滇黃精3種炮制方法的比較研究*

戴萬(wàn)生，趙聲蘭，張鵬慧，曹冠華，許兆熙，朱智蕓

云南中醫(yī)學(xué)院，云南 昆明 650500

滇黃精3種炮制方法的比較研究*

戴萬(wàn)生，趙聲蘭，張鵬慧，曹冠華，許兆熙，朱智蕓

云南中醫(yī)學(xué)院，云南 昆明 650500

目的:優(yōu)選滇黃精炮制方法。方法:采用紫外分光光度法測(cè)定3種不同方法炮制滇黃精品中還原糖、小分子總糖、多糖和總皂苷的含量，并按藥典方法測(cè)定其浸出物含量，以此綜合評(píng)判優(yōu)選。結(jié)果：6個(gè)指標(biāo)綜合評(píng)判Y值為：方法一Y=0.6833，方法二Y=-5.0375，方法三Y=4.2812。結(jié)論：滇黃精直接蒸制（法三）優(yōu)于煮后蒸制（法一和法二）。

滇黃精；炮制方法；綜合指標(biāo)

滇黃精（Polygonatum kingianum CoIL et Hemsl），味甘，性平，歸脾、肺、腎經(jīng)，具有養(yǎng)陰潤(rùn)肺，補(bǔ)脾益氣，滋腎填精的功能。通過(guò)炮制，可消除黃精的麻味，減輕對(duì)咽喉的刺激，增強(qiáng)其補(bǔ)脾潤(rùn)肺益腎的功效。黃精炮制方法較多，歷代以來(lái)有:九蒸九曝法、蔓荊子水蒸法、酒熬法、焙制法、黑豆煮法、酒蒸法、乳浸曬法等20多種；《中國(guó)藥典》(2010版)收載的炮制方法為酒蒸法，各省、市、自治區(qū)又有自己的炮制規(guī)范，方法不統(tǒng)一［1-2］。云南使用的黃精以滇黃精為主，民間應(yīng)用和地方法規(guī)收載的滇黃精炮制方法有3種，但它們?cè)谂谥品椒ê凸に嚿洗嬖谝欢ǖ牟町悾胰狈陀^的技術(shù)參數(shù)。本實(shí)驗(yàn)對(duì)云南常用的3種滇黃精的炮制方法進(jìn)行比較研究，分別測(cè)定其水浸出物、乙醇浸出物、小分子總糖、多糖、總皂苷等含量，以此為指標(biāo)綜合評(píng)判3種炮制方法的優(yōu)劣，為滇黃精炮制工藝的規(guī)范化奠定基礎(chǔ)。

1 材料

1.1 儀器 UV-1800PC紫外可見分光光度計(jì)［翱藝儀器 (上海)有限公司提供］，CP214電子天平［奧豪斯儀器(上海)有限公司提供］，SK3300型超聲波清洗器(上海科導(dǎo)超聲儀器有限公司提供)。

1.2 試劑 無(wú)水葡萄糖(天津市風(fēng)船化學(xué)試劑科技有限公司提供)，人參皂苷Rbl(南京都萊生物技術(shù)有限公司提供，批號(hào)：RSZGB2P20140712)，其余試劑均為分析純。黃精(云南綠生藥業(yè)有限公司提供)，經(jīng)云南中醫(yī)學(xué)院趙榮華教授鑒定為滇黃精（Polygonatum kingianum Coll.et Hemsl.）的根莖。

2 方法與結(jié)果

2.1 樣品的炮制及制備

2.1.1 方法一［3］取凈黃精片200 g，加水適量浸潤(rùn)過(guò)夜，加5%生姜、10%黑豆煮2小時(shí)，70℃干燥4小時(shí)后，加15%蜂蜜及剩余汁液拌勻，蒸24小時(shí)，取出，70℃干燥，粉碎，過(guò)40目篩，備用。

2.1.2 方法二［4］取凈黃精片200 g，加水適量浸潤(rùn)過(guò)夜，加黑豆汁及適量水煮4小時(shí)后，70℃干燥4小時(shí)，再加5%蜂蜜及5%黃酒拌勻，蒸24小時(shí)，取出，70℃干燥，粉碎，過(guò)40目篩，備用。

