一次性密封栓封堵骨腫瘤穿刺孔改善出血情況的研究

金宇，曹海營(yíng)，馮震，霍玉寶，于濤，馬雅昌

(1.承德醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院 創(chuàng)傷骨科，河北 承德 067000; 2.承德醫(yī)學(xué)院，河北 承德 067000)

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·論 著·

一次性密封栓封堵骨腫瘤穿刺孔改善出血情況的研究

金宇1，曹海營(yíng)1，馮震1，霍玉寶2，于濤2，馬雅昌2

(1.承德醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院 創(chuàng)傷骨科，河北 承德 067000; 2.承德醫(yī)學(xué)院，河北 承德 067000)

目的:探討一次性密封栓封堵兔VX2骨腫瘤穿刺孔后改善其出血情況。方法:取傳代荷瘤兔腫瘤并制備成細(xì)胞懸液，分別植入20只成年家兔雙側(cè)脛骨內(nèi)制成兔VX2骨腫瘤模型。模型制備2周后，將20只兔左脛骨組設(shè)為實(shí)驗(yàn)組，采用套管針活檢，取出病理組織后通過(guò)套管植入密封栓封堵穿刺孔；右脛骨組設(shè)為對(duì)照組，對(duì)穿刺孔不封堵。穿刺1 h后對(duì)兩組穿刺孔周?chē)胁噬暀z查，評(píng)定兩組家兔穿刺孔出血情況。結(jié)果:20只家兔骨腫瘤模型成功率100%。穿刺1 h后實(shí)驗(yàn)組穿刺孔周?chē)鲅?只，而對(duì)照組有18只家兔穿刺孔周?chē)胁煌潭瘸鲅?實(shí)驗(yàn)組穿刺孔出血率低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=15.36，P<0.05)；將兩組穿刺孔周?chē)[體積進(jìn)行比較，差異也有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=47.25，P<0.001)。結(jié)論:一次性密封栓封堵骨穿孔后可明顯改善兔VX2骨腫瘤穿刺孔出血情況。

活檢技術(shù)；VX2腫瘤；骨腫瘤；彩色超聲；兔

目前腫瘤特別是骨腫瘤發(fā)病率呈逐年升高趨勢(shì)。盡管影像技術(shù)的發(fā)展，可為腫瘤的診斷提供大部分信息，但活檢依舊是決定腫瘤診斷及病理類(lèi)型準(zhǔn)確率最高的金標(biāo)準(zhǔn)。穿刺活檢是比較常用的一種活檢手段，它具有創(chuàng)傷小、術(shù)后不易感染等優(yōu)點(diǎn)，但它同時(shí)具有穿刺孔周?chē)鲅?、腫瘤細(xì)胞經(jīng)針道轉(zhuǎn)移等缺點(diǎn)。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)套管針對(duì)20只家兔VX2骨腫瘤模型進(jìn)行穿刺，應(yīng)用自行設(shè)計(jì)的一次性封閉栓對(duì)穿刺孔進(jìn)行封堵，對(duì)穿刺孔周?chē)胁食瑱z查，評(píng)定穿刺孔出血情況，進(jìn)而驗(yàn)證一次性密封栓封堵骨穿刺孔后改善穿刺孔出血情況。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

20只新西蘭成年家兔，月齡4個(gè)月，體質(zhì)量2～3 kg，雌雄不限。所有動(dòng)物進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)兔舍圈養(yǎng)，采用衛(wèi)生水及標(biāo)準(zhǔn)兔飼料喂養(yǎng)。本實(shí)驗(yàn)遵循承德醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物保護(hù)及使用規(guī)定，遵循醫(yī)學(xué)倫理學(xué)要求。

