HPLC法測定養血顆粒中阿魏酸的含量

徐云++馬淑芬++茍小軍

摘要：目的建立H PLC法測定養血顆粒中阿魏酸的含量。方法采用C18（5 μm，4.6×250 mm）為色譜柱，以乙腈-1%冰醋酸（20：80）為流動相，檢測波長為322 nm，流速為1.0 mL/min。結果阿魏酸在11～55 μg/mL范圍內呈現良好的線性關系，r=0.9997，平均加樣回收率為99.15%，RSD=1.16%。結論本法簡便、準確，重現性好，可作為養血顆粒的質量控制方法。

關鍵詞：養血顆粒；HPLC；阿魏酸

中圖分類號：R284文獻標志碼：A文章編號：1007-2349（2016）11-0074-02

養血顆粒為臨床經驗方，由當歸、桃仁、太子參、玄參等l0味中藥組成的復方中藥制劑，具有滋陰清熱、養陰安神的功效，臨床上廣泛用于入睡困難，多夢易醒，醒后不眠等失眠癥。方中當歸為主藥，具有降氣止咳平喘，潤腸通便的功效[1]，阿魏酸是當歸的主要活性成分之一，具有多方面的生物活性[2]，當歸生藥及其制劑常選用阿魏酸的含量作為其質量控制指標，因此，為了有效控制養血顆粒質量，保證養血顆粒的臨床療效，本研究中以方中主藥當歸的有效成分阿魏酸作為指標成分，采用高效液相色譜（HPLC）法直接測定阿魏酸的含量，該方法專屬性強、簡便準確、重復性好，現將結果報道如下。

1儀器與試藥

Agilent高效液相色譜儀（四元泵，DAD檢測器，自動進樣器），Agilent1200工作站；BP211D型電子分析天平（德國Sartoius）。阿魏酸對照品（購自中國藥品生物制品檢定所，批號：110773-200611）；養血顆粒（系自制）；水為超純水，乙腈為色譜純，其它試劑均為分析純。

2方法

2.1色譜條件色譜柱：Agilent C18柱（250 mm x 4.6 mm，5 μm）；流動相：乙腈-1%冰醋酸（22-80）；流速：1.0 mL/min；柱溫：3 0℃；檢測波長：322 nm；進樣量10 μL。在此條件下，阿魏酸與其他色譜峰分離良好，理論板數以阿魏酸計算，應不低于3000.

2.2對照品溶液的制備取阿魏酸對照品，精密稱取阿魏酸2.215 mg，置1000 mL棕色容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得對照品溶液（2.2 μg/mL）.

2.3供試品溶液的制備取養血顆粒劑適量，研細，取2 g，精密稱定，加水10 mL，攪拌，完全溶解，加乙酸乙酯振搖，萃取4次，每次 15 mL，合并乙酸乙酯萃取液，置水浴蒸干，殘渣加70%甲醇溶解，并轉移至10 mL量瓶中，定容，搖勻，用0.45 μm微孔濾膜濾過，即得供試品溶液[3-4]。

2.4陰性對照試驗按處方取缺當歸的陰性對照藥，按供試品溶液制備方法，制得陰性對照溶液，進樣，依法測定，結果陰性對照液在相同位置處無與阿魏酸相對應的色譜峰，表明處方中其它藥材和輔料不干擾阿魏酸的測定。

2.5線性關系的考察分別精密吸取對照品溶液5，10，15，20，25 μL進樣，以峰面積（Y）對進樣量（X）進行回歸，阿魏酸的回歸方程為Y=632.7X+6.85，r=0.9997，表明進樣量在11～55 μg/mL范圍內，線性關系良好。

2.6精密度實驗精密吸取上述對照品溶液10 μL，按照上述色譜條件連續進樣6次，測定阿魏酸峰面積值，計算阿魏酸RSD為0.98%，結果表明精密度良好。

2.7穩定性實驗精密吸取同一供試品溶液10 μL，分別于0，2，4，8，24 h測定，記錄阿魏酸峰面積，結果RSD為1.34%，表明供試品溶液在24 h內穩定性良好。

2.8重復性實驗精密稱取同一批次的樣品6份，按照供試品溶液制備方法得到供試品溶液，依上述色譜條件測定阿魏酸的含量，計算阿魏酸RSD為1.45%，表明本方法重復性良好。

2.9加樣回收率實驗采用加樣回收法測定，取已知含量的樣品（批號：140311）研細，取約1.0 g，精密稱定，精密加入阿魏酸對照品適量，制成各自的供試品溶液，依法測定，計算加樣回收率。結果見表1。

3討論

當歸藥材中阿魏酸的法定測定方法是用70%的甲醇，加熱回流提取，以乙腈-0.085%磷酸為流動相[5]，本研究中，采用乙酸乙酯萃取來提取阿魏酸，采用的流動相是乙腈-1%冰醋酸（20：80），在此色譜條件下，可使阿魏酸分離良好，峰形較好，理論板數高。對于測定波長的選定，我們通過用紫外分光光度計進行掃描，對照品和供試品的甲醇溶液均在322 nm波長處有最大吸收，故選擇322 nm為檢測波長[4]。試驗中采用曾考察了乙酸乙酯萃取1次，萃取2次，萃取3次，萃取4次，萃取5次，結果表明，萃取4次，與乙酸乙酯萃取5次，效果相當，為了節省資源，簡單方便，選擇乙酸乙酯萃取4次，同時對乙酸乙酯每次萃取用量做了比較，分別每次10 mL，每次15 mL，每次20 mL，每次25 mL，結果表明，每次15 mL，后含量不再增加，故選擇乙酸乙酯萃取，每次15 mL。參考文獻：

[1]尹輝.當歸化學成分及藥理活性研究進展[J].重慶科技學院學報（自然科學版），2015，17（1）：100-103.

[2]劉如秀，劉宇，汪艷麗，等.當歸的藥理作用[J].西部中醫藥，2014，27（11）：153-156.

[3]劉雪松.活血止痛顆粒劑中阿魏酸的含量測定[J].民營科技，2 014，11：67.

[4]宋興發，劉俊超.HPLC法測定復方調經糖漿中阿魏酸的含量[J].海峽藥學，2014，26（10）：63-64.

[5]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（一部）[M].北京：中國醫藥科技出版社，2010，124.