2.1.3 方法三［5］取凈黃精片200 g，加黑豆汁及水適量浸潤(rùn)過(guò)夜，蒸24小時(shí)，取出，加5%黃酒和5%蜂蜜拌勻，吸盡，70℃干燥，粉碎，過(guò)40目篩，備用。每100 g黃精片，用黑豆10 g，加水浸泡至透，煎煮4小時(shí)，過(guò)濾，再加水煎煮3小時(shí)，過(guò)濾，合并2次濾液，濃縮至25 mL，備用。

2.2 浸出物的含量測(cè)定 按《中國(guó)藥典》2010版一部附錄XA項(xiàng)下熱浸法，用蒸餾水、稀乙醇作溶劑，測(cè)定水溶性浸出、醇溶性浸出物，結(jié)果見表1。

2.3 糖類成分的含量測(cè)定

2.3.1 葡萄糖對(duì)照溶液的配制 取經(jīng)105℃干燥至恒重的無(wú)水葡萄糖對(duì)照品55.0 mg，精密稱定，置50 mL量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得(每1mL中含無(wú)水葡萄糖1.1 mg)。

2.3.2 苯酚溶液的配制［6］精密稱取2.5 g苯酚，用蒸餾水溶解并定容于50 mL棕色量瓶中。

2.3.3 D N S溶液的配制［6］稱取0.650 g 3，5-二硝基水楊酸(DNS)，以50 mL蒸餾水溶解并轉(zhuǎn)移至100 mL棕色量瓶中，加入32.5 mL的2 mol/L的NaOH溶液，再加入4.5 g丙三醇，以蒸餾水定容，即得。

2.3.4 供試品溶液的制備 精密稱取黃精粉末1.0 g，置250 mL燒瓶中，加80%乙醇100 mL，水浴回流提取1小時(shí)，過(guò)濾，濾渣用80%乙醇洗2次(每次約10 mL)，合并濾液，揮盡乙醇，轉(zhuǎn)移至250 mL量瓶中，加水至刻度，搖勻后用于還原糖和小分子總糖含量測(cè)定。藥渣揮干乙醇后，用100 mL水回流提取1小時(shí)，過(guò)濾，殘?jiān)盟炊危喜V液，轉(zhuǎn)移至250 mL量瓶中，加水至刻度，用于總多糖的測(cè)定。

2.3.5 還原糖測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)曲線［6］精密量取1.1mg/mL葡萄糖對(duì)照品溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2mL，分別置于10 mL具塞刻度試管中，加入蒸餾水至4 mL，再分別加入5 mL的DNS溶液，混勻后置沸水浴中煮沸6分鐘，冰水冷卻至室溫，加水至刻度，以空白管為對(duì)照，在540 nm處測(cè)定吸光度［6-7］。以吸光度(A)為縱坐標(biāo)，葡萄糖濃度(μg/mL)為橫坐標(biāo)進(jìn)行回歸處理，得回歸方程：Y=0.008 1X+0.000 7(r=0.9995)，結(jié)果表明無(wú)水葡萄糖在22～132 μg/mL范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系，應(yīng)用DNS法測(cè)定還原糖。

2.3.6 總糖、多糖測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)曲線［7］精密量取1.1 mg/mL的葡萄糖對(duì)照品溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0 mL，分別置于50 mL量瓶中，加水至刻度，然后分別量取上述稀釋后的不同濃度的葡萄糖對(duì)照品溶液1 mL于10 mL具塞刻度試管中，加入蒸餾水至2 mL，混勻，再加入1 mL的5%苯酚溶液和7 mL的濃硫酸溶液，搖勻，靜置5分鐘，水浴加熱20分鐘，冰水冷卻至室溫，以空白管為對(duì)照，在490 nm測(cè)定吸光度。以吸光度(A)為縱坐標(biāo)，葡萄糖濃度(μg/mL)為橫坐標(biāo)進(jìn)行回歸處理，得回歸方程：Y=0.0594X-0.0554(r=0.999 5)，結(jié)果表明無(wú)水葡萄糖在2.2～13.2 μg/mL范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系，用于苯酚-硫酸法測(cè)定總糖、多糖。

