Folin-Ciocalteu法測(cè)定水果中多酚含量

李啟彭，寸鏡楠，趙仲霞，羅家剛，沈燕瓊

（1.昭通學(xué)院化學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院，云南省昭通 657000；2.昭通市農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全中心，云南省昭通 657000）

Folin-Ciocalteu法測(cè)定水果中多酚含量

李啟彭1，寸鏡楠1，趙仲霞1，羅家剛1，沈燕瓊2*

（1.昭通學(xué)院化學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院，云南省昭通 657000；2.昭通市農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全中心，云南省昭通 657000）

采用超聲波法提取昭通特色水果中的多酚，并用Folin-Ciocaltue法測(cè)定其含量。試驗(yàn)結(jié)果表明，紅玫瑰葡萄、紅富士蘋(píng)果、雪花梨和山楂的果皮和果實(shí)中多酚含量分別為11.1624、10.1081、26.3451、67.1485 mg·g-1和1.7511、3.7478、15.7872、19.7410 mg·g-1。該試驗(yàn)可為昭通特色水果的開(kāi)發(fā)及深加工提供理論依據(jù)。

超聲波法；Folin-Ciocaltue法；水果；多酚

多酚（polyphenol）又稱為植物單寧，廣泛存在于植物的皮、葉、果實(shí)以及根中［1-2］。該類化合物具有抗氧化、清除機(jī)體自由基、預(yù)防高血壓和冠心病等功效，被廣泛應(yīng)用于食品、藥品和醫(yī)藥等領(lǐng)域［3-6］。目前，多酚的提取方法主要有溶劑萃取法、超聲波法、微波法和超臨界萃取法等［7-9］。此外，多酚含量的測(cè)定方法有福林酚法、酒石酸亞鐵法和高錳酸鉀法等［10-12］。各種提取和測(cè)定方法均有利弊，需要根據(jù)不同的研究目的而采用不同的提取及測(cè)定方法。昭通市地處滇東北，素有“鎖鑰南滇，咽喉西蜀”之稱，該地區(qū)屬于高原季風(fēng)干燥型氣候，日照充足，有利于水果的生長(zhǎng)，很多昭通水果聞名省內(nèi)外，深受人們的喜愛(ài)。目前，只有少量的報(bào)道關(guān)于昭通特色水果中多酚的研究，然而系統(tǒng)研究各種特色水果中多酚的含量仍然需要［13-14］。因此，系統(tǒng)研究昭通各種特色水果中多酚的提取及含量測(cè)定方法，為昭通特色水果的開(kāi)發(fā)利用、深加工以及合理選擇膳食提供理論依據(jù)，具有重要的研究意義。

1 材料與方法

1.1 材料

供試水果有紅玫瑰葡萄、紅富士蘋(píng)果、山楂和雪花梨，均為昭通特色水果，購(gòu)買(mǎi)自昭通市農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)。

1.2 標(biāo)準(zhǔn)液配制

準(zhǔn)確稱取沒(méi)食子酸標(biāo)準(zhǔn)品5.0 mg，溶解于8.0 m L甲醇中，以蒸餾水定容至100 m L，搖勻備用，可得50.0 mg·L-1沒(méi)食子酸標(biāo)準(zhǔn)溶液（現(xiàn)配現(xiàn)用）。準(zhǔn)確吸取上述標(biāo)準(zhǔn)液1 m L于25 m L的容量瓶中，加入1 m L Folin-Ciocaltue試劑充分震蕩，再加入8 mL 50 g·L-1的Na2CO3溶液，充分搖勻，靜置45 min［13-14］。用紫外分光光度計(jì)在500～900 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)掃描測(cè)定其吸光度，并繪制其吸光度與波長(zhǎng)的關(guān)系圖，選擇最大吸收波長(zhǎng)。

1.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

分別吸取50 mg·L-1的沒(méi)食子酸標(biāo)準(zhǔn)溶液0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9 m L于25 m L的容量瓶中，依次加入80%甲醇1.0、0.9、0.8、0.7、0.6、0.5、0.4、0.3、0.2和0.1 m L，搖勻，再分別加入1 m L的Folin-Ciocaltue試劑充分震蕩后，依次加入8.0 m L的50 g·L-1Na2CO3溶液充分搖勻，靜置45 m in，在765 nm波長(zhǎng)處測(cè)定其吸光度［13-14］。

