HPLC法測定歸芍護肝顆粒中芍藥苷的含量

戴 蕓，胡 秀，楊 林，柯春霞

（1. 黃石市中心醫院（湖北理工學院附屬醫院），湖北 黃石 435000； 2. 腎臟疾病發生與干預湖北省重點實驗室，湖北 黃石 435000）

HPLC法測定歸芍護肝顆粒中芍藥苷的含量

戴 蕓1，2，胡 秀1，2，楊 林1，2，柯春霞1，2

（1. 黃石市中心醫院（湖北理工學院附屬醫院），湖北 黃石 435000； 2. 腎臟疾病發生與干預湖北省重點實驗室，湖北 黃石 435000）

建立測定歸芍護肝顆粒中芍藥苷含量的方法。采用HPLC-UV法，Aglient ZORBAX SB-C18柱（4.6 ×250 mm，5 μm）；流動相為乙腈-0.1 %磷酸溶液（14：86，v/v）為流動相；檢測波長為230 nm；柱溫為30 ℃；流速為1 mL/min。芍藥苷在10～100 μg/mL范圍內線性關系良好，平均回收率為98.79%，RSD 分別為0.92%。該法簡便、準確、靈敏、重現性好，可用于歸芍護肝顆粒中芍藥苷含量的測定。

HPLC；歸芍護肝顆粒；芍藥苷；含量測定

歸芍護肝顆粒由我院經過長期的臨床經驗總結而來，是用于“行氣解郁、活血化瘀、清利濕熱”的中藥顆粒劑，臨床上主要用于輕度肝損傷的治療[1,2]。該方劑由當歸、白芍、山藥、茯苓、澤瀉等八味中藥配伍，經過煎煮、濃縮、混勻等工藝制成[3]。為有效控制本品的質量，確保療效和進一步開發利用，該研究建立方中芍藥苷的含量測定方法。芍藥苷為方中白芍的主要藥效成分，具有補肝養腎澀精之功效。本研究參照相關文獻[4,5]和前期工作基礎建立歸芍護肝顆粒中芍藥苷的含量測定方法。

1 實驗部分

1.1 藥品與試劑

芍藥苷（純度：96.4%，購自中國食品藥品檢定研究院，批號：110736-201438）；當歸、白芍、山藥、茯苓、澤瀉等藥材購自湖北蘄州中藥材市場；乙腈、甲醇（色譜純，美國賽默飛世爾公司）；無水乙醇、磷酸（分析純，國藥集團化學試劑有限公司）；水為純凈水。

1.2 儀器

日立 L-7000型高效液相色譜系統，配有L-7110 型泵，L-7200 型自動進樣器，L-7420 型UV檢測器；Sigma 3K15 高速低溫離心機（Sigma公司）；XW-80A 旋渦混合器（上海青浦滬西儀器廠）；KQ 250DE型數控超聲波清潔器（昆山市超聲儀器有限公司）；METTLER ME104E型電子天平（瑞士梅特勒公司）。

1.3 溶液制備

1.3.1 對照品溶液的制備

芍藥苷對照品適量，精密稱定，置100 mL容量瓶中，加入甲醇定容至刻度，制成每l mL含 200 μg的溶液，即得，保存于4 ℃冰箱備用。

1.3.2 供試品溶液的制備

取本品中粉約0.5 g，精密稱定，置50 mL容量瓶中，加稀乙醇30 mL，超聲處理（功率240 W，頻率45 kHz）30 min，放冷，加稀乙醇至刻度，搖勻，用0.45 μm微孔濾膜濾過，取續濾液，即得。

1.3.3 陰性供試品溶液的制備

按處方制備不含白芍的歸芍護肝顆粒10 g，取適量按1.3.2項下方法制備陰性對照溶液。

1.4 色譜條件[6,7]

色譜柱為Aglient ZORBAX SB-C18柱（4.6×250 mm，5 μm）；以乙腈-0.1 %磷酸溶液（14：86）為流動相；檢測波長為230 nm；柱溫為30 ℃；流速為1 mL/min，分析時間25 min。

2 結 果

2.1 專屬性

取陰性供試品溶液、對照品溶液及供試品溶液，按1.4項下色譜條件進樣分析，在230 nm記錄供試品溶液色譜圖，芍藥苷保留時間為14.23 min，陰性對照品溶液無此特征峰，如圖 1。表明供試品中其它組分對所測組分無干擾。

2.2 線性關系

分別取不同體積的芍藥苷對照品溶液置10 mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度。配制成含芍藥苷10、20、40、60、80、100 μg/mL的標準系列溶液。以芍藥苷的峰面積比值為Y，以芍藥苷的濃度為X，線性回歸得到芍藥苷的回歸方程為

Y=4596.4X+23026，相關系數為r2=0.999 2，芍藥苷對照品溶液在10～100 μg/mL濃度范圍內線性關系良好。

2.3 精密度

取對照品溶液，按1.4項下色譜條件，自動重復進樣 5 次，進樣量 10 μL，記錄色譜圖。結果芍藥苷峰面積RSD為0.88%，表明方法精密度良好。

2.4 重復性

取同一批號歸芍護肝顆粒供試品6 份，按1.3.2項下方法分別制備供試品溶液，按1.4項下色譜條件，進樣分析，進樣量為10 μL。計算芍藥苷的平均含量為2.36 mg/g，RSD為0.73 %，表明方法重復性良好。

