防風配方顆粒的提取工藝優化以及含量測定

趙粉榮 劉 斌 田志杰

內蒙古大唐藥業股份有限公司，內蒙古 呼和浩特 010010

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防風配方顆粒的提取工藝優化以及含量測定

趙粉榮 劉 斌 田志杰

內蒙古大唐藥業股份有限公司，內蒙古 呼和浩特 010010

目的：優選防風配方顆粒的提取工藝，建立升麻素苷與5-O-甲基維斯阿米醇苷的含量測定方法，為有效控制該制劑的質量提供參考。方法：以升麻素苷與5-O-甲基維斯阿米醇苷提取量和出膏率為評價指標，采用正交試驗考察加水量、提取時間和提取次數對防風配方顆粒提取工藝的影響。采用HPLC 測定升麻素苷與5-O-甲基維斯阿米醇苷含量。結果：最佳提取工藝為浸泡0.5h，加10、8、6倍量水提取3次，每次0.5h；升麻素苷、5-O-甲基維斯阿米醇苷分別在6.24～62.4μg、5.68～56.8μg與峰面積呈良好線性關系，平均加樣回收率依次為99.63%、99.75%，RSD分別為0.13%、1.04%。結論：該提取工藝和含量測定方法穩定可行，有效成分提取效率高，為防風配方顆粒的生產和質量控制提供參考。

防風配方顆粒；升麻素苷；5-O-甲基維斯阿米醇苷；浸膏得率； 質量標準

防風是常用中藥，為傘形科植物防風Saposhnikoviadivaricata(Turcz.)Schischk.的干燥根。具有祛風解表，勝濕止痛，止痙之功效。用于感冒頭痛，風濕麻痹，風疹瘙癢，破傷風。春、秋二季采挖未抽花莖植株的根，除去須根和泥沙，曬干[1]。主要成分有升麻素苷和5-O-甲基維斯阿米醇苷等。《中國藥典》(2015年版)規定升麻素苷和5-O-甲基維斯阿米醇苷為防風藥材質量控制的指標成分。防風配方顆粒是將防風飲片經現代制藥工藝提取、濃縮、干燥、制粒而成的顆粒劑。目前有關防風配方顆粒的工藝及質量標準研究尚未有報道，但配方顆粒研究前景廣闊。故本實驗通過正交試驗，利用HPLC測定升麻素苷和5-O-甲基維斯阿米醇苷的含量，并結合干浸膏得率作為質量指標，優選防風藥材水提取的最佳工藝，為中藥防風配方顆粒的質量標準研究提供參考。

1 儀器與材料

1.1 儀器 高效液相色譜儀(島津)；BP211D 型電子天平(德國 Sautoris 公司)；KQ-500DB型數控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)。

1.2 材料 升麻素苷對照品(批號：111522-201511 中國食品藥品檢定研究院)；5-O-甲基維斯阿米醇苷對照品(批號：111523-201509 中國食品藥品檢定研究院)；防風藥材(安國義通中藥材有限公司)，甲醇(色譜純)，水(超純水)。

2 方法與結果

2.1 配方顆粒的制備 稱取防風藥材，按優選的工藝條件提取，合并煎液，濃縮后干燥，得干浸膏粉，粉碎過3號篩，加入適量輔料，混勻，經過制粒、整粒，得防風配方顆粒。

2.2 高效液相色譜含量測定

2.2.1 色譜條件 十八硅烷鍵合硅膠為填充劑C18色譜柱( 4.6mm×250mm，5μm)，流動相：甲醇-水(40∶60)，流速1.0mL·min-1，檢測波長254nm，理論板數按升麻素苷峰計算應不低于2000。

2.2.2 對照品溶液的制備 精密稱取升麻素苷對照品3.12mg，5-O-甲基維斯阿米醇苷對照品2.84mg，加甲醇溶解并定容至50mL，分別制成62.4μg·mL-1和56.8μg·mL-1對照品溶液，備用。

2.2.3 供試品溶液的制備 取本品顆粒適量，研細，取約0.5g，精密稱定，置50mL錐形瓶中，精密加入80%甲醇20mL，稱定重量，超聲處理15min，取出，放冷，用80%甲醇補足減失重量，濾過，取續濾液，得供試品溶液。見圖1。

2.2.4 檢測波長的選擇 取升麻素苷和5-O-甲基維斯阿米醇苷對照品溶液在200～400nm進行全波長掃描，結果顯示在254nm處有最大吸收且靈敏度最高， 故確定其檢測波長254nm。

2.3 線性關系考察 精密吸取升麻素苷(62.4μg·mL-1)和5-O-甲基維斯阿米醇苷(56.8μg·mL-1)對照品溶液1.00mL、2.00mL、4.00mL、6.00mL、8.00mL、10.0mL，分別置10mL量瓶中，并加甲醇稀釋至刻度，搖勻，按2.2.1項下色譜條件測定，以峰面積為縱坐標，樣品含量為橫坐標，得回歸方程依次為Y=119530X+7436.2，R2=0.9997(n=6)，Y=121669X+ 4218.4,R2=0.9997(n=6)，結果表明升麻素苷在6.24～62.4 μg范圍、5-O-甲基維斯阿米醇苷在5.68～56.8μg范圍呈良好的線性關系。

