自制棉酚餌料對小白鼠的抗生育作用

摘要：為了探討棉酚對小白鼠生殖功能的影響，本試驗將30只健康小白鼠（雌、雄各半），隨機分為3組，每組10只（雌雄各半），對照組飼喂基礎餌料，試驗1組飼喂添加1.0%的棉酚的基礎餌料，試驗2組飼喂添加0.5%溴敵隆的基礎餌料，試驗結束后計算適口性，睪丸、卵巢臟器系數(shù)，制作睪丸、卵巢組織學切片，統(tǒng)計合籠后的產仔情況。結果表明，在適口性方面，添加1.0%棉酚的混合餌料比添加0.5%溴敵隆的混合餌料要好；試驗1組，小鼠的生精小管的管壁厚度比對照組薄（P<0.01），管腔直徑大。試驗2組小鼠的生精小管管壁管，管腔直徑與對照組相比顯著變小（P<0.05）。配對以后試驗1組小鼠的幼仔個數(shù)少于對照組。結果表明，棉酚對小鼠精巢有影響，影響生精小管管壁直徑，精子數(shù)量，并且降低了雌鼠所懷幼仔個數(shù)。說明棉酚能起到降低了雄性小鼠的生育能力的作用。

關鍵詞：棉酚；適口性；臟器系數(shù)；精巢

中圖分類號：TQ645.9+7 文獻標識碼：A 文章編號：0439-8114（2016）13-3402-03

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2016.13.034

植物不育劑是由具有抗生育作用的天然植物中的提取物配制而成，用不育劑配制的混合餌料，對雌雄鼠生殖機能均有一定的破壞性，起到了阻斷生殖的作用，又不污染環(huán)境和破壞生態(tài)平衡。所以近年來選用植物不育劑制作環(huán)保型鼠藥越來越受到人們的重視。棉酚是棉子、棉殼、棉子餅及棉粕中含有的一種有毒物質，它是萘的衍生物。在動物的餌料中加入少量的棉酚，并不會引發(fā)中毒，但加入大量棉酚，在豬、牛和羊中有中毒的記載[1]。游離棉酚的中毒量與餌料中蛋白質水平、亞鐵離子水平及鈣離子水平有關[1]。棉酚對雄性大鼠有抗生育作用，但對大鼠的交配行為及副性腺的功能均無明顯的影響，亦不改變大鼠及猴血漿中睪酮的含量[2]。但影響抗生育的機理有待于研究。

本試驗以小白鼠作為試驗動物，并且喂以配有棉酚的自制餌料飼喂小白鼠，記錄攝食量，體重，計算適口性，臟器系數(shù)，用組織學方法研究精巢和卵巢組織結構的變化，觀察小鼠懷幼崽個數(shù)。試驗目的是通過棉酚研究出植物源的無公害的滅鼠餌料，達到對田間、林地害鼠種群的調控。

1 材料與方法

1.1 試驗動物

30只昆明小白鼠源于西安醫(yī)學院動物實驗中心，體重為14～20 g。隨機分為3組，每組10只，雌、雄各半，分開放置于小鼠鼠籠。

1.2 配制混合餌料

基礎餌料的配制：玉米35%；麩皮22%；豆渣24%；鹽1%；骨粉1%；面粉17%。基餌為對照組餌料。試驗1組在基餌中添加1.0%的棉酚（購自西安慈緣生化科技有限公司）；試驗2組在基餌中添加0.5%溴敵隆（購自陜西先農生物科技有限公司）。各組餌料固定為餅狀烘干待用。

1.3 試驗方法

1.3.1 加藥飼養(yǎng) 每天每只飼喂基餌或混合餌料10 g，自由飲水。一周換一次墊料，換墊料時稱量所剩餌料的重量，試驗期共30 d，計算不同餌料對小白鼠日攝食量的影響，日攝食量（g）=（10×30-剩余餌料）÷30。

1.3.2 第一部分

1.3.2.1 臟器系數(shù) 30 d后，從3組中每組雌雄各選2只，共12只，稱重，20%烏來糖腹腔麻醉，經左心室輸入0.1 mol/L生理鹽水磷酸緩沖液100～150 mL（pH 7.4），剪破右心房以使血液流出，再輸入4%多聚甲醛的0.1 mol/L磷酸緩沖液300 mL（pH 7.4），立即取雙側睪丸和卵巢，測臟器系數(shù)。臟器系數(shù)=雙側睪丸或卵巢（g）/體重（g）。

1.3.2.2 組織學切片 另一側睪丸和卵巢置于Bouin’s液中固定，做冰凍切片。切片厚度8 μm，H.E染色，在顯微鏡下觀察并測量雄性各組同一橫截面生精小管管徑、生殖上皮厚度。觀察并測量卵巢中黃體的面積。

1.3.3 第二部分 30 d后，將剩余的小鼠合籠并重新分為3組（每組雌、雄鼠各3只），對照組：飼喂基餌；試驗1組：飼喂1.0%棉酚混合餌料；試驗2組：飼喂0.5%的溴敵隆。合籠后均以正常餌料喂養(yǎng)，觀察雌性個體的產仔潛伏期和產仔數(shù)量。

