美洲大蠊提取物CⅡ-3對(duì)家兔血常規(guī)及抗氧化活性的影響

邵維莉 吳道勛 彭 芳,2 劉光明,2 陳俊雅,2 王 濤

1.大理大學(xué)藥學(xué)與化學(xué)學(xué)院，云南 大理 67100；2.云南省昆蟲(chóng)生物醫(yī)藥研發(fā)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，云南 大理 671000；3.大理大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，云南 大理 671000

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美洲大蠊提取物CⅡ-3對(duì)家兔血常規(guī)及抗氧化活性的影響

邵維莉1吳道勛1彭 芳1,2劉光明1,2陳俊雅1,2王 濤3*

1.大理大學(xué)藥學(xué)與化學(xué)學(xué)院，云南 大理 67100；2.云南省昆蟲(chóng)生物醫(yī)藥研發(fā)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，云南 大理 671000；3.大理大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，云南 大理 671000

目的：研究美洲大蠊提取物CⅡ-3對(duì)正常家兔血常規(guī)和血清抗氧化能力的影響。方法：給予正常家兔高(16mg/kg)、中(8mg/kg)、低(4mg/kg)耳緣靜脈注射CⅡ-3，對(duì)各劑量組血常規(guī)和血清中抗氧化因子活性進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果：?jiǎn)未谓o藥后，高劑量CⅡ-3能夠明顯降低正常家兔血液中白細(xì)胞、紅細(xì)胞的數(shù)量(P<0.05)；多次給藥后，與NS組比較，CⅡ-3對(duì)CAT、MPO的含量及T-AOC活性均有一定的提高作用(P<0.05)。結(jié)論：美洲大蠊提取物CⅡ-3具有一定的抗炎和抗氧化活性。

美洲大蠊；血常規(guī)；抗炎；抗氧化

美洲大蠊(PeriplanetaamericanaL.)為蜚蠊目蜚蠊科昆蟲(chóng)，俗稱蟑螂。據(jù)《本草綱目》記載，蟑螂以干燥或新鮮全體入藥，有活血化瘀、解毒消疳、利水消腫等功效[1]。自20世紀(jì)70年代以來(lái)，國(guó)內(nèi)外學(xué)者從其體內(nèi)分離純化出多種活性物質(zhì)，如與組織再生有關(guān)的p10蛋白[2]、促進(jìn)血細(xì)胞吸收感染細(xì)菌的防御型分子脂多糖結(jié)合蛋白[3]以及具有利尿作用的多肽[4]等。并開(kāi)發(fā)了美洲大蠊系列昆蟲(chóng)藥品，如康復(fù)新液、心脈隆注射液和肝龍膠囊等[5]。實(shí)驗(yàn)通過(guò)測(cè)定美洲大蠊醇提取物CⅡ-3對(duì)家兔外周血細(xì)胞因子和血清液中抗氧化因子的含量，進(jìn)一步闡明美洲大蠊的抗炎及抗氧化作用，為其進(jìn)一步研究提供參考。

1 儀器與材料

1.1 美洲大蠊提取物的制備 受試藥物CⅡ-3(批號(hào)：20140823，由大理大學(xué)藥學(xué)院劉光明教授提供)為棕褐色凍干粉末，其制備過(guò)程如下：用溶劑提取粉碎后的美洲大蠊蟲(chóng)體干品，濃縮回收溶劑，得到的濃縮液經(jīng)大孔吸附樹(shù)脂材料柱層析，水洗，然后用醇溶劑洗脫，所得洗脫液經(jīng)減壓濃縮至無(wú)醇味，干燥后得到產(chǎn)品CⅡ-3[6]。實(shí)驗(yàn)前受試藥物用生理鹽水分別配制成不同濃度的藥液，然后用0.22 μm的微孔濾膜進(jìn)行過(guò)濾滅菌。

1.2 動(dòng)物與試劑 家兔42只，體重1.5～2.0kg，由大理大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，許可證號(hào)SYXK(滇)2011-0004，普通級(jí)別。過(guò)氧化氫酶(CAT，批號(hào)：20150707)、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH-Px，批號(hào)：20150421)、髓過(guò)氧化物酶(MPO，批號(hào)：20150415)、總抗氧化能力(T-AOC，批號(hào)：20150706)等試劑盒均購(gòu)自南京建成生物工程研究所；XFA6000動(dòng)物血細(xì)胞分析儀用稀釋液(批號(hào)：PD1501)、HB探針清洗液(批號(hào)：PB9407)；ANI-3D溶血?jiǎng)?批號(hào)：PF2402)；HB含酶清洗液(批號(hào)：PB7501)等購(gòu)自南京普朗醫(yī)療設(shè)備有限公司。