1.2 實(shí)驗(yàn)器材及儀器

超聲診斷掃描儀采用Medical Systems-LOGIQ9(GE公司，美國(guó))；VX2腫瘤株由廣州吉妮歐生物試劑公司提供。自行設(shè)計(jì)制作新的穿刺活檢器械及密封栓(專(zhuān)利號(hào)：201310050606.1，見(jiàn)圖1)。

a.穿刺器械; b.一次性密封栓

圖1 自行設(shè)計(jì)的穿刺器械及密封栓

Fig 1 The puncture instrument and the bolt closure

1.3 兔VX2骨腫瘤模型制備

1.3.1 腫瘤細(xì)胞懸液的制備 將凍存的VX2腫瘤組織在-4 ℃條件下復(fù)蘇，在無(wú)菌條件下將腫瘤組織剪成1 mm3大小的碎組織塊并置入生理鹽水中，注入兔后肢股外側(cè)肌內(nèi)，制成荷瘤兔模型，3周后處死家兔，無(wú)菌手術(shù)切除肌肉腫瘤，去除腫瘤中心壞死組織及周?chē)w維組織，將新鮮魚(yú)肉狀腫瘤組織剪成1 mm3大小的碎塊，離心5 min(800 r·min-1)，去除上清液，加入PBS液再離心5 min，去除上清液并攪拌均勻，用臺(tái)盼藍(lán)排除法計(jì)算細(xì)胞成活率，并制成106ml-1的腫瘤細(xì)胞懸液。以上操作于超凈工作臺(tái)內(nèi)完成。

1.3.2 骨腫瘤模型制備 經(jīng)耳緣靜脈注射3%戊巴比妥鈉(1 ml·kg-1)麻醉后，分別給予所有家兔后肢毛發(fā)去除，俯臥位固定于操作臺(tái)上，常規(guī)碘伏消毒，鋪無(wú)菌孔單。于脛骨干骺端內(nèi)側(cè)較平坦處作1 cm長(zhǎng)皮膚切口，分離皮下組織暴露脛骨后，用1.6 mm克氏針經(jīng)脛骨近端關(guān)節(jié)面穿刺，克氏針與脛骨長(zhǎng)軸平行，將克氏針?biāo)腿朊劰巧隙嗡枨? cm左右，注入0.3 ml腫瘤細(xì)胞懸液，骨蠟封閉穿刺孔，逐層縫合。

1.3.3 實(shí)驗(yàn)對(duì)象的選取 腫瘤細(xì)胞懸液注入后，每7 d行雙側(cè)脛骨X線檢查，明確腫瘤生長(zhǎng)情況。1周時(shí)見(jiàn)脛骨上段髓內(nèi)輕度溶骨破壞區(qū)，骨皮質(zhì)未被受累；2周時(shí)髓內(nèi)破壞區(qū)逐漸增大，約1 cm×0.8 cm大小，皮質(zhì)無(wú)明顯受累；3周時(shí)髓腔內(nèi)破壞區(qū)增大明顯，脛骨上段皮質(zhì)輕度受累，周?chē)浗M織未見(jiàn)明顯包塊。本實(shí)驗(yàn)選取腫瘤懸液注入2周的骨腫瘤模型為實(shí)驗(yàn)對(duì)象(圖2)。

圖2 模型制備2周時(shí)家兔脛骨X線：可見(jiàn)髓內(nèi)破壞區(qū)增大，皮質(zhì)未見(jiàn)明顯受累，周?chē)浗M織未見(jiàn)明顯包塊

Fig 2 The X-Rays of the tibia bone tumor of the rabbits at the second after the VX2 tumor cells transplanted:the picture showed the area of the tumor destruction was larger than that at the first week,the cortex of bone was not destroyed apparently and the soft tissue mass wasn’t found

1.4 穿刺方法

將20只家兔麻醉備皮后，仰臥位固定于操作臺(tái)上，常規(guī)碘伏消毒，鋪無(wú)菌孔單。將20只家兔左脛骨VX2骨腫瘤作為實(shí)驗(yàn)組，采用套管針穿刺活檢，當(dāng)穿刺針到達(dá)腫瘤內(nèi)時(shí)，拔出針芯，套管針保持位置不動(dòng)，插入取病理針，旋轉(zhuǎn)采取少量腫瘤組織。保持套管不動(dòng)，密封栓從針尾放進(jìn)套管，用針芯順套管將密封栓頂置腫瘤淺層穿刺孔內(nèi)，進(jìn)行封堵。右脛骨組作為對(duì)照組，對(duì)穿刺孔不封堵，然后縫合。