2.3.7 樣品的測(cè)定 取滇黃精炮制品，按“2.3.4”項(xiàng)下方法制成供試品溶液，分別精密量取供試液1.0 mL稀釋到50 mL，精密量取4 mL，按照標(biāo)準(zhǔn)曲線項(xiàng)下的方法自“再分別加入5 mL的DNS溶液”起操作，測(cè)定吸光度，計(jì)算還原糖含量，結(jié)果見表1。

取滇黃精炮制品，按“2.3.4”項(xiàng)下方法制成供試品溶液，分別精密量取供試液1.0 mL稀釋到50 mL，精密量取1 mL，按照標(biāo)準(zhǔn)曲線項(xiàng)下的方法自“加入蒸餾水至2 mL”起，測(cè)定吸光度，計(jì)算小分子總糖含量。取滇黃精炮制品，按“2.3.4”項(xiàng)下方法制成供試品溶液，分別精密量取供試液0.5 mL，按照標(biāo)準(zhǔn)曲線項(xiàng)下的方法自“加入蒸餾水至2 mL”起操作，測(cè)定吸光度，計(jì)算多糖含量。結(jié)果見表1。

2.4 總皂苷含量測(cè)定

2.4.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線制備［8］稱取人參皂苷Rbl標(biāo)準(zhǔn)品11.3 mg于小燒杯中，加甲醇溶解并定容至10 mL，作為標(biāo)準(zhǔn)液。吸取該標(biāo)準(zhǔn)液40、80、120、160、200 μL，置于具塞刻度試管中，揮盡溶劑，加入0.2 mL5%香草醛-冰醋酸溶液(新鮮)，冰浴時(shí)加入0.8 mL高氯酸，搖勻，60℃水浴加熱15分鐘后，冰浴2分鐘，加入5 mL冰醋酸，搖勻，靜置5分鐘，于550 nm處測(cè)定吸光值(A)［8］。以吸光度(A)為縱坐標(biāo)，人參皂苷Rbl的質(zhì)量（μg)為橫坐標(biāo)進(jìn)行回歸處理，得回歸方程：Y=0.003 6 X+0.002 4 (r=0.999 2)，結(jié)果表明人參皂苷Rbl在45.2～226 μg范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系。

2.4.2 供試品溶液制備 稱取干燥黃精炮制品粉末1.00 g，加入14倍量水飽和正丁醇，40℃超聲提取50分鐘，提取2次，合并濾液至25 mL量瓶中，加水飽和正丁醇定容，搖勻，備用［9］。

2.4.3 樣品測(cè)定 吸取供試液100 μL，揮干溶劑，按“2.4.1”項(xiàng)顯色，于550 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，計(jì)算總皂苷含量(%)，結(jié)果見表1。

2.5 數(shù)據(jù)處理［10］將測(cè)得數(shù)值按公式：Xi，j=（Xi，j-/Sj進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化處理，Xi，j為供試液i中成分j的含量，為供試液i中成分j的平均值，Sj為成分j的標(biāo)準(zhǔn)偏差，即為標(biāo)準(zhǔn)化后的值，根據(jù)各指標(biāo)成分在藥物中的藥理活性和特性，給予不同的加權(quán)系數(shù)，以標(biāo)準(zhǔn)化后的值Xi，j加權(quán)求和后，即得綜合評(píng)價(jià)指標(biāo)Y值。其關(guān)系式：Y=(還原糖+小分子總糖+多糖)/3×5+總皂苷×3+ (水浸出物+乙醇浸出物)/2×2。綜合評(píng)判結(jié)果見表1。

表1 3種不同工藝滇黃精炮制品中各指標(biāo)成分含量及標(biāo)準(zhǔn)化結(jié)果比較(n=3)%

3 討論

黃精主要含有多糖、甾體皂苷、黃酮、蒽醌類化合物、氨基酸等活性成分，黃精多糖具有增強(qiáng)免疫、降血脂血糖、抗腫瘤、抗病毒、抗衰老等作用；黃精總皂苷具有調(diào)節(jié)血糖、抗腫瘤、改善記憶力、抗氧化等作用。黃精炮制后增益作用強(qiáng)補(bǔ)，可能與多糖、甾體皂苷的量變和質(zhì)變有關(guān)，故參考藥理作用給予各類成分加權(quán)系數(shù)：糖類5，總皂苷3，浸出物2。

