樹莓根保肝作用的實驗研究*

何長遠(yuǎn)，劉慧多，韓曉波，張 宇，張 夢，陳 晶

黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)，黑龍江 哈爾濱 150040

樹莓根保肝作用的實驗研究*

何長遠(yuǎn)，劉慧多，韓曉波，張 宇，張 夢，陳 晶△

黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)，黑龍江 哈爾濱 150040

目的：利用動物實驗方法研究樹莓根對肝臟的保護(hù)作用。方法：將小鼠隨機(jī)分成模型組，空白對照組，聯(lián)苯雙酯組，樹莓根水提物高、中、低劑量組，每組各10只。樹莓根水提物高、中、低劑量組給藥量分別為4.56、2.28、1.14 g/kg，聯(lián)苯雙酯組給藥量為0.15 g/kg，給藥體積均為20 m L/kg，每天早上7點灌胃給藥1次，連續(xù)14天，模型組與空白對照組分別給予等體積生理鹽水。實驗第13天上午11點采用CcL4制備小鼠急性肝損傷模型，實驗第14天上午11點，測定血丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(A LT)和天門冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(A ST)，測定一氧化氮(N O)的含量、肝丙二醛(M D A)的含量和超氧化物歧化酶(SO D)的活性。結(jié)果：樹莓根水提取物各劑量組模型小鼠血清中A LT、A ST及肝勻漿中M D A的含量均降低，肝勻漿中SO D的含量均升高，與模型組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。樹莓根水提取物高、中劑量組模型小鼠血清中N O的含量，與樹莓根水提取物低劑量組、模型組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。結(jié)論：樹莓根對急性肝損傷小鼠的肝臟具有一定的保護(hù)作用。

樹莓根；肝損傷；保肝作用

肝臟是糖類、蛋白質(zhì)、脂肪3大物質(zhì)代謝的主要場所，也是激素、藥物、毒物滅活和解毒的主要場所，肝臟在體內(nèi)發(fā)揮著重要的功能［1］。世界范圍內(nèi)每年有100多萬人死于各種類型肝病。而肝損傷是造成肝病死亡的主要原因之一，因此防治肝損傷對于臨床肝病的治療具有重要意義［2］。我國民間有用樹莓根煎湯服用治療肝病的記載。本實驗用樹莓根水提取物對急性肝損傷小鼠進(jìn)行干預(yù)治療，研究樹莓根對肝臟的保護(hù)作用，希望能夠為中藥新藥治療肝病提供有益的參考。

1 材料與方法

1.1 實驗藥物 樹莓根(采自黑龍江省尚志市帽兒山)；聯(lián)苯雙酯滴丸(浙江萬邦藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，批號：20130121)。

1.2 實驗動物 昆明種小鼠，體質(zhì)量25～30 g，雄性［購自黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)實驗動物中心，動物實驗許可證號：SCXK(黑)2008004］。

1.3 實驗試劑 丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALT)和天門冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(AST)試劑盒(中生北控生物科技股份有限公司提供，產(chǎn)品批號：20130513，20130624)；一氧化氮(NO)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)試劑盒(南京建成生物工程研究所提供，產(chǎn)品批號：20130625,20130629,20130717)；四氯化碳、無水乙醇、冰醋酸(北京化工廠提供，產(chǎn)品批號：20121206，20130123，20130312)。

1.4 實驗儀器 722型紫外分光光度儀(上海棱光技術(shù)有限公司提供)；日立KY2000半自動生化儀(天津開元醫(yī)療設(shè)備有限公司提供)。

1.5 實驗方法

1.5.1 供試藥制備 將樹莓根切割、曬干，加水連續(xù)煮2 h，溶液濾出，加水重復(fù)上一步驟，共3次。將所得濾液進(jìn)行濃縮，干燥得到樹莓根提取物。樹莓根共3800 g，制備得388 g提取物，1 g提取物≈9.79 g生藥。

1.5.2 分組和給藥 將小鼠隨機(jī)分成模型組，空白對照組，聯(lián)苯雙酯組，樹莓根水提物高、中、低劑量組，每組10只，分別稱重、編號、記錄。樹莓根水提物高、中、低劑量組給藥量分別為4.56、2.28、1.14 g/kg，聯(lián)苯雙酯組給藥量為0.15 g/kg，給藥體積均為20 mL/kg，每天早上7點灌胃給藥1次，連續(xù)14天，模型組與空白對照組分別給予等體積生理鹽水。

1.5.3 模型制備 實驗第13天上午11點開始造模，除空白對照組小鼠外，其余各組小鼠行腹腔注射0.6%CcL4溶液，注射量10 mL/kg，空白對照組小鼠腹腔注射生理鹽水，注射量10 mL/kg，禁食不禁水。