2.4 精密度試驗 精密吸取升麻素苷和5-O-甲基維斯阿米醇苷對照品溶液10μL，連續進樣 6 次，按2.2.1項下色譜條件測定，計算峰面積的RSD為分別0.39%與0.45%，表明儀器精密度良好。

2.5 重復性試驗 精密稱取同一批樣品，按2.2.3項下方法制備供試品溶液，共6份，按2.2.1項下色譜條件測定，計算峰面積的RSD分別為0.44%與0.42%，表明該方法重復性良好。

2.6 穩定性試驗 精密取同一供試品溶液10μL，按0h、1h、2h、4h、8h、10h時間間隔，分別進樣分析，測定色譜峰面積。結果表明供試品溶液在10h內穩定性良好，其RSD分別為1.13%與1.11%。

2.7 加樣回收率試驗 精密稱取已知含量的防風配方顆粒樣品約0.25g，共6份，分別精密加入升麻素苷對照溶液10mL(濃度為62.4μg·mL-1)，或5-O-甲基維斯阿米醇苷對照品溶液6mL(濃度為56.8μg·mL-1)，按上述色譜條件測定，計算回收率，結果見表1、2。平均加樣回收率99.63%與99.75%，RSD為0.13%與1.04%，表明樣品回收率良好。

表1 升麻素苷加樣回收試驗結果

表2 5-O-甲基維斯阿米醇苷加樣回收試驗結果

3 提取工藝的正交試驗

3.1 正交設計 在預試驗基礎上，固定浸泡時間0.5 h，選擇加水量(A)、提取時間(B)、提取次數(C)作為考察因素。以升麻素苷和5-O-甲基維斯阿米醇苷的總含量和出膏率為評價指標。采用L9(34) 正交表設計，因素水平詳見表3。

表3 防風配方顆粒提取的因素與水平

3.2 實驗方法 取內蒙防風藥材9份，每份40 g，按表4設計的工藝條件進行提取，合并水煎煮提取液，濾過，水煎液均定容到1000mL容量瓶中，備用。從定容到1000mL的水煎液中吸取5mL至25mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度。用微孔濾膜濾過，取濾液，進樣，測定升麻素苷和5-O-甲基維斯阿米醇苷總含量。

3.3 正交試驗結果及方差分析 按上述實驗方法進行正交試驗得到9份供試品溶液，按照含量測定方法進行含量測定，并計算總含量。正交試驗結果見表4，方差分析結果見表5。

由直觀分析可知， 各因素影響提取效果的順序為C>B>A。方差分析表明因素C對提取工藝具有顯著性影響，其他因素則影響不明顯，考慮大生產節約成本等因素，最佳提取工藝條件為A1B1C3，即加10、8、6倍量水提取3次，每次0.5h。

表4 防風提取工藝正交設計與試驗結果表

表5 綜合評分方差分析

3.4 優選工藝的驗證試驗 按最佳提取工藝進行了3次驗證試驗，取防風藥材500g，結果升麻素苷質量分數分別為0.506%、0.509%、0.528%，5-O-甲基維斯阿米醇苷質量分數分別為0.357%、0.350%、0.381%，出膏率依次為41.9%、44.5%、43.8%， 說明該工藝穩定可行。因此，確定防風配方顆粒提取工藝為：加10、8、6倍量水提取3次，每次0.5h。

4 配方顆粒樣品含量測定

按照最優提取工藝，制備出防風配方顆粒。精密稱取防風配方顆粒約0.5 g，按2.2.3項下方法制備供試品溶液，按2.2.1項下色譜條件測定，計算升麻素苷質量分數分別為2.37、2.29、2.32 mg·g-1，5-O-甲基維斯阿米醇苷質量分數分別為1.31 、1.28、1.39mg·g-1，故暫定本品配方顆粒每1g含升麻素苷( C22H28O11)和5-O-甲基維斯阿米醇苷(C22H28O10)總量不得少于3.0 mg。

5 討論

對于原料藥材飲片的選擇，是中藥配方顆粒研制、生產、開發和應用等最根本的前提的前提條件，只有在確保了原料藥材的質量的基礎上，才能保證和提高穩定中藥配方顆粒的質量[2]。由于條件有限，本研究只收集了兩個不同產地的品種進行含量測定等一系列的對比考察研宄，通過研究發現兩個不同產地的品種含有效成分總含量差別不大。

防風配方顆粒的水提工藝直接關系到配方顆粒的質量，以出膏率和升麻素苷和5-O-甲基維斯阿米醇苷含量作為衡量指標，初步評價了工藝的提取效果，結果表明煎煮時間和加水量對工藝的影響較小，而煎煮次數對其二者的含量和出膏率有顯著的影響，是該飲片提取工藝的重要因素。目前由于防風配方顆粒樣品數量較少，有待于后續試驗數據的積累，制定了升麻素苷和5-O-甲基維斯阿米醇苷的限量范圍，使該制劑的質量更加穩定可靠，為有效控制防風配方顆粒的質量提供保證。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[S]. 北京:中國醫藥科技出版社, 2010: 239.

[2]涂瑤生，畢曉黎，羅文匯. 中藥配方顆粒的質量控制研究[J].世界科學技術中醫藥現代化思路與方法，2011,13(1)：41.

(編輯：程鵬飛)

2016-09-26

趙粉榮，女，碩士，工程師，從事中藥質量控制研究。E-mail：454962527@qq.com

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1007-8517(2016)23-0024-03