1.3 儀器 TL-16R高速冷凍離心機(jī)(上海市離心機(jī)機(jī)械研究所)；EMP-168G半自動(dòng)生化分析儀(深圳市恩普電子技術(shù)有限公司)；XFA6000全自動(dòng)動(dòng)物血細(xì)胞分析儀(南京普朗醫(yī)療設(shè)備有限公司)。

2 方法

2.1 單次給藥對(duì)家兔血細(xì)胞含量的影響 體重1.5～2.0kg健康雄性家兔18只，隨機(jī)分為3組，每組6只，即CⅡ-3高(16mg/kg)、中(8mg/kg)、低(4mg/kg)劑量組。各組家兔按給藥量2mL/kg通過(guò)耳緣靜脈給藥1次，分別于給藥前，給藥后5、15、30、60、120、240min耳緣靜脈采血20μL，全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀上檢測(cè)不同時(shí)間點(diǎn)家兔血液中白細(xì)胞、紅細(xì)胞、血小板等含量的變化。

2.2 連續(xù)給藥對(duì)家兔血清中抗氧化因子含量的影響 體重1.5～2.0kg健康雄性家兔24只，按體重隨機(jī)分為4組，每組6只，分別為3個(gè)給藥組(與2.1中相同)和1個(gè)生理鹽水對(duì)照組(NS組)。給藥組家兔每日耳緣靜脈給藥，給藥量均為2mL/kg，NS組給予生理鹽水，連續(xù)給藥5d。末次給藥后24 h，心臟采血5 mL，并分離血清，參照試劑盒說(shuō)明書(shū)分別測(cè)定血清中過(guò)氧化氫酶(Catalase；CAT)、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(Myeloperoxidase；GSH-PX)、髓過(guò)氧化物酶(Myeloperodidase；MPO)的含量以及血清總抗氧化能力(Total Antioxidant Capacity ；T-AOC)的活性。

3 結(jié)果

3.1 單次給藥美洲大蠊提取物CⅡ-3對(duì)家兔血細(xì)胞含量的影響

3.1.1 單次給藥后CⅡ-3對(duì)家兔白細(xì)胞含量的影響 與給藥前比較，給藥后30、60min時(shí)，高劑量組家兔血液中白細(xì)胞含量明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)果見(jiàn)表1。

3.1.2 單次給藥CⅡ-3對(duì)家兔紅細(xì)胞含量的影響 與給藥前比較，給藥后240min時(shí)高劑量CⅡ-3組紅細(xì)胞數(shù)量的減少較明顯，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)果見(jiàn)表 2。

3.1.3 單次給藥CⅡ-3對(duì)家兔血小板含量的影響 與給藥前比較，CⅡ-3各劑量組對(duì)家兔血小板的影響不明顯，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。結(jié)果見(jiàn)表 3。

注：與給藥前比較，*P<0.05。

注：與給藥前比較，*P<0.05。

組別給藥前/×109/L給藥后/×109/L5min15min30min60min120min240min低劑量組327.8±146.4344.8±127.4354.8±109.9214.5±59.6284.7±95.9269.2±94.9287.2±94.9中劑量組312.3±89.5335.8±68.3242.2±160.9262.3±148.0345.3±87.9290.2±68.6305.5±68.1高劑量組356.2±97.1318.8±93.4331.3±90.2 265.8±96.1278.8±80.7362.3±105.0244.7±144.0

3.2 多次給藥CⅡ-3對(duì)正常家兔血清中抗氧化因子含量的影響 與NS組比較，CⅡ-3能夠明顯增強(qiáng)正常家兔血清中MPO的活性,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。低劑量、中劑量CⅡ-3能使血清中CAT的含量顯著增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，中劑量CⅡ-3還可以顯著提高血清中T-AOC的活性，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；另外，高劑量CⅡ-3也能提高血清中GSH-PX的含量，但差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。結(jié)果見(jiàn)表4。

注：與NS組比較，*P<0.05。

4 討論

血常規(guī)檢查是血液細(xì)胞部分的檢查，也是臨床一項(xiàng)基本的常規(guī)檢查[7-8]。根據(jù)其數(shù)量和分布的變化，可以作為疾病診斷的輔助手段。紅細(xì)胞各項(xiàng)參數(shù)出現(xiàn)異常時(shí)，可對(duì)一些疾病的診斷提供依據(jù)。白細(xì)胞可以保護(hù)機(jī)體避免各種病毒性和細(xì)菌性感染，以及其他異物的入侵[9]。有證據(jù)表明[10]，血小板對(duì)急性炎癥和損傷，包括類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、腦型瘧和急性肺損傷等起主要作用。試驗(yàn)中，高劑量CⅡ-3能夠降低正常家兔血液中白細(xì)胞、紅細(xì)胞的數(shù)量，提示其具有一定的抗炎作用。