1.5.4 標(biāo)本采集及檢測 實驗第14天上午11點，所有小鼠眼球取血約1 mL，靜置，離心機(jī)轉(zhuǎn)速調(diào)至3 500 r/min，離心10分鐘，分離出血清約0.3 mL，測定AST、ALT、NO的含量。小鼠取血后立即處死，快速取出肝臟，冰水浴制備勻漿，用于檢測MDA的含量和SOD的活性。

1.6 統(tǒng)計學(xué)方法 數(shù)據(jù)采用SPSS 10.0統(tǒng)計分析軟件處理，計量資料以(±s)表示，組間差異采用t檢驗，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 對血清中A ST、A LT、N O的影響 與空白對照組比較，模型組小鼠血清中AST、ALT、NO含量明顯升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)；與模型組比較，聯(lián)苯雙酯組和樹莓根水提取物高、中、低劑量組小鼠血清AST、ALT含量均明顯降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)；與聯(lián)苯雙酯組和樹莓根水提取物低劑量組比較，樹莓根水提取物高、中劑量組NO含量顯著降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。見表1。

表1 樹莓根對A ST、A LT、N O的影響(±s)

表1 樹莓根對A ST、A LT、N O的影響(±s)

注：▲表示與空白對照組比較，P＜0.05；■表示與模型組比較，P＜0.05。

組別空白對照組模型組聯(lián)苯雙酯組樹莓根低劑量組樹莓根中劑量組樹莓根高劑量組62.38±18.46 88.09±39.53▲86.40±33.24 80.41±19.03 71.29±15.14■64.22±20.74■只數(shù)10 10 10 10 10 10 A ST/(U·L-1) 65.92±16.59 258.02±38.49▲129.29±25.32■178.34±21.39■141.26±20.25■124.57±19.24■A LT/(U·L-1) N O/(μm ol·L-1) 12.94±6.31 376.45±35.12▲127.39±9.20■195.36±14.74■164.15±14.38■130.46±12.49■

2.2 對肝組織M D A、SO D的影響 與空白對照組比較，模型組小鼠肝組織中MDA含量顯著升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)；SOD水平顯著下降(P＜0.05)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。與模型組、聯(lián)苯雙酯組比較，樹莓根水提取物高、中、低劑量組小鼠肝組織中MDA含量均顯著降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)；SOD水平均顯著升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。見表2。

表2 樹莓根對M D A、SO D的影響(±s)

表2 樹莓根對M D A、SO D的影響(±s)

注：△表示與空白對照組比較，P＜0.05；*表示與模型組比較，P＜0.05。

組別 只數(shù) M D A/(nm ol·m gprot-1) SO D/(U·m gprot-1)空白對照組模型組聯(lián)苯雙酯組樹莓根低劑量組樹莓根中劑量組樹莓根高劑量組243.27±20.37 148.60±15.73△204.36±18.39*179.73±17.28*192.74±14.65*202.04±19.65*10 10 10 10 10 10 6.73±0.89 14.47±1.23△7.65±0.91*12.34±0.96*10.84±0.78*8.74±0.78*

3 討論

大多數(shù)肝病ALT、AST的變化基本一致，轉(zhuǎn)氨酶含量增高，表明肝細(xì)胞損害加重。本實驗結(jié)果顯示：與模型組相比，樹莓根水提取物高、中、低劑量組ALT、AST均下降，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。在LPS和某些因子誘導(dǎo)下，肝實質(zhì)和非實質(zhì)細(xì)胞大量生成誘導(dǎo)型NO合成酶(iNOS)，iNOS催化產(chǎn)生大量NO，通過多種機(jī)制導(dǎo)致肝細(xì)胞損傷或凋亡。有實驗表明大鼠雙后肢擠壓傷誘導(dǎo)機(jī)體iNOS來源的N0生成增多，內(nèi)源性NO介導(dǎo)了肝組織TNF-α和IL-1β基因表達(dá)上調(diào)，TNF-α和IL-1β參與急性肝損傷的發(fā)生［3-6］。本實驗結(jié)果顯示：與模型組比較，樹莓根水提取物高、中劑量組小鼠血清中NO含量明顯降低，樹莓根具有一定的保肝作用。

MDA是一種脂質(zhì)代謝終產(chǎn)物，可引起細(xì)胞損傷，因此通過測定MDA的含量，就可以反映出脂質(zhì)過氧化的程度，從而間接反映出細(xì)胞損傷的程度［7-8］。SOD是一種重要的抗氧化劑，是清除生物體內(nèi)自由基的重要物質(zhì)，SOD可對抗自由基對細(xì)胞造成的損害，并可修復(fù)受損細(xì)胞［9］。本實驗顯示：樹莓根水提取物高、中、低劑量組與模型組相比，MDA含量均顯著降低，SOD水平均顯著升高，說明樹莓根能夠通過減輕脂質(zhì)過氧化反應(yīng)、增強(qiáng)機(jī)體抗氧化功能而對肝臟起到保護(hù)作用。

［1］ 王伯祥，張赤志，聶廣.肝膽病中西醫(yī)診療學(xué)［M］.北京：中國中醫(yī)藥出版社，2000：483-484.

