熊果酸通過(guò)調(diào)節(jié)miRNA-133a抑制肺癌A549細(xì)胞的遷移和侵襲

梁 敏， 陳 欣

(1浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬邵逸夫醫(yī)院下沙院區(qū)危重醫(yī)學(xué)科，浙江 杭州 310018； 2杭州市腫瘤醫(yī)院ICU，浙江 杭州 310002)

熊果酸通過(guò)調(diào)節(jié)miRNA-133a抑制肺癌A549細(xì)胞的遷移和侵襲

梁 敏1△， 陳 欣2

(1浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬邵逸夫醫(yī)院下沙院區(qū)危重醫(yī)學(xué)科，浙江 杭州 310018；2杭州市腫瘤醫(yī)院ICU，浙江 杭州 310002)

目的： 探討熊果酸(ursolic acid，UA)是否通過(guò)調(diào)節(jié)miRNA-133a影響肺癌A549細(xì)胞的遷移和侵襲能力。方法:MTT法檢測(cè)細(xì)胞活力；real-time PCR法檢測(cè)UA干預(yù)和轉(zhuǎn)染miRNA-133a mimics及inhibitor后細(xì)胞中miRNA-133a的表達(dá)；劃痕愈合實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞的遷移能力；Transwell小室實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞侵襲能力。結(jié)果:UA可顯著抑制肺癌A549細(xì)胞的活力(P<0.05)，隨著給藥劑量的增加，UA對(duì)肺癌細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制率顯著上升，并呈一定的劑量依賴關(guān)系，UA作用于肺癌A549細(xì)胞24 h后的IC50為31.04 μmol/L。在不同濃度的UA作用下，肺癌A549細(xì)胞的遷移和侵襲能力也受到明顯抑制(P<0.01)。Real-time PCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，在10、20 μmol/L UA作用24 h后，A549細(xì)胞內(nèi)miRNA-133a的表達(dá)顯著高于溶劑對(duì)照組(P<0.01)；細(xì)胞瞬時(shí)轉(zhuǎn)染miRNA-133a mimics后可上調(diào)A549細(xì)胞中miRNA-133a的表達(dá)，而轉(zhuǎn)染miRNA-133a inhibitor后下調(diào)A549細(xì)胞中miRNA-133a的表達(dá)(P<0.01)。 肺癌A549細(xì)胞轉(zhuǎn)染miRNA-133a mimics后，細(xì)胞活力、遷移和侵襲能力也受到明顯抑制(P<0.01)；相反，轉(zhuǎn)染miRNA-133a inhibitor后，細(xì)胞活力、遷移和侵襲能力明顯增強(qiáng)(P<0.01)。結(jié)論:UA能抑制肺癌A549細(xì)胞活力、遷移和侵襲，其作用機(jī)制可能是通過(guò)上調(diào)miRNA-133a介導(dǎo)來(lái)實(shí)現(xiàn)的。

熊果酸; miRNA-133a; 細(xì)胞遷移; 細(xì)胞侵襲

熊果酸(ursolic acid，UA)是存在于天然植物中的一種五環(huán)三萜類化合物，最近研究發(fā)現(xiàn)，熊果酸能抑制多種腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)，包括乳腺癌、肺癌、白血病、肝癌、結(jié)腸癌、皮膚癌等[1]。目前，肺癌已成為我國(guó)發(fā)病率最高的癌癥之一，在肺癌的許多分類中，非小細(xì)胞肺癌(non-small-cell lung cancer，NSCLC)約占肺癌總數(shù)的80%～85%，而且侵襲和轉(zhuǎn)移是其死亡最常見(jiàn)的原因[2]。miRNA 是一類機(jī)體內(nèi)源性表達(dá)的非編碼小分子RNA，能夠在轉(zhuǎn)錄后調(diào)節(jié)基因表達(dá)，從而影響多種生物學(xué)過(guò)程，包括細(xì)胞的增殖、分化、凋亡、發(fā)育等。越來(lái)越多的研究報(bào)道表明，miRNA與腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移有關(guān)。如Lin等[3]發(fā)現(xiàn)miR-154能通過(guò)靶向ZEB2抑制非小細(xì)胞肺癌的遷移和侵襲；Lai等[4]報(bào)道m(xù)iR-133a能抑制胃癌的增殖、遷移和誘導(dǎo)凋亡；Liao等[5]研究發(fā)現(xiàn)在H-1299細(xì)胞中苦參堿能通過(guò)調(diào)節(jié)miR-133a的表達(dá)，從而抑制細(xì)胞的遷移和侵襲。文獻(xiàn)已報(bào)道熊果酸能抑制肺癌細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲[6]。但其機(jī)制是否與肺癌A549細(xì)胞內(nèi)的miR-133a有關(guān)，尚無(wú)文獻(xiàn)報(bào)道。因此，本研究觀察熊果酸是否通過(guò)調(diào)節(jié)miR-133a影響肺癌A549細(xì)胞的遷移和侵襲能力，從轉(zhuǎn)錄后調(diào)控水平為熊果酸治療肺癌提供可能的理論依據(jù)。