1.5 術(shù)后評(píng)定

穿刺1 h后，對(duì)家兔后肢腫瘤穿刺部位行彩色超聲檢查，觀察穿刺孔周?chē)鲅闆r。對(duì)穿刺孔周?chē)鲅募彝糜删哂卸嗄瓿曈跋窠?jīng)驗(yàn)的醫(yī)師超聲下測(cè)量穿刺孔周?chē)[長(zhǎng)徑和厚徑，依據(jù)Carlsson公式[1]V=0.5×a×b2(a、b為超聲下測(cè)得血腫長(zhǎng)徑、厚徑，V為血腫體積)計(jì)算血腫體積。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

應(yīng)用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，兩組穿刺孔周?chē)鲅时容^行χ2檢驗(yàn)，穿刺孔周?chē)[體積行配對(duì)樣本t檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 穿刺孔出血情況的比較

模型制備2周后，成模率100%。穿刺1 h后，彩色超聲顯示一次性密封栓全部封堵于穿刺孔處，未見(jiàn)脫落。實(shí)驗(yàn)組有6只家兔穿刺孔出血，其余14只穿刺孔周?chē)鸁o(wú)明顯滲出；對(duì)照組18只家兔穿刺孔均有出血，其余2只無(wú)明顯出血(圖3)。兩組穿刺孔周?chē)鲅什町愑薪y(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=15.36，P<0.05)。

a.示穿刺孔周?chē)鸁o(wú)明顯出血，箭頭示一次性密封栓；b.穿刺孔不封堵，周?chē)梢?jiàn)血腫形成，如箭頭所示

圖3 兩組穿刺孔超聲所見(jiàn)

Fig 3 Picture a shows no exudation around the puncture hole after implantation of the bolt closure,the bolt closure is denoted by the arrow；picture b shows some degrees of exudation around the puncture holes in rabbits of the control group,the exudation is denoted by the arrows

2.2 穿刺孔周?chē)[體積的比較

超聲下測(cè)量實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組家兔穿刺孔周?chē)[體積，并將兩組血腫體積進(jìn)行配對(duì)樣本t檢驗(yàn)(表1)，t=47.25，P<0.05，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 討 論

近年來(lái)隨著我國(guó)人民生活方式的改變，惡性腫瘤已成為中國(guó)居民死亡的主要原因。腫瘤特別是骨腫瘤的發(fā)病率呈逐年升高趨勢(shì)[2-3]。腫瘤的早期發(fā)現(xiàn)、正確診斷、及時(shí)治療對(duì)預(yù)后有著重要意義[4]。骨腫瘤病變較為復(fù)雜，盡管影像技術(shù)的發(fā)展為腫瘤的診斷提供大部分信息，但很多腫瘤無(wú)明顯影像學(xué)差異，正確的診斷需要臨床、影像及病理三者相結(jié)合，其中活體組織檢查作為決定腫瘤診斷及病理類(lèi)型準(zhǔn)確性最高的方法，是診斷肌肉和骨骼病變的金標(biāo)準(zhǔn)[5]，而術(shù)前的組織學(xué)檢查是制定手術(shù)方案的重要依據(jù)，準(zhǔn)確的病理診斷不僅關(guān)系到治療方案的選擇，而且關(guān)系到疾病的預(yù)后[6]。

目前穿刺活檢是獲取病理診斷的主要途徑，其優(yōu)點(diǎn)是創(chuàng)傷小、出血少、操作方便，且穿刺孔對(duì)下次手術(shù)治療方案影響較小，但缺點(diǎn)是取材較少，準(zhǔn)確率較切開(kāi)活檢相對(duì)較低?；顧z技術(shù)在活檢過(guò)程中均破壞了腫瘤的自然間隔，由于人體腫瘤內(nèi)壓力與外界不同，腫瘤內(nèi)組織會(huì)滲透到腫瘤外形成血腫，很多報(bào)道稱(chēng)穿刺活檢后存在穿刺孔出血、周?chē)[形成及腫瘤細(xì)胞經(jīng)針道轉(zhuǎn)移等并發(fā)癥[7-8]。越來(lái)越多的研究人員不斷對(duì)穿刺活檢器械進(jìn)行改良，但始終不能解決或減少穿刺后并發(fā)癥的發(fā)生。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)自行設(shè)計(jì)并已經(jīng)申報(bào)國(guó)家專(zhuān)利的穿刺活檢器械及密封栓對(duì)兔VX2骨腫瘤進(jìn)行穿刺活檢，該器械的套管進(jìn)入穿刺孔同時(shí)對(duì)穿刺孔進(jìn)行了物理隔離[9]，病理組織提取完畢后用密封栓對(duì)穿刺孔進(jìn)行封堵，整個(gè)操作過(guò)程中保證了穿刺孔內(nèi)組織液不會(huì)外滲，從而改善穿刺孔出血及腫瘤細(xì)胞經(jīng)針道轉(zhuǎn)移情況。

