40%嘧霉·異菌脲懸浮劑的高效液相色譜分析

潘 靜，徐 妍，馬 超，劉世祿，王 佳，東 琴，高敬雨

（北京明德立達(dá)農(nóng)業(yè)科技有限公司，北京 100085）

40%嘧霉·異菌脲懸浮劑的高效液相色譜分析

潘 靜，徐 妍，馬 超，劉世祿，王 佳，東 琴，高敬雨

（北京明德立達(dá)農(nóng)業(yè)科技有限公司，北京 100085）

采用高效液相色譜法測(cè)定40%嘧霉·異菌脲懸浮劑中嘧霉胺和異菌脲的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，使用C18反相柱和紫外可變波長(zhǎng)檢測(cè)器，以乙腈+0.3%冰乙酸水溶液為流動(dòng)相，用外標(biāo)法進(jìn)行分析和定量。結(jié)果表明，嘧霉胺和異菌脲的線性相關(guān)系數(shù)分別為0.999 2和0.999 5，標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為0.12、0.14，變異系數(shù)分別為0.79%、0.56%，平均回收率分別為99.42%、99.23%。

嘧霉胺；異菌脲；高效液相色譜；分析

嘧霉胺（pyrimethanil）是一種新型高效、低毒的苯胺基嘧啶類殺菌劑，有內(nèi)吸傳導(dǎo)及熏蒸作用，主要用于番茄、黃瓜和葡萄等作物，防治灰霉病等病害，對(duì)已產(chǎn)生抗性的灰霉病菌有效［1］。其作用機(jī)理獨(dú)特，通過(guò)抑制病菌侵染酶的分泌，從而阻止病菌的侵染，并殺死病菌。嘧霉胺單劑的分析已有報(bào)道，分析方法有氣相色譜和液相色譜法［1-3］。異菌脲（iprodione）為廣譜型二羧酰亞胺類殺菌劑，廣泛用于防治果樹、蔬菜、谷物病害及水果貯藏期病害，對(duì)香蕉、柑橘、芒果尤其有效［4］。異菌脲具有一定保護(hù)和鏟除作用，能夠抑制孢子萌發(fā)及菌絲生長(zhǎng)。異菌脲的最大殘留限量一直被美國(guó)和歐盟嚴(yán)格監(jiān)測(cè)，目前報(bào)道的異菌脲分析方法有氣相色譜法［5-6］、毛細(xì)管色譜法［7］以及高效液相色譜法［8-9］。嘧霉胺和異菌脲復(fù)配制劑的分析方法尚未見報(bào)道。本文采用反相高效液相色譜法對(duì)40%嘧霉·異菌脲懸浮劑進(jìn)行了測(cè)定，方法準(zhǔn)確、可靠，具有重現(xiàn)性好，分析速度快，分離效率高的優(yōu)點(diǎn)，是生產(chǎn)企業(yè)產(chǎn)品檢測(cè)的理想方法。此方法也可用于對(duì)嘧霉胺和異菌脲原藥的分析。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器和試劑

Agilent 1260高效液相色譜儀（具可變波長(zhǎng)紫外檢測(cè)器、自動(dòng)進(jìn)樣裝置和色譜數(shù)據(jù)處理工作站）；過(guò)濾器（濾膜孔徑0.45 μm）。乙腈（色譜純）；冰乙酸（分析純）；水（新蒸2次蒸餾水）；嘧霉胺標(biāo)樣（≥99.5%）、異菌脲標(biāo)樣（≥99.0%）、40%嘧霉·異菌脲懸浮劑（15%嘧霉胺+25%異菌脲），北京明德立達(dá)農(nóng)業(yè)科技有限公司提供。

1.2 色譜操作條件

色譜柱：不銹鋼柱（150mm×4.6mm），內(nèi)裝ZORBAX SB-C18填充物，粒徑5 μm；檢測(cè)波長(zhǎng)：230 nm；流動(dòng)相：V（乙腈）∶V（0.3%冰乙酸水溶液）=65∶35；流速：1.0 mL/min；進(jìn)樣量：10 μL；柱溫：（25±2）℃。

