DcR3在胰腺癌組織中的表達及其臨床意義

張文熠 林偉 余樂杰

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DcR3在胰腺癌組織中的表達及其臨床意義

張文熠 林偉 余樂杰

誘捕受體(decoy receptor，DcR)是新近發現的腫瘤壞死因子受體(tumour necrosis factor receptor，TNFR)超家族成員。已有研究表明，DcR3基因能夠通過多種途徑阻斷T細胞、自然殺傷細胞(natural killer cell，NK)誘導腫瘤細胞凋亡，從而促進惡性腫瘤的免疫逃逸，在肺癌、乳腺癌、肝癌、胃癌等多種惡性腫瘤的發生與發展中扮演重要角色[1]。DcR家族有DcR1、DcR2、DcR3三個成員，目前關于胰腺癌涉及DcR的研究主要集中在DcR1、DcR2，而對DcR3的研究相對較少[2]。隨著DcR3單克隆抗體技術以及小干擾RNA(small interfering RNA，siRNA)技術的發展，DcR3在惡性腫瘤的基因診斷及靶向治療方面的應用價值越來越大[3]。本研究檢測胰腺癌組織DCR的表達，探討其對胰腺癌診斷、治療及預后判斷的意義。

一、資料與方法

1．研究對象：選取溫州醫科大學附屬第一醫院病理科2010年至2012年收集的資料完整的40例胰腺癌組織、20例匹配的胰腺癌旁組織、20例正常胰腺組織。癌旁組織是指距離病灶<3 cm的胰腺組織，正常胰腺組織來源于本院外科手術的患者，均經病理學檢查證實為正常胰腺組織。術前接受過放化療治療的患者、臨床隨訪資料不完整的患者以及標本未經病理學證實的患者均排除在外。出院后每3個月復查1次全腹部及胸部CT，檢測腫瘤標志物，隨訪3年。

2．免疫組化檢查：采用鏈霉親和素-過氧化物酶法檢測胰腺組織DcR3蛋白表達。DcR3單克隆抗體購自ABCAM公司，工作濃度1∶50；免疫組化SP法試劑盒購自北京賽馳生物科技公司，按說明書操作。以PBS替代一抗作為陰性對照。由病理科醫師盲法讀片。胞質內出現黃色、棕黃色、褐色顆粒為陽性表達，并根據著色強度及陽性細胞數評分：無色為0分，黃色為1分，棕黃色為2分，褐色為3分；陽性細胞數占總細胞數<5%為0分、5%～<25%為1分、25%～<50%為2分、50%～<75%為3分、>75%為4分。兩分相乘>4分為陽性。

二、結果

1．臨床資料：胰腺癌組織40例，其中男性22例、女性18例，年齡39～72歲，平均(58±10)歲；根據WHO2000年制定的腫瘤分期標準，高分化8例、中分化9例、低分化23例；依據AJCCTNM分期標準，Ⅰ期4例、Ⅱ期10例、Ⅲ期26例。癌旁組織20例，其中男性11例、女性9例，年齡42～70歲，平均(56±10)歲。正常胰腺組織20例，其中男性10例、女性10例，年齡44～68歲，平均(58±9)歲。3組間差異無統計學意義(P>0.05)。

2．胰腺組織DcR3蛋白表達：胰腺癌、癌旁組織、正常胰腺組織DcR3蛋白陽性表達率分別為77.5%(31/40)、35.0%(7/20)、5.0%(1/20)，胰腺癌組織顯著高于癌旁組織及正常胰腺組織，差異有統計學意義(χ2=32.400，P<0.001，圖1)。

3．胰腺癌組織DcR3蛋白表達與腫瘤臨床病理參數的相關性：胰腺癌組織DcR3蛋白表達與腫瘤TNM分期、分化程度及淋巴結轉移均有顯著的相關性(P值均<0.05，表1)。

4．胰腺癌組織DcR3蛋白表達與患者預后的關系：40例胰腺癌患者隨訪9～34個月，失訪3例，隨訪率92.5%。到截止日期僅1例DcR3蛋白陰性表達患者存活。DcR3蛋白陰性表達的胰腺癌患者中位生存時間為24.8個月，顯著高于DcR3蛋白陽性表達胰腺癌患者的17.8個月(圖2)，差異有統計學意義(χ2=4.889，P=0.029)。