表1 改良法與傳統(tǒng)穿刺方法穿刺VX2骨腫瘤后穿刺孔周?chē)难[體積 cm3

Tab 1 The comparison of the volume of the hematoma near the puncture hole in the VX2 bone tumors between the experimental and control group cm3

注:n=20,∑d=4.246，∑d2=1.66，Sd=0.2，t=47.25，P<0.001

本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用兔VX2骨腫瘤模型作為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，基于VX2腫瘤一種可移植的惡性乳頭狀瘤，可接種在兔的肝臟、肌肉、骨骼等處，所建立的腫瘤模型具有較高的生物學(xué)特性[10-12]，同時(shí)VX2腫瘤對(duì)骨質(zhì)有局限性侵犯作用，應(yīng)用其模仿人體溶骨性轉(zhuǎn)移瘤。張曉玲等[10]應(yīng)用改良法建立骨腫瘤模型，通過(guò)脛骨近段關(guān)節(jié)面鉆孔植入腫瘤細(xì)胞，最大程度地保護(hù)了脛骨骨質(zhì)及骨膜完整，造模成功率較傳統(tǒng)經(jīng)脛骨干皮質(zhì)穿刺植入腫瘤的方法大幅提高，當(dāng)VX2腫瘤細(xì)胞懸液注入兔脛骨5～20 d時(shí)，X線表現(xiàn)髓腔內(nèi)溶骨性破壞區(qū)逐漸增大，骨皮質(zhì)及周?chē)浗M織未見(jiàn)受累，而核磁共振顯示腫瘤的進(jìn)展變化同X線相同。同時(shí)，對(duì)腫瘤行病理觀察，腫瘤種植前15 d內(nèi)，脛骨髓腔內(nèi)正常骨髓結(jié)構(gòu)被腫瘤細(xì)胞破壞，骨皮質(zhì)未見(jiàn)腫瘤細(xì)胞，病理結(jié)果同影像觀察結(jié)果一致。綜上所述，選取腫瘤細(xì)胞植入脛骨髓內(nèi)2周時(shí)的家兔作為穿刺研究對(duì)象較為理想。

本實(shí)驗(yàn)密封栓由醫(yī)用高分子聚合物材料制成，密度較骨質(zhì)低，可植入體內(nèi)，環(huán)狀翹片的直徑成對(duì)凸起和成對(duì)倒鉤的間距均大于套管通孔的內(nèi)徑，能有效固定并封堵穿刺孔，可避免穿刺孔出血。前期的研究[9]證明，此改良穿刺方法明顯改善髂骨穿孔出血情況，而對(duì)骨腫瘤穿刺孔的封堵，目前尚未有研究報(bào)道。隨著對(duì)本改良穿刺活檢技術(shù)及器械的不斷改進(jìn)，相信可以在以后的骨及軟組織腫瘤穿刺動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究中得到更好的驗(yàn)證，為本項(xiàng)技術(shù)早日應(yīng)用于臨床奠定良好的基礎(chǔ)。

[1] CARLSSON G,GULLBERG B,HAFSTROM L.Estimation of liver tumor volume using different formulas:an experimental study in rats[J].Cancer Res Clin Oncol，1983，105(1):20-23．

[2] 孫瑞.基于行為轉(zhuǎn)變理論的護(hù)理模式對(duì)骨腫瘤患者生存質(zhì)量與不良反應(yīng)的影響[J].現(xiàn)代醫(yī)學(xué),2016，44(1):117-120．

[3] 王歡，向明飛，劉罡，等.94 853例惡性腫瘤住院患者疾病構(gòu)成及死因分析[J].東南大學(xué)學(xué)報(bào):醫(yī)學(xué)版，2014，33(2):187-191．