材 料 和 方 法

1 材料

UA和二甲基亞砜(DMSO)購(gòu)自Sigma；Has-miR-133a mimics和inhibitor引物序列購(gòu)自上海吉瑪公司；非小細(xì)胞肺癌A549細(xì)胞購(gòu)自中國(guó)科學(xué)院上海細(xì)胞所；四甲基偶氮唑鹽(MTT)購(gòu)于碧云天生物公司；胎牛血清、胰蛋白酶和RPMI-1640 培養(yǎng)基購(gòu)自Gibco；Lipofectamine 2000購(gòu)自Invitrogen。iMARK型全自動(dòng)酶標(biāo)儀、分光光度計(jì)和熒光定量PCR儀(Bio-Rad)；倒置熒光顯微鏡(Leica)。

2 主要方法

2.1 細(xì)胞培養(yǎng) A549細(xì)胞于含10%胎牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)液中培養(yǎng)，置于37 ℃、5% CO2飽和濕度培養(yǎng)箱中。細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)良好，每3天傳代1次。取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

2.2 細(xì)胞的瞬時(shí)轉(zhuǎn)染 轉(zhuǎn)染前1 d，接種適量的細(xì)胞于不含抗生素的培養(yǎng)基中，根據(jù)脂質(zhì)體Lipo2000的說(shuō)明書進(jìn)行細(xì)胞的轉(zhuǎn)染。分別用適量的Opti-MEM無(wú)血清培養(yǎng)液稀釋脂質(zhì)體和miR-133a mimics和inhibitor，室溫孵育5 min后混合，靜置20 min，將混合液加入到每孔中，輕輕晃動(dòng)培養(yǎng)板混勻液體。將培養(yǎng)板放入培養(yǎng)籍中，待6 h后替換為原培養(yǎng)基，繼續(xù)在培養(yǎng)箱培養(yǎng)。

2.3 MTT法檢測(cè)細(xì)胞活力 取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞以5.0×107/L的濃度接種于96孔細(xì)胞培養(yǎng)板中，每孔100 μL，置于37 ℃、5% CO2飽和濕度培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h，待細(xì)胞貼壁后，加入不同濃度的UA(5、10、20、30和40 μmol/L)，以DMSO溶劑組為對(duì)照組。于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h后，每孔加入20 μL MTT(2 g/L)，繼續(xù)孵育4 h后，終止培養(yǎng)；對(duì)于miRNA-133a mimics和inhibitor細(xì)胞瞬時(shí)轉(zhuǎn)染，按上述轉(zhuǎn)染方法轉(zhuǎn)染48 h后，每孔加入20 μL MTT(2 g/L)，繼續(xù)孵育4 h后，終止培養(yǎng)。最后，吸去培養(yǎng)液，每孔加DMSO 150 μL，用酶標(biāo)儀在490 nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔吸光度(A)值。每個(gè)濃度設(shè)平行重復(fù)6孔，重復(fù)實(shí)驗(yàn)3次。