從工藝看3種滇黃精炮制方法主要差異在于現(xiàn)行《云南省中藥飲片標(biāo)準(zhǔn)》(2005版)方法為蒸法，民間習(xí)用和《云南省中藥飲片炮制規(guī)范》(86版)方法為先煮2小時(shí)和4小時(shí)后再蒸法，結(jié)果表明，蒸法制品的綜合評(píng)判Y值高于另外2種先煮后蒸制品，說(shuō)明先煮制會(huì)導(dǎo)致部分有效成分的損失，滇黃精炮制宜直接蒸制。

從輔料上看3種方法都用黑豆和蜂蜜，差別是法規(guī)上用酒代替民間用的生姜，黃精味甘，生姜和酒均屬辛溫之品與黃精合制可起到辛甘化陽(yáng)，緩和黃精滋膩之性，但酒善入走血分，能行血脈、通經(jīng)絡(luò)，生姜偏于溫中止嘔、解毒，從中醫(yī)理論講用生姜與黃精同制更能增強(qiáng)其補(bǔ)脾的作用。2者對(duì)滇黃精藥性、化學(xué)成分和藥效的影響有待進(jìn)一步的研究。

［1］ 鐘凌云，龔千鋒，張的鳳，等.黃精炮制研究現(xiàn)狀分析［J］.中藥材，2007，30(12)：1618-1621.

［2］ 吳建華，張涓，崔於.黃精炮制工藝的研究進(jìn)展［J］.川北醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2013，28(1):27-29.

［3］ 中醫(yī)研究院中藥研究所、北京藥品生物制品檢定所.中藥炮制經(jīng)驗(yàn)集成［M］.北京：人民衛(wèi)生出版社，1963：113-114.

［4］ 云南省衛(wèi)生廳.云南省中藥飲片炮制規(guī)范［M］.昆明：云南科學(xué)技術(shù)出版社，1986：111-112.

［5］ 云南省食品藥品監(jiān)督管理局.云南省中藥飲片標(biāo)準(zhǔn)［M］.昆明：云南科學(xué)技術(shù)出版社，2005：75.

［6］ 張志君，孫偉，李永亮，等.3，5-二硝基水楊酸法聯(lián)合苯酚-濃硫酸法測(cè)定不同產(chǎn)地黃精中多糖含量［J］.中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2012，18(6):106-109.

［7］ 藍(lán)松.苯酚-硫酸法測(cè)定黃精多糖含量研究［J］.廣東化工，2013，40(18):132-133.

［8］ 尤新軍，郭蕊，王琳，等.黃精總皂苷超聲提取工藝研究［J］.西北林學(xué)院學(xué)報(bào)，2010，25(3):163-166.

［9］ 秦楓，劉靖，陳玉勇，等.三七總皂苷含量測(cè)定方法及超聲提取工藝研究［J］.安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2008，36(8):3062-3063.

［10］孫秀梅，欒妮娜，張兆旺.黃精飲片3種蒸制工藝的比較［J］.山東中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2010，34(6)：542-543.

Comparative Study on Three Processing methods of DianHuangJing

DAI Wansheng,ZHAO Shenglan,ZHANG Penghui,CAO Guanhua,XU Zhaoxi,ZHU Zhiyun
Yunnan University of Traditional Chinese Medicine,Kunming 650500,China

Objective:To optimize the processing method of DianHuangJing(Polygonatum Kingianum). Methods:Ultraviolet spectrophotometric method was used to determine the contents of reducing sugar,small molecule total sugar,polysaccharide and total saponins in DianHuangJing with three different processing methods.Contents of extract from DianHuangJing were determined based on pharmacopoeia method to realize its synthetical judge and priority selection.Results:Y values of the synthetical judge from six indexes were Method one:Y=0.6833，Method two:Y=-5.0375，Method three:Y=4.2812.Conclusion:Method of direct steaming of DianHuangJing(Method three)is superior to method of steaming after cooking(Method one and Method two).

DianHuangJing;processing method;comprehensive index

R283

A

1004-6852(2016)08-0032-03

2016-02-15

云南中醫(yī)學(xué)院重點(diǎn)學(xué)科資助項(xiàng)目(編號(hào)X K 201325)。

戴萬(wàn)生(1967—)，男，碩士學(xué)位，教授。研究方向：中藥炮制及功能食品研發(fā)。