1.4 統(tǒng)計分析

用SPSS10.0軟件系統(tǒng)對日進食量、臟器系數(shù)、生精小管管徑、生殖上皮厚度、黃體的大小、產仔潛伏期和產仔數(shù)量進行統(tǒng)計分析，數(shù)據(jù)以平均值±標準誤（x±sd）來表示，根據(jù)Non-parametric test，產仔潛伏期和產仔數(shù)量為非正態(tài)分布，因而用Mann-Whitney U test，其他為正態(tài)分布，用Independent-Samples T test，P<0.05時表示兩組數(shù)據(jù)具有統(tǒng)計學意義。

2 結果與分析

2.1 適口性分析

由表1可知，與對照組相比，試驗1組雌、雄小白鼠日攝食量差異不顯著（P>0.05），而試驗2組的日攝食量均極顯著小于對照組（P<0.01）。在一定程度上攝食量與適口性是呈正相關的，所以可得知添加1.0%棉酚的混合餌料的適口性比添加0.5%溴敵隆的混合餌料要好。

2.2 小鼠臟器指數(shù)

由表2可知，試驗1組的睪丸臟器系數(shù)與對照組之間差異不顯著（P>0.05）。試驗2組的睪丸臟器系數(shù)極顯著小于對照組（P<0.01）。由表3可知，雌性試驗1組卵巢臟器系數(shù)與對照組之間差異不顯著（P>0.05）。雌性試驗2組卵巢臟器系數(shù)極顯著小于對照組（P<0.01）。

2.3 混合餌料對睪丸、卵巢結構的影響

由圖1可知，光鏡下觀察到對照組生精小管管壁完整，管壁較厚。間質中可見單個或成群地間質細胞。試驗1組和試驗2組生殖上皮厚度較薄，睪丸間質增大，間質細胞較為少見。試驗1組和試驗2組小鼠的生精小管管腔直徑比對照組極顯著性增大。試驗1組和試驗2組小鼠的管壁厚度與對照組相比極顯著或顯著變薄。對照組雌性小鼠和試驗組卵巢中發(fā)育成熟的卵泡均較多，但試驗2組黃體萎縮，結構模糊。試驗1組雌性小鼠和對照組無顯著性差異，試驗2組雌性小鼠黃體最大橫截面積極顯著低于對照組。

2.4 產仔情況

由表4可知，試驗1組的產仔數(shù)明顯比對照組少（P=0.01）。試驗2組配對后死亡，所以無產仔數(shù)。

3 討論

用含棉酚的混合餌料飼養(yǎng)的小鼠日攝食量與對照組之間沒有明顯差異，表明混合餌料并不影響到小鼠的進食量，有較好的適口性。而食用溴敵隆混合餌料的小鼠日進食量比對照組明顯減小，表明溴敵隆混合餌料適口性差。食用混合餌料的雄性睪丸臟器系數(shù)和雌性卵巢臟器系數(shù)明顯比對照組小，說明棉酚作用在動物體上一段時間后睪丸和卵巢的相對質量減小了，但質量的減少不僅與藥物有關，可能與適口性也有關。

有研究認為棉酚對睪丸曲細精管生精上皮的損傷，以晚期精子細胞和初級精母細胞最為明顯。如精母細胞核固縮，精子細胞核空泡化，形成多核巨細胞，胞漿呈嗜酸性。然而，即使在曲精細管生精上皮受到嚴重損傷，只剩下1～2層細胞的情況下，仍能見到精原細胞和支持細胞，由此可見，晚期精子細胞和初級精母細胞對棉酚較為敏感，而精原細胞和支持細胞對棉酚則表現(xiàn)一定的耐受性。棉酚對大鼠睪丸生精上皮的損傷具有長效作用[2]。本試驗通過制作小鼠精巢組織學切片，觀察到棉酚試驗組管壁厚度均變薄，管腔直徑變大，合籠后產仔量減少，可能長期服用棉酚減少精子數(shù)量，從而降低生育能力。

本試驗還觀察到棉酚試驗組雌性卵巢的組織學切片發(fā)現(xiàn)試驗組雌性個體卵巢內黃體面積與對照組相似，未出現(xiàn)萎縮，而食用溴敵隆組雌性黃體極度萎縮，還未合籠就已死亡，說明毒性極大。有研究認為黃體能夠分泌雌激素和孕激素，這兩種激素對于子宮內膜的周期性變化及受精卵著床、胎兒發(fā)育極為重要[3]。可見，棉酚可能只是影響雄性精巢的發(fā)育，而對雌性影響不大，這與其他學者研究結果一致[4]。

參考文獻：

[1] 王 剛，唐克偉.含棉酚飼料的科學應用[J].中國養(yǎng)殖學，2009， 36（1）：44-46.

[2] 張寅恭.棉酚抗生育作用的研究II.雄性大鼠的抗生育作用[J].上海中醫(yī)學，1980（6）：43.

[3] 何鳳琴.雷公藤和莪術混合餌料對棕色田鼠生殖作用的影響[J].中國媒介生物學及控制雜志，2013，24（1）：34-38.

[4] 雷海鵬.醋酸棉酚對雄性大鼠的抗生育作用[J].中華醫(yī)學雜志， 1979，59（7）：402.