2.4 Real-time PCR檢測(cè)miR-133a的表達(dá) 各組A549細(xì)胞經(jīng)UA處理和細(xì)胞瞬時(shí)轉(zhuǎn)染miRNA-133a mimics和inhibitor后，按照TRIzol說(shuō)明書中步驟抽提細(xì)胞總RNA，按miRNA逆轉(zhuǎn)錄試劑盒說(shuō)明配制逆轉(zhuǎn)錄試劑，逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA，將合成的cDNA按real-time PCR說(shuō)明書配制反應(yīng)體系，所有反應(yīng)均設(shè)立3個(gè)復(fù)孔。PCR反應(yīng)步驟為95 ℃ 10 min；95 ℃ 15 s，60 ℃ 1 min，共40個(gè)循環(huán)。反應(yīng)以U6為內(nèi)參照。miRNA-133a 引物序列為5’-TTTGGTCCCCTTCAACCAGC-3’。記錄每個(gè)反應(yīng)管中標(biāo)本的Ct值，實(shí)驗(yàn)結(jié)果采用相對(duì)定量法進(jìn)行分析，以2-ΔΔCt表示。

2.5 劃痕愈合實(shí)驗(yàn) 將A549細(xì)胞接種6孔板，待細(xì)胞鋪滿孔底，用10 μL槍頭小心在孔底劃痕，PBS清洗3次，加入含有2.5%低血清的新鮮培養(yǎng)基，倒置顯微鏡下拍照，沿劃痕邊緣等間距取3處測(cè)量劃痕寬度，取平均值。然后加入不同濃度的UA及轉(zhuǎn)染miRNA-133a mimics和inhibitor，24 h后繼續(xù)拍照，在相同觀察點(diǎn)測(cè)量劃痕寬度。劃痕愈合率(%)=(0 h劃痕寬度-24 h劃痕寬度)/0 h劃痕寬度×100%。

2.6 Transwell小室實(shí)驗(yàn) 取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期A549細(xì)胞，消化細(xì)胞于無(wú)血清培養(yǎng)基，制成8×107/L密度的細(xì)胞懸液，在Transwell 小室的上室中加入含有不同濃度UA及轉(zhuǎn)染miRNA-133a mimics和inhibitor的細(xì)胞懸液200 μL，下室中加入600 μL含10% 胎牛血清的培養(yǎng)基，每組設(shè)置3個(gè)復(fù)孔，于37 ℃、5% CO2條件下培養(yǎng)24 h。取出Transwell小室，用棉簽輕輕擦去基質(zhì)膠和上室未穿膜細(xì)胞，甲醇固定10 min，0.1% 結(jié)晶紫染色40 min。100倍鏡下隨機(jī)選取5個(gè)視野計(jì)數(shù)穿膜細(xì)胞數(shù)目，取平均值。

3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

所有實(shí)驗(yàn)均重復(fù)3次，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(mean±SD)表示，應(yīng)用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。多組間比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較應(yīng)用Bonferroni檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

1 熊果酸抑制肺癌A549細(xì)胞的活力

隨著給藥劑量的增加，UA對(duì)肺癌細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制率顯著上升，且呈一定的劑量依賴關(guān)系，在給藥24 h后，UA的IC50為31.04 μmol/L。結(jié)果表明UA可以顯著抑制肺癌A549細(xì)胞的活力，見(jiàn)圖1。

Figure 1.The effect of ursolic acid on cell viability in different groups after 24 h treatment. Mean±SD.n=3.**P<0.01vs0 μmol/L.

圖1 不同濃度的熊果酸對(duì)肺癌A549細(xì)胞活力的影響

2 熊果酸抑制肺癌A549細(xì)胞的遷移和侵襲

劃痕愈合實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:與溶劑對(duì)照DMSO組相比，在5、10和20 μmol/L濃度的UA作用24 h后，劃痕愈合率呈現(xiàn)不同程度地降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。Transwell小室實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：與溶劑對(duì)照DMSO組相比，5、10和20 μmol/L的UA作用組侵襲至Transwell小室濾膜下表面的細(xì)胞數(shù)分別為332±10、296±8和262±10，明顯低于溶劑對(duì)照組(373±10)。這些結(jié)果表明UA可以顯著抑制肺癌A549細(xì)胞的遷移和侵襲,見(jiàn)圖2。