［2］ 劉丹卓，趙廣新.肝損傷的現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究進(jìn)展與展望［J］.貴陽中醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2007，29(3)：50-51.

［3］ 周畢軍，劉菲，黃川鋒，等.鬼針草水提物對急性肝損傷小鼠N O、IFN-γ和氧化應(yīng)激的影響［J］.中醫(yī)臨床研究，2014，6(16)：12-14.

［4］ 董國凱，張曉彤，馬麗琴，等.大鼠軟組織擠壓傷后N O對肝組織TN F-α和IL-1β基因表達(dá)的影響［J］.法醫(yī)學(xué)雜志，2014，30(4)：250-252.

［5］ M ori o LA.Toxi col A ppL［J］.Pharm acol，2001，172：44-51.

［6］ W ang D，W ei J，H su K，et al.Effect of ni t ri c oxi de synt hase i nhi bi t ors on syst em i c hypot ensi on cyt oki nes and i nduci bl e ni t ri c oxi de synft ase expressi on and l ung Inj ury fol l ow i ng endot oxi n adm i ni st rat i on i n rat s［J］.J Bi om ed Sci，1999，6(1)：28-35.

［7］ 喻寧華，曾富華，饒力群.仙人掌多糖對小鼠急性肝損傷的保護(hù)作用研究［J］.中國生化藥物雜志，2009，30(4)：255-258.

［8］ 孫樹凱，翟玉斌.青陽參總苷對小鼠四氯化碳肝損傷的保護(hù)作用［J］.青島大學(xué)學(xué)報，2012，48(2)：148-150.

［9］ 王君明，崔瑛，王崢濤，等.超氧化物歧化酶參與肝損傷的研究進(jìn)展［J］.中國實驗方劑學(xué)雜志，2011，17(7)：265-269.

Experimental Research on Protecting Liver of Raspberry Root

HE Changyuan,LIU Huiduo,HAN Xiaobo,ZHANG Yu,ZHANG Meng,CHEN Jing△
Heilongjiang University of Chinese Medicine,Harbin 150040,China

Objective:To study the effects of raspberry root on protecting liver in animals experiment.Methods: The mice were randomly divided into six groups,including the model group,blank control group,biphenyl dimethyl dicarboxylate(ddb)group,and high-dose,medium-dose and low-dose groups of raspberry root water extract,ten mice each group.The dose of each raspberry root water extract group was 4.56 g/kg,2.28 g/kg,and 1.14 g/kg respectively, but that of ddb group was 0.15 g/kg,and the volume of administration was 20ml/kg in all groups,which were given one time a day at 7 a.m for 14 days.And each of the model group and blank control group were given with saline of the same volume.At 11 o'clock a.m in the 13th day of the experiment,CCL4was used to prepare the model of mice with acute liver injury.What's mor，at the same time in the 14th day,the content of serum alanine aminotransferase (ALT),aspartate aminotransferase(AST),nitric oxide(NO)and hepatic malondialdehyde(MDA)in the mice as well as the activity of superoxide dismutase (SOD)in the liver homogenate were determined.Results:The serum ALT, AST and MDA contents of model mice in each of the water extract group decreased,but the SOD content increased. Compared with model group,there was statistical significance(P＜0.05).Furthermore,contrasted with low-dose groupof raspberry root water extract and model group,the NO content of model mice in both the high-dose and medium-dose groups reduced,there was statistical difference(P＜0.05).Conclusion:Raspberry root can definitely protect mice with acute liver injury.

raspberry root;acute liver injury;protecting liver

R285.5

A

1004-6852(2016)08-0021-03

2016-03-04

黑龍江省博士后科研啟動金資助項目 (編號LBQ－10005)。

何長遠(yuǎn)(1987—)，男，博士研究生。研究方向：中醫(yī)基礎(chǔ)理論。

△通訊作者：陳晶(1964—)，女，博士研究生導(dǎo)師，教授。研究方向：中醫(yī)治則治法機(jī)理研究。