過(guò)氧化氫酶(CAT)能夠刺激H2O2生成水并且可以清除機(jī)體氫過(guò)氧化物，且過(guò)氧化氫酶利用H2O2可以氧化一些毒素，包括酚類、甲酸、甲醛和酒精等[11]。過(guò)氧化氫作為機(jī)體代謝過(guò)程中產(chǎn)生的廢物，能夠?qū)C(jī)體造成損害。為了避免這種損害，過(guò)氧化氫必須被快速地轉(zhuǎn)化為其他無(wú)害或毒性較小的物質(zhì)，而過(guò)氧化氫酶就是常常被細(xì)胞用來(lái)催化過(guò)氧化氫分解的工具。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與NS組相比，低、中劑量CⅡ-3能夠明顯增強(qiáng)家兔血清中過(guò)氧化物酶的活力(P<0.05)。谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH-PX)是機(jī)體內(nèi)廣泛存在的抗氧化酶，它在信號(hào)平衡、免疫調(diào)節(jié)[12]，以及清除氫過(guò)氧化物，避免氧化損傷中發(fā)揮重要作用[13-14]。實(shí)驗(yàn)中，中、高劑量CⅡ-3可以增加家兔血清中谷胱甘肽過(guò)氧化物酶的含量。髓過(guò)氧化物酶(MPO)存在于吞噬細(xì)胞中，是抗微生物系統(tǒng)和炎癥調(diào)節(jié)的基本成分[15]，其活性的變化可對(duì)早期組織損傷做出較敏感的反應(yīng)[16]。作為中性粒細(xì)胞和單核細(xì)胞的標(biāo)志酶[17]，其水平與細(xì)胞數(shù)量成正比，與血常規(guī)中的中性粒細(xì)胞和單核細(xì)胞數(shù)的增加一致；且根據(jù)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，各劑量CⅡ-3均能明顯提高家兔血清中MPO的活性(P<0.05)。而從整體抗氧化水平而言，總抗氧化能力(T-AOC)對(duì)防御體的抗氧化作用主要通過(guò)消除自由基和活性氧，分解過(guò)氧化物，去除催化作用的金屬離子等來(lái)實(shí)現(xiàn)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，中劑量CⅡ-3能夠明顯增加家兔血清中T-AOC水平(P<0.05)。根據(jù)所測(cè)定家兔血清中抗氧化因子的活性和水平，可以認(rèn)為CⅡ-3具有一定的體內(nèi)抗氧化作用。

實(shí)驗(yàn)通過(guò)對(duì)正常家兔外周血細(xì)胞含量及抗氧化因子進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果顯示，給予美洲大蠊提取物CⅡ-3后，正常家兔血液中白細(xì)胞、紅細(xì)胞數(shù)量減少，對(duì)抗氧化因子MPO、CAT、GSH-PX、T-AOC具有一定的提高作用，從而表明美洲大蠊提取物CⅡ-3具有一定的抗炎、抗氧化作用，這一結(jié)果將為美洲大蠊的下一步研究提供理論依據(jù)。

[1]李玉和. 蟲(chóng)類藥治療疑難病證的臨床研究[J]. 中醫(yī)藥信息，1998，11(4)：21-23.

[2]NomuraA,KawasakiK,KuboT,etal.Purificationandlocalizationofp10,anovelproteinthatincreasesinnymphalregeneratinglegsofPeriplanetaamericana(Americancockroach)[J].TheInternationalJournalofDevelopmentalBiology, 1992, 36(3): 391-398.

[3]JomoriT,NatoriS.Functionofthelipopolysaccharide-bindingproteinofPeriplanetaamericanaasanopsonin[J].FEBSLetters, 1992, 296(3): 283-286.

[4]KayI,PatelM,CoastGM,etal.Isolation,characterizationandbiologicalactivityofaCRF-relateddiureticpeptidefromPeriplanetaamericanaL[J].RegulatoryPeptides, 1992, 42(3): 111-122.

[5]何正春，彭芳，宋麗艷，等. 美洲大蠊化學(xué)成分及藥理作用研究進(jìn)展[J]. 中國(guó)中藥雜志，2007，32(21)：2326-2331.

[6]大理學(xué)院. 大孔吸附樹(shù)脂制備的美洲大蠊抗腫瘤有效部位及用途[P]. 中國(guó)發(fā)明專利，CN101214262. 2008-07-09.