1.4 待測(cè)樣品的制備

將紅玫瑰葡萄、紅富士蘋(píng)果、山楂和雪花梨洗凈，分離果皮和果肉，然后在80℃恒溫烘箱中干燥24 h，冷卻后粉碎。分別稱取粉碎的4種水果的果皮樣品50 mg于圓底燒瓶中，加入5 mL 80%甲醇，在25～40℃及53 kHz超聲波提取40 min后過(guò)濾，在同等條件下重復(fù)2次，合并濾液，并用蒸餾水定容至100 m L備用［13-14］。分別稱取粉碎的4種水果的果肉1 000 mg于圓底燒瓶中，加入15 m L 80%甲醇，在25～40℃及53 kHz超聲提取40 m in后過(guò)濾，在相同條件下重復(fù)2次，合并濾液并用蒸餾水定容至250 m L備用。分別取上述4種水果的果皮和果肉提取液1 m L加入1 m L Folin-Ciocaltue試劑，充分震蕩，加入8.00 m L的50 g·L-1Na2CO3溶液，充分搖勻靜置45 min后，在765 nm波長(zhǎng)處測(cè)定其吸光度［13-14］。按上述方法重復(fù)3次，計(jì)算其相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差。

2 結(jié)果與分析

2.1 最大吸收波長(zhǎng)的選擇

用紫外分光光度計(jì)在波長(zhǎng)500～900 nm范圍內(nèi)掃描測(cè)定吸光度。圖1表明，標(biāo)準(zhǔn)液顯色反應(yīng)后最大吸收峰在765 nm左右。因此，以765 nm作為最大吸收波長(zhǎng)。

圖1 沒(méi)食子酸標(biāo)準(zhǔn)液的最大吸收波長(zhǎng)

2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立

在765 nm處測(cè)定系列標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光度，然后根據(jù)沒(méi)食子酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度和吸光度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。將上述數(shù)據(jù)進(jìn)行線性處理，得到回歸方程為：Y=0.126 46 X+0.055 42，R2=0.999 24（圖2）。

2.3 水果中多酚含量的測(cè)定

采用超聲波法提取昭通特色水果中的多酚，并以沒(méi)食子酸為標(biāo)準(zhǔn)溶液，F(xiàn)olin-Ciocaltue做顯色劑，在765 nm處測(cè)定其吸光度，代入線性回歸方程，計(jì)算出樣品中多酚的含量。表1顯示，紅玫瑰葡萄、紅富士蘋(píng)果、雪花梨和山楂的果皮和果肉中多酚含量分別為11.162 4、10.108 1、26.345 1、67.148 5 mg·g-1和1.751 1、3.747 8、15.787 2、19.741 0 mg·g-1。試驗(yàn)結(jié)果表明，不同水果的果肉和果皮中多酚的含量各不相同，且果皮的多酚含量高于果肉［13-15］。

圖2 沒(méi)食子酸標(biāo)準(zhǔn)液的標(biāo)準(zhǔn)曲線

表1 不同水果中多酚含量

3 小結(jié)

采用超聲波法和Folin-Ciocaltue法系統(tǒng)提取及測(cè)定昭通特色水果中的多酚。試驗(yàn)結(jié)果表明，昭通特色水果中都含有一定量的多酚，不同水果的果皮和果肉中多酚的含量各不相同。該方法可為昭通特色水果的開(kāi)發(fā)、深加工及合理選擇膳食提供理論依據(jù)。

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（責(zé)任編輯：張瑞麟）

O657.3

：B

：0528-9017（2016）12-2094-02

文獻(xiàn)著錄格式：李啟彭，寸鏡楠，趙仲霞，等.Folin-Ciocalteu法測(cè)定水果中多酚含量［J］.浙江農(nóng)業(yè)科學(xué)，2016，57（12）：2094-2096.

10.16178/j.issn.0528-9017.20161254

2016-06-01

昭通學(xué)院校級(jí)課題（2016xj35）

李啟彭（1987—），男，云南會(huì)澤人，講師，博士，研究方向?yàn)闊o(wú)機(jī)及分析化學(xué)，E-mail：83064313@qq.com。

沈燕瓊，E-mail：184696105@qq.com。