[4] 劉文生，李遠(yuǎn)，王濤，等.骨及軟組織腫瘤穿刺活檢技術(shù)[J].中國(guó)骨腫瘤骨病,2006，5(5):262-265．

[5] WELKER J A,HENSHAW R M,JELINEK J,et al.The percutaneous needle biopsy is safe and recommended in the diagnosis of musculoskeletal masses[J].Cancer,2000,899(12):2677-2686．

[6] MANKIN H J,MANKIN C J,SIMON M A.The hazards of the biopsy,revisited.Members of the Musculoskeletal Tumor Society[J].Bone Joint Surg Am,1996,78(5):656-663．

[7] 尹軍強(qiáng)，沈靖楠，黃綱，等.一種新型穿刺活檢針在骨與軟組織腫瘤診斷中的臨床應(yīng)用[J].中華關(guān)節(jié)外科雜志，2012，6(3)：361-365．

[8] 凌強(qiáng)，徐聰.四肢骨腫瘤經(jīng)皮穿刺活檢36例[J].現(xiàn)代診斷與治療，2010，21(4)：244-245．

[9] 趙景新,金宇，王瑜，等.改良穿刺活檢技術(shù)改善穿刺孔出血情況研究[J].中國(guó)全科醫(yī)學(xué),2014，17(9)：1040-1044．

[10] 張小玲，孟悛非，張朝暉，等.改良法兔VX2骨腫瘤模型的病理學(xué)與影像學(xué)觀察[J].中國(guó)骨腫瘤骨病，2007，6(2):89-92．

[11] 石毅，莊永志，李云.家兔VX2肺癌模型的建立及生物學(xué)特性觀察[J].中國(guó)比較醫(yī)學(xué)雜志，2007，17(8):S60．

[12] 陳文直，王智彪，白晉，等.VX2兔惡性骨腫瘤模型的建立及其生物學(xué)特性觀察[J].重慶醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2002，27(3):286-288．

Study on the bolt closure in blocking the holes to improve the complications of puncture biopsy in rabbits with bone tumor

JIN Yu1,CAO Hai-ying1,FENG Zhen1，HOU Yu-bao2,YU Tao2,MA Ya-chang2

(1.DepartmentofOrthopedics,theAffiliatedHospitalofChengdeMedicalCollege,Chengde067000,China;2.ChengdeMedicalCollege,Chengde067000,China)

Objective： To investigate the efficacy of the blot closure in blocking the puncture holes to improve the bleeding.Methods: VX2 tumor was seperated from cancer bearing VX2 rabbit to obtain tumor tissue blocks, followed by transplantation in the tibias of 20 rabbits to establish the model of bone tumor.And 20 cases of adult rabbits were punctured after 2 weeks.All the left tibias were punctured with the biopsy needle as the experimental group，later the puncture holes were implanted with the bolt closure through the sheath after the biopsy.And all the right tibias were punctured as the control group where the holes weren’t blocked.Color Doppler Ultrasound was used to assess the bleeding of the puncture hole 1 hour after.Results: Only 6 cases from the experimental group showed some degrees of exudation around the puncture hole after 1 hour later, but there were 18 cases showing exudation somehow around the puncture holes of all the 20 cases of the control group, the bleeding rate(30%，6/20)of the experimental group was lower than that(90%，18/20)of the control group.The difference was statistically significant(χ2=15.36，P<0.05).In terms of the volume of the bleeding, the difference was statistically significant(t=47.25，P<0.001).Conclusion: Using the blot closure can improve bleeding in rabbits with the VX2 bone tumor.

puncture biopsy; VX2 tumor; bone tumor; color Doppler ultrasound; rabbits

2016-04-01

2016-05-03

河北省科技廳計(jì)劃項(xiàng)目(14277790D); 2013河北省重大醫(yī)學(xué)科研課題資助項(xiàng)目(zd2013048)

金宇(1966-)，男，河北承德人，教授，醫(yī)學(xué)碩士。E-mail:657864245@qq.com

馮震 E-mail:632511867@qq.com

金宇，曹海營(yíng)，馮震，等.一次性密封栓封堵骨腫瘤穿刺孔改善出血情況的研究[J].東南大學(xué)學(xué)報(bào)：醫(yī)學(xué)版，2016，35(5)：719-723.

R738.1

A

1671-6264(2016)05-0719-05

10.3969/j.issn.1671-6264.2016.05．015