3 熊果酸上調(diào)肺癌A549細(xì)胞miRNA-133a的表達(dá)

如圖3所示，與溶劑對(duì)照DMSO組相比，在5 μmol/L的UA作用24 h后A549細(xì)胞的miRNA-133a表達(dá)的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性。在10、20 μmol/L的UA作用24 h后，A549細(xì)胞的miRNA-133a表達(dá)顯著高于溶劑DMSO對(duì)照組，表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。這說(shuō)明UA能上調(diào)A549細(xì)胞內(nèi)miRNA-133a的表達(dá)。

Figure 2.The effect of ursolic acid on the migratory and invasive abilities of A549 cells (×100). A: the result of wound healing assay; B: the result of Transwell assay. Mean±SD.n=3.**P<0.01vs0 μmol/L.

圖2 劃痕愈合實(shí)驗(yàn)和Transwell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)熊果酸對(duì)肺癌A549細(xì)胞遷移和侵襲能力的影響

Figure 3.The expression of miRNA-133a in the lung cancer A549 cells after treated with ursolic acid. Mean±SD.n=3.**P<0.01vs0 μmol/L.

圖3 定量PCR方法檢測(cè)熊果酸作用后A549細(xì)胞內(nèi)mi-RNA-133a表達(dá)量的變化

4 miRNA-133a在肺癌A549細(xì)胞中轉(zhuǎn)染效率的測(cè)定

與轉(zhuǎn)染的陰性對(duì)照(negative control, NC)組相比，肺癌A549細(xì)胞轉(zhuǎn)染miRNA-133a mimics 48 h后，細(xì)胞中miRNA-133a的表達(dá)水平是陰性對(duì)照組的(2.12±0.11)倍，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，而轉(zhuǎn)染miRNA-133a inhibitor 48 h后，與NC組相比，可明顯抑制細(xì)胞中miRNA-133a的表達(dá)水平，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。這說(shuō)明肺癌A549細(xì)胞瞬時(shí)轉(zhuǎn)染miRNA-133a mimics后可顯著提高細(xì)胞中miRNA-133a的表達(dá)，而inhibitor可顯著抑制細(xì)胞中miRNA-133a的表達(dá)，見(jiàn)圖4。

5 miRNA-133a對(duì)肺癌A549細(xì)胞活力的影響

miRNA-133a轉(zhuǎn)染肺癌A549細(xì)胞48 h后，與NC組相比，miRNA-133a mimics能明顯抑制A549的細(xì)胞活力，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。相反，與NC組相比，miRNA-133a inhibitor能明顯增加A549的細(xì)胞活力，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。這說(shuō)明上調(diào)miRNA-133a表達(dá)后能明顯抑制肺癌A549細(xì)胞的活力，而下調(diào)miRNA-133a表達(dá)后能明顯增加A549細(xì)胞活力，見(jiàn)圖5。

Figure 4.The expression of miRNA-133a in the lung cancer A549 cells after transfected with miRNA-133a mimics or inhibitor. NC: negative control. Mean±SD.n=3.**P<0.01vsNC.

圖4 定量PCR方法檢測(cè)瞬時(shí)轉(zhuǎn)染miRNA-133a mimics或inhibitor后A549細(xì)胞中miRNA-133a表達(dá)量的變化

Figure 5.The viability of lung cancer A549 cells after transfection with miRNA-133a mimics or inhibitor detected by MTT assay. NC: negative control. Mean±SD.n=3.**P<0.01vsNC.

圖5 MTT 法檢測(cè) miRNA-133a mimics或inhibitor對(duì)肺癌 A549 細(xì)胞活力的影響

6 miRNA-133a對(duì)肺癌A549細(xì)胞遷移和侵襲的影響

劃痕愈合實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:miRNA-133a mimics組的劃痕愈合率較NC組明顯下降，而miRNA-133a inhibitor組的劃痕愈合率較NC組明顯增強(qiáng)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。Transwell小室實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:miRNA-133a mimics組侵襲至Transwell小室濾膜下表面的細(xì)胞數(shù)較NC組明顯減少，而miRNA-133a inhibitor組侵襲至Transwell小室濾膜下表面的細(xì)胞數(shù)較NC組明顯增多，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01),見(jiàn)圖6。

