、精密度高、標準曲線范圍廣、加標回收率高，符合色譜檢測的要求。而且操作簡單、分析效率高，同時適合進行大批量樣品的檢測，能滿足各級檢測機構的實際檢測工作需要。

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Simultaneous Determination of Sorbic Acid，Dehydroacetic Acid and Benzoic Acid in Pickled Vegetables by Capillary Gas Chromatography

LIUWei，YANGXiaofeng，LEI Shaorong
（Analysis and TestingCenter，Sichuan Academy of Agricultural Sciences，Chengdu 610066，China）

Amethod based on capillarygas chromatographywas developed todetect sorbic acid,dehydroacetic acid and benzoic acid in pickled vegetables.After being acidified,samples were extracted with ether,separated on a capillary column（HP-FFAP,30.00 m× 0.32 mm×0.25 μm）and detected with a flame ionization detector（FID）.The result showed that the linear range was 5.0-400.0 mg/L and the linear correlation coefficients of sorbic acid,dehydroacetic acid and benzoic acid were greater than 0.999.The recoveries ranged from 87.6%to 97.7%with RSD（n=5）of 0.8%-3.7%.This method was stable,rapid and repeatable to detect the sorbic acid, dehydroacetic acid and benzoic acid in pickled vegetables．

sorbic acid;dehydroacetic acid;benzoic acid;gas chromatography;pickled vegetable

TS255.53

A

1002-2481（2016）10-1484-04

10.3969/j.issn.1002-2481.2016.10.14

2016-06-22

劉煒（1988-），女，重慶開縣人，研究實習員，主要從事食品安全分析研究工作。