討論 目前的研究表明，腫瘤的發生是由于細胞增殖與凋亡的平衡過程受到破壞所致。DcR3是重要的凋亡抑制蛋白之一，由300個氨基酸組成，因缺乏跨膜結構，屬于分泌性蛋白，能夠在血清中檢出。DcR3與TNFR具有高度同源性，能夠通過與Fas等介導細胞凋亡的蛋白分子配體相結合，阻斷后者介導的細胞凋亡過程[4]；另外，DcR3還參與T細胞的免疫凋節，導致機體免疫功能紊亂，促進腫瘤細胞的免疫逃逸[6]。已有研究表明，DcR3過表達與多種惡性腫瘤的發生密切相關。蘇傳麗[7]檢測肝癌、肝硬化、急性感染患者的DcR3水平，證實肝癌患者DcR3陽性率明顯高于其他良性肝病患者，能夠鑒別腫瘤與炎癥性疾病。周健等[8]報道，與良性腫瘤患者及健康人群比較，胰腺癌患者血清DcR3水平顯著升高，而腫瘤切除后血清DcR3水平明顯下降。本研究結果也顯示，胰腺癌組織DcR3蛋白陽性表達率顯著高于癌旁胰腺組織及正常胰腺組織。DcR3在胰腺癌發病中的機制可能為：(1)DcR3能夠與Fas競爭結合Fas配體(FasL)，形成性質穩定的DcR3-Fc-FasL復合物，從而抑制FasL有效發揮介導細胞凋亡的作用[9]。(2)DcR3能夠與單純皰疹病毒侵入介質(herpesvirusentrymediator，HVEM)的受體(LIGHT)相結合，阻斷LIGHT與淋巴毒素β受體及單純皰疹病毒侵入介質相結合介導的細胞凋亡機制[10]。(3)DcR3基因表達能夠影響LIGHT與腫瘤壞死因子樣配體1A(TL1A)介導的T細胞激活機制[11]，使CD80等多種T淋巴細胞協同刺激信號分子的水平明顯降低，從而降低機體的細胞免疫功能。(4)DcR3能夠上調IL-4的表達，從而抑制CD4+T淋巴細胞活性，導致Th1/Th2的失衡[12]。

圖1 癌旁組織(1A)、正常胰腺組織(1B)、胰腺癌組織(1C)DcR3蛋白表達(SP ×20)

表1 胰腺癌組織DcR3蛋白表達與腫瘤臨床病理參數的相關性

臨床病理參數陽性例數(%)陰性例數(%)χ2值P值年齡(歲)0．0180．893 ≥5518(58．1)5(55．6) <5513(41．9)4(44．4)性別0．5230．47 男18(58．1)4(44．4) 女13(41．9)5(55．6)腫瘤直徑(cm)0．0430．845 ≥416(51．6)5(55．6) <415(48．4)4(44．4)TNM分期5．1190．024 Ⅰ+Ⅱ8(25．8)6(66．7) Ⅲ23(74．2)3(33．3)分化程度5．9140．015 高+中10(32．3)7(77．8) 低21(67．7)2(22．2)淋巴結轉移4．2690．039 是12(38．7)7(77．8) 否19(61．3)2(22．2)

圖2 生存函數圖

Dias-Santos等[13]研究報道，胰腺癌DcR3表達與腫瘤組織分化程度顯著呈負相關，與淋巴結轉移呈正相關。本研究結果顯示，DcR3陽性表達與胰腺癌TNM分期、分化程度及淋巴結轉移、生存時間等密切相關，這現象可能與DcR3與TL1A能夠促進血管新生所致[14]。已有研究表明，DcR3基因表達能夠影響肝癌患者的腫瘤血管密度[15]，推測除了抑制腫瘤細胞凋亡，DcR3可能還通過影響腫瘤組織的血供和營養狀態，從而影響腫瘤組織的生長和侵襲能力。但其具體機制還有待以后進一步研究。

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(本文編輯：屠振興)

10.3760/cma.j.issn.1674-1935.2016.06.013

325000 浙江溫州，溫州醫科大學附屬第一醫院放化療科(張文熠、林偉)，胃腸外科(余樂杰)

張文熠，Email: zesir_mark@163.com

2016-03-14)