討 論

肺癌是當(dāng)今全球危害性最大的惡性腫瘤之一，其發(fā)病率和病死率在世界范圍內(nèi)呈持續(xù)上升趨勢(shì)。轉(zhuǎn)移是導(dǎo)致肺癌臨床治療失敗和患者死亡的主要原因[7]。盡管治療腫瘤的方法不斷發(fā)展與更新，新的抗腫瘤藥物層出不窮，但肺癌患者長(zhǎng)期生存率并沒(méi)有明顯提高[8]。因此尋找一種抑制腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移的新方法和策略已成為醫(yī)藥界的一個(gè)重要課題。熊果酸是存在于天然植物中的一種三萜類化合物[9]，近年來(lái)的研究發(fā)現(xiàn)，熊果酸具有抗炎、抗微生物、降血糖、調(diào)血脂、抗動(dòng)脈粥樣硬化、抗?jié)儭⒖鼓[瘤等多種藥理作用，具有極其重要的研究?jī)r(jià)值和應(yīng)用前景[10]。

miRNA是一類新近發(fā)現(xiàn)的長(zhǎng)度約為22個(gè)核昔酸的非編碼單鏈小分子RNA。研究發(fā)現(xiàn)，miRNA 在腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移過(guò)程中發(fā)揮著重要的作用。國(guó)內(nèi)外學(xué)者應(yīng)用生物芯片技術(shù)，在多種腫瘤組織中篩選出表達(dá)異常miRNA，并對(duì)其功能和作用靶點(diǎn)進(jìn)行了一系列的研究。miRNA-133a是近年來(lái)研究比較集中的miRNA之一。最近的研究表明，miRNA-133a通過(guò)對(duì)靶基因的調(diào)控參與了腫瘤細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲過(guò)程，如miRNA-150-5p和miRNA-133a抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖和遷移通過(guò)靶向膜型基質(zhì)金屬蛋白酶1[11]；miRNA-133a通過(guò)影響靶基因IGF-1R抑制了骨肉瘤細(xì)胞增殖和侵襲[12]；miRNA-133a可通過(guò)fascin 1抑制結(jié)腸癌細(xì)胞的侵襲[13]。

Figure 6.The effect of miRNA-133a mimics or inhibitor on the migratory and invasive abilities of the A549 cells (×100). A: the results of wound healing assay; B: the results of Transwell assay. NC: negative control. Mean±SD.n=3.**P<0.01vsNC.

圖6 劃痕愈合實(shí)驗(yàn)和Transwell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)miRNA-133a mimics或inhibitor對(duì)肺癌A549細(xì)胞遷移和侵襲能力的影響

文獻(xiàn)表明，熊果酸具有非常廣泛的轉(zhuǎn)錄抑制活性。Wang等[14]體外實(shí)驗(yàn)表明，熊果酸能下調(diào)三磷酸腺苷結(jié)合轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白G超家族成員2(adenosine triphosphate-binding cassette superfamily G member 2，ABCG2)的表達(dá)，從而抑制卵巢癌細(xì)胞的增殖和逆轉(zhuǎn)耐藥。Kim等[15]發(fā)現(xiàn)熊果酸在肺癌細(xì)胞中發(fā)揮抗腫瘤作用靶向于牛痘苗相關(guān)激酶1(vaccinia-related kinase 1，VRK1)。Li等[16]報(bào)道熊果酸在誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞凋亡，ROCK/PTEN信號(hào)通路起了關(guān)鍵作用。Wang等[17]的研究表明熊果酸抑制結(jié)腸癌細(xì)胞的生長(zhǎng)通過(guò)STAT3信號(hào)通路。然而，熊果酸是否能夠抑制人RNA 組中另外一個(gè)重要組成部分miRNA的轉(zhuǎn)錄，遺憾的是國(guó)內(nèi)外關(guān)于這個(gè)問(wèn)題的研究報(bào)道較少。熊果酸抑制肺癌細(xì)胞的遷移和侵襲是否通過(guò)調(diào)控miRNA分子來(lái)實(shí)現(xiàn)，我們?cè)诒緦?shí)驗(yàn)中進(jìn)行了初步探討。在本研究中，熊果酸可以顯著抑制肺癌A549細(xì)胞的增殖，其抑制率呈一定的劑量依賴關(guān)系，同時(shí)熊果酸也能抑制肺癌A549細(xì)胞的遷移和侵襲能力。Real-time PCR結(jié)果顯示，經(jīng)熊果酸作用后，肺癌A549細(xì)胞miRNA-133a表達(dá)量顯著升高。因此，我們猜測(cè)熊果酸抑制肺癌的增殖、遷移和侵襲極有可能是通過(guò)上調(diào)miRNA-133a發(fā)揮抗腫瘤的作用。為了驗(yàn)證我們的猜想，我們?cè)诜伟〢549細(xì)胞中轉(zhuǎn)染了miRNA-133a的模擬物和抑制物，結(jié)果顯示miRNA-133a的模擬物能抑制肺癌細(xì)胞的活力、遷移和侵襲，而miRNA-133a的抑制物能促進(jìn)肺癌細(xì)胞的活力、遷移和侵襲。