[7]費(fèi)樹(shù)強(qiáng). 血常規(guī)檢查的臨床意義分析[J]. 大家健康，2014，8(16)：53-54.

[8]楊志明.C-反應(yīng)蛋白和血常規(guī)測(cè)定的臨床意義[J]. 實(shí)用中西醫(yī)結(jié)合臨床，2014，14(9)：51-52.

[9]FedosovDA,GompperG.Whitebloodcellmarginationinmicrocirculation[J].SoftMatter, 2014, 10(17): 2961-2970.

[10]CaudrillierA,KessenbrockK,GillissBM,etal.Plateletsinduceneutrophilextracellulartrapsintransfusion-relatedacutelunginjury[J].TheJournalofClinicalInvestigation, 2012, 122(7): 2661-2671.

[11]MustafaNaziroglu.Molecularroleofcatalaseonoxidativestress-inducedCa2+signalingandTRPcationchannelactivationinnervoussystem[J].JournalofReceptorsandSignalTransduction, 2012, 32(3): 134-141.

[12]BarrettCW,NingWei,ChenXi,etal.TumorsuppressorfunctionoftheplasmaGlutathionePeroxidaseGpx3incolitis-associatedcarcinoma[J].CancerResearch, 2012, 73(3): 1245-1255.

[13]HuangCheng,DingGuangyu,GuChengyu,etal.Decreasedselenium-bindingprotein1enhancesglutathioneperoxidase1activityanddownregulatesHIF-1αtopromotehepatocellularcarcinomainvasiveness[J].AmericanAssociationforcancerresearch, 2012, 18(11): 3024-3053.

[14]AhmedGaber,TomoyaOgata,TakanoriMaruta,etal.TheinvolvementofArabidopsisglutathioneperoxidase8inthesuppressionofoxidativedamageinthenucleusandcytosol[J].Plant﹠cellphysiology, 2012, 53(9): 1596-1606.

[15]NazligulY,AslanM,HorozM,etal.TheeffectonserummyeloperoxidaseactivityandoxidativestatusoferadicationtreatmentinpatientsHelicobacterpyloriinfected[J].ClinicalBiochemistry, 2011, 44(8-9): 647-649.

[16]StampLK,KhalilovaI,TarrJM,etal.Myeloperoxidaseandoxidativestressinrheumatoidarthritis[J].Rheumatology, 2012, 51(10): 1796-1803.

[17]HenrotinY,LabasseA,FranckT,etal.CollagencatabolismthroughColl2-1andColl2-1NO2andmyeloperoxidaseactivityinmarathonrunners[J].SpringerPlus, 2013, 2(92): 1-7.

(編輯：梁志慶)

The Effect of CⅡ-3 Extracted fromPeriplanetaamericanaL. on Blood Cell Parameters and Antioxidant Capacity of Rabbits

SHAO Weili1WU Daoxun1PENG Fang1,2LIU Guangming1,2CHEN Junya1,2WANG Tao3*

1.College of Pharmacy and Chemistry, Dali University, Dali 671000，China;2.Yunnan Provincial Key Laboratory of Entomological Biopharmaceutical R&D, Dali 671000，China;3.College of Basic Medical Sciences, Dali University, Dali 671000, China

Objective To study the effects of CⅡ-3 extracted fromPeriplanetaamericanL. on the blood cell parameters and serum antioxidant capacity of normal rabbits. Methods The level of blood cell parameters and serum antioxidant factors of all dose groups were determined after the ear margin vein of normal rdbbits was injected with high(16mg/kg),Medium(8mg/kg) and low-dose(4mg/kg) of CⅡ-3.Results After the treatment, high dose CⅡ-3 could significantly reduce the number of white blood cells and red blood cells in normal rabbits (P<0.05); compared with the NS group, the activity of CAT, MPO, T-AOC in CⅡ-3 groups were higher (P<0.05). Conclusion CⅡ-3 extracted fromPeriplanetaamericanaL. has a certain anti-inflammation and anti-oxidation effects.

PeriplanetaamericanaL.; Blood Cell Parameters; Anti-Infammation; Anti-Oxidation

2010-9-22

國(guó)家自然科學(xué)基金(81560600)；云南省昆蟲(chóng)生物醫(yī)藥研發(fā)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室開(kāi)放課題(201406-04)。

邵維莉(1992-)，女，漢族，碩士，研究方向?yàn)橹兴幩幚韺W(xué)。E-mail：770892271@qq.com

王濤(1975-)，女，白族，本科，實(shí)驗(yàn)師，研究方向?yàn)槲⑸锱c免疫學(xué)。E-mail：1977757178@qq.com

R

A

1007-8517(2016)23-0036-03