圖1 HPLC色譜圖Fig.1 HPLC chromatograms

2.5 穩定性

取配制好的同一批號歸芍護肝顆粒供試品溶液，室溫下放置，分別于配制后0、3、6、9、12 h 各進樣 1 次，記錄色譜圖，芍藥苷峰面積 RSD為0.94%，表明供試品溶液在12 h內基本穩定。

2.6 加樣回收率

取同一批號歸芍護肝顆粒供試品約0.25 g，共6份，精密加入芍藥苷對照品溶液3 mL，再精密加入27 mL稀乙醇溶液，按1.3.2 項下方法制備供試品溶液，按1.4項下色譜條件進樣測定，結果顯示芍藥苷的平均加樣回收率為98.79%，RSD 為 0.92 %。結果見表1。

2.7 供試品含量測定

取不同批號的歸芍護肝顆粒供試品 3 批，按1.3.2 項下方法制備供試品溶液，按1.4項下色譜條件，進樣分析，進樣量為10 μL，記錄峰面積，計算供試品中芍藥苷的含量（mg/g）。每批供試品測定3 份，結果如表2。

表1 芍藥苷的加樣回收率（n=6）Table 1 Recovery of peoniflorin (n=6)

表2 芍藥苷含量測定結果Table 2 Determination of peoniflorin content

3 結 論

肝損傷屬中醫“積聚”、“脅痛”、“黃疸”、“痞滿”等范疇。治療當疏肝健脾利濕、活血祛瘀。采用中藥復方治療肝損傷，可切中病機，標本兼治，使肝脾得調、氣血暢利，能夠取得良好的療效[8]。

本研究建立了用高效液相色譜法測定護肝中藥復方歸芍護肝顆粒中芍藥苷含量的方法，芍藥苷在10～100 μg/mL范圍內線性關系良好。方法精密度、重現性、穩定性和加樣回收率均符合中藥有效成分含量測定的要求。

本研究建立的HPLC方法簡便、準確、靈敏、重現性好，適用于歸芍護肝顆粒中芍藥苷含量的測定，為該顆粒劑的進一步開發利用提供了重要依據。

［1］ 劉安，任秉儀，徐朝陽，等．歸芍地黃湯聯合PDT治療肝腎不足型 ESMD的療效觀察[J]．中國中醫眼科雜志，2013，23（3）：161-164.

［2］ 胡泰洪，丁虹，薛博瑜，等．歸芍復肝煎治療慢性乙型肝炎 30例[J]．中醫研究，2007，20（12）：15-16．

［3］ 朱世敏，唐志鵬．茵陳蒿湯護肝作用研究進展[J]．上海中醫藥雜志，2008，42（2）：73-75．

［4］ 周蓬，宋青，馬帥．HPLC法同時測定小兒豉翹清熱顆粒中梔子苷、芍藥苷、黃芩苷、黃芩素和漢黃芩素[J]．中成藥，2013，35（8）：1693-1696．

［5］ 朱冠華，顧圣瑩，康雷，等．HPLC法同時測定參芍胃安顆粒中芍藥苷和黃芩苷的含量[J]．中國藥房，2014，25（27）：2533-2535．

［6］ 杜 蓉，張孟佑．HPLC法測定加味逍遙丸中芍藥苷與甘草苷的含量[J]．中國藥房，2015，26（18）：2571-2572．

［7］ 葛爾寧．RP-HPLC法測定不同煎煮方法下當歸芍藥湯中阿魏酸和芍藥苷的含量[J]．中國實驗方劑學雜志，2005，11（6）：16-18．

［8］ 謝晶日，張蘇，王海強．保肝消脂沖劑治療脂肪肝24例觀察[J]．實用中醫藥雜志，2008，24（7）：418．

Determination of Peoniflorin Content in Guishao Hugan Granules by HPLC

DAI Yun1,2, HU Xiu1,2, YANG Lin1,2, KE Chun-xia1,2
（1. Department of Pharmacy, Huangshi Central Hospital, Affiliated Hospital of Hubei Polytechnic University, Hubei Huangshi 435000, China; 2. Hubei Key Laboratory of Kidney Disease Pathogenesis and Intervention, Hubei Huangshi 435000, China）

A method for determination of peoniflorin content in Guishao Hugan Granules was established. A HPLC-UV method was developed. The separation was performed on a ZORBAX SB-C18 column (4.6×250 mm, 5 μm). The mobile phase consisted of acetonitrile- 0.1% phosphoric acid (14:86, v/v) at the flow rate of 1.0 mL/min. The detection wavelength was 230 nm. The column temperature was 30 ℃. The calibration curves of peoniflorin showed good linearity in the range of 10～100 μg/mL. The average recoveries were 98.79% with RSD of 0.92%. The method is simple, accurate, sensitive and reproducible for determination of peoniflorin content in Guishao Hugan Granules.

HPLC; Guishao hugan granules; Peoniflorin; Content determination

TQ 460

A

1671-0460（2016）03-0476-03

2015-12-07

戴蕓（1974-），女，湖北黃石人，主管藥師，1997年畢業于中國藥科大學藥學專業，研究方向：從事臨床藥學技術工作。

柯春霞（1975-），女，主管護師，研究方向。E-mail：kechunxia@hotmail.com。