綜上所述，本實(shí)驗(yàn)初步研究表明熊果酸作為一種天然存在的化合物能明顯抑制肺癌A549細(xì)胞的活力、遷移和侵襲，其作用機(jī)制可能是通過(guò)上調(diào)miRNA-133a表達(dá)來(lái)發(fā)揮抗遷移和侵襲的作用，為熊果酸應(yīng)用于肺癌的臨床治療提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

[1] 王 博， 武利強(qiáng)， 葉寶東， 等. 白花蛇舌草熊果酸誘導(dǎo)白血病耐藥 K562/ADM細(xì)胞凋亡及其作用機(jī)理的研究[J]. 中華中醫(yī)藥學(xué)刊, 2013, 31(4): 921-924.

[2] 柳悄然，張?jiān)谠疲跁悦鳎? 冬凌草甲素對(duì)人肺癌 NCI-H460 細(xì)胞侵襲和遷移的影響[J]. 中國(guó)病理生理雜志, 2015, 31(3):452-456.

[3] Lin X, Yang Z, Zhang P, et al. miR-154 inhibits migration and invasion of human non-small cell lung cancer by targeting ZEB2[J]. Oncol Lett, 2016, 12(1):301-306.

[4] Lai C, Chen Z, Li R. MicroRNA-133a inhibits proliferation and invasion, and induces apoptosis in gastric carcinoma cells via targeting fascin actin-bundling protein 1[J]. Mol Med Rep, 2015, 12(1):1473-1478.

[5] Liao H, Zhao X, Qu J, et al. Matrine suppresses invasion and metastasis of NCI-H1299 cells by enhancing micro-RNA-133a expression[J]. Int J Clin Exp Med, 2015, 8(7):10714-10722.

[6] Huang CY, Lin CY, Tsai CW, et al. Inhibition of cell proliferation, invasion and migration by ursolic acid in human lung cancer cell lines[J]. Toxicol In Vitro, 2011, 25(7):1274-1280.

[7] 劉志東， 許紹發(fā)， 肖 寧， 等. IL-8和MMP-9在非小細(xì)胞肺癌患者組織及血清中表達(dá)水平的研究[J]. 中國(guó)肺癌雜志, 2010, 13(8):795-802.

[8] 任維維， 米登海， 李 征， 等. 非小細(xì)胞肺癌紫杉醇類聯(lián)合順鉑同步或序貫放化療對(duì)比的Meta分析[J]. 中華腫瘤防治雜志, 2013, 20(5):377-382.

[9] 畢娟娟， 何 林， 余 音， 等. 自噬在熊果酸誘導(dǎo)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞損傷中的作用[J]. 中國(guó)病理生理雜志, 2012, 28(4):601-607.

[10]張明發(fā)， 沈雅琴. 齊墩果酸和熊果酸調(diào)血脂、抗肥胖藥理作用研究進(jìn)展[J].藥物評(píng)價(jià)研究, 2015, 38(1): 90-96.

[11]Sakr M, Takino T, Sabit H, et al. miR-150-5p and miR-133a suppress glioma cell proliferation and migration through targeting membrane-type-1 matrix metalloprotei-nase[J]. Gene, 2016, 587(2): 155-162.

[12]Chen G, Fang T, Huang Z, et al. MicroRNA-133a inhi-bits osteosarcoma cells proliferation and invasion via targeting IGF-1R[J]. Cell Physiol Biochem, 2016, 38(2):598-608.

[13]Zheng K, Liu W, Liu Y, et al. MicroRNA-133a suppresses colorectal cancer cell invasion by targeting Fascin1[J]. Oncol Lett, 2015, 9(2):869-874.

[14]Wang WJ, Sui H, Qi C, et al. Ursolic acid inhibits proliferation and reverses drug resistance of ovarian cancer stem cells by downregulating ABCG2 through suppressing the expression of hypoxia-inducible factor-1αinvitro[J]. Oncol Rep, 2016, 36(1):428-440.

[15]Kim SH, Ryu HG, Lee J, et al. Ursolic acid exerts anti-cancer activity by suppressing vaccinia-related kinase 1-mediated damage repair in lung cancer cells[J]. Sci Rep, 2015, 5:14570.

[16]Li R, Wang X, Zhang XH, et al. Ursolic acid promotes apoptosis of SGC-7901 gastric cancer cells through ROCK/PTEN mediated mitochondrial translocation of cofilin-1[J]. Asian Pac J Cancer Prev, 2014, 15(22): 9593-9597.

[17]Wang W, Zhao C, Jou D, et al. Ursolic acid inhibits the growth of colon cancer-initiating cells by targeting STAT3[J]. Anticancer Res, 2013, 33(10): 4279-4284.

(責(zé)任編輯： 盧 萍， 羅 森)

Ursolic acid inhibits migration and invasion of human lung cancer A549 cells by targeting mi

RNA-133aLIANG Min1, CHEN Xin2

(1DepartmentofIntensiveCareUnit,XiashaCampus,SirRunRunShawHospitalAffiliatedtoSchoolofMedicine,ZhejiangUniversity,Hangzhou310018,China;2DepartmentofIntensiveCareUnit,HangzhouTumorHospital,Hangzhou310002,China.E-mail:minl012@163.com)

AIM: To investigate the effects of ursolic acid (UA) on the migration and invasion of human lung cancer cell line A549, and to explore its mechanism. METHODS: The cell viability was detected by MTT assay. The expression of miRNA-133a was detected in the A549 cells treated with UA by real-time PCR. The miRNA-133a mimics and inhibitor were transfected into the A549 cells, and the transfection efficiency was analyzed by real-time PCR. The cell migratory and invasive abilities were determined by wound healing and Transwell methods, respectively. RESULTS: The viability of the human lung cancer A549 cells was significantly inhibited by UA in a dose-dependent manner (P<0.05). IC50of UA (24 h) for lung cancer A549 cells was 31.04 μmol/L. UA treatment significantly inhibited the migratory and invasive abilities of A549 cells in a concentration-dependent manner, accompanied by significantly elevation of miRNA-133a expression. The mimics and inhibitor of miRNA-133a significantly upregulated and downregulated the expression of miRNA-133a in the transfected A549 cells, respectively. In addition, the viability of the A549 cells was decreased extremely after tansfected with the miRNA-133a mimics (P<0.01), so did the results of the cell migration and invasion test. The A549 cells tansfected with the miRNA-133a inhibitor showed an opposite changes of the cell viability, migration and invasion. CONCLUSION: UA inhibited the viability, migration and invasion of lung cancer A549 cells by elevating the expression of miRNA-133a.

Ursolic acid; miRNA-133a; Cell migration; Cell invasion

1000- 4718(2016)12- 2239- 06

2016- 08- 30

2016- 00- 00

R730.23

A

10.3969/j.issn.1000- 4718.2016.12.019

雜志網(wǎng)址： http://www.cjpp.net

△通訊作者 Tel: 0571-87887109; E-mail: minl012@163.com