在上述色譜操作條件下，嘧霉胺的保留時(shí)間約為3.8 min，異菌脲的保留時(shí)間約為4.7 min，見圖1、圖2。

圖1 嘧霉胺、異菌脲標(biāo)樣的高效液相色譜圖

圖2 40%嘧霉·異菌脲懸浮劑的高效液相色譜圖

1.3 溶液配制

1.3.1 標(biāo)樣溶液的配制

分別稱取嘧霉胺標(biāo)樣0.006 2 g、異菌脲標(biāo)樣0.010 3 g（精確至0.000 2 g），置于50 mL容量瓶中，加入適量流動(dòng)相溶解，在超聲波清洗器上脫氣10 min，使標(biāo)樣全部溶解，冷至室溫，用乙腈定容，搖勻后備用。

1.3.2 試樣溶液的配制

準(zhǔn)確稱取試樣0.04 g（精確至0.000 2 g），置于50 mL容量瓶中，加入適量流動(dòng)相溶解，在超聲波清洗器上脫氣10 min，使試樣全部溶解，冷至室溫，用乙腈定容，搖勻，過(guò)0.45 μm濾膜，備用。

1.4 測(cè)定

在上述色譜條件下，待儀器基線穩(wěn)定后，連續(xù)注入數(shù)針標(biāo)樣溶液，計(jì)算各針相對(duì)響應(yīng)值，直至相鄰2針嘧霉胺（或異菌脲）響應(yīng)值相對(duì)變化小于1.5%時(shí)，按照標(biāo)樣溶液、試樣溶液、試樣溶液、標(biāo)樣溶液的順序進(jìn)行測(cè)定。用外標(biāo)法計(jì)算質(zhì)量分?jǐn)?shù)。

1.5 計(jì)算

將測(cè)得的2針試樣溶液以及試樣前后2針標(biāo)樣溶液中的嘧霉胺（或異菌脲）峰面積分別進(jìn)行平均。試樣中嘧霉胺（或異菌脲）的質(zhì)量分?jǐn)?shù)w（%）按下式計(jì)算。

式中：A1—標(biāo)樣溶液中，嘧霉胺（或異菌脲）峰面積的平均值；A2—試樣溶液中，嘧霉胺（或異菌脲）峰面積的平均值；m1—嘧霉胺（或異菌脲）標(biāo)樣的質(zhì)量，g；m2—試樣的質(zhì)量，g；P—標(biāo)樣中嘧霉胺（或異菌脲）的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，%。

1.6 允許差

嘧霉胺、異菌脲2次平行測(cè)定結(jié)果之差，分別應(yīng)不大于0.3%、0.5%，取其算術(shù)平均值，作為測(cè)定結(jié)果。

2 結(jié)果與討論

2.1 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇

對(duì)嘧霉胺和異菌脲標(biāo)樣溶液分別進(jìn)行紫外掃描，得到相應(yīng)的吸收。嘧霉胺在200 nm、270 nm附近均有較大紫外吸收，異菌脲在200 nm附近有最大紫外吸收。在200 nm波長(zhǎng)下雜質(zhì)的響應(yīng)值較大，對(duì)嘧霉胺和異菌脲有一定的干擾。因此，綜合考慮多種因素，最終選擇230 nm作為嘧霉胺、異菌脲的檢測(cè)波長(zhǎng)。

2.2 流動(dòng)相的選擇

對(duì)甲醇+水、乙腈+水、甲醇+冰乙酸水溶液、乙腈+冰乙酸水溶液經(jīng)多次配比試驗(yàn)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，用乙腈+0.3%冰乙酸水溶液（體積比為65∶35）作為流動(dòng)相，流速為1.0 mL/min時(shí)，分離效果最好，出峰時(shí)間短，且峰形尖銳、對(duì)稱。

2.3 分析方法的線性關(guān)系曲線

配制嘧霉胺（或異菌脲）5個(gè)不同質(zhì)量濃度的標(biāo)樣溶液，在上述色譜操作條件下進(jìn)樣分析。以嘧霉胺（或異菌脲）質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線（見圖3、圖4）。嘧霉胺線性方程為y= 14.359 2 x+24.360 0，線性相關(guān)系數(shù)R2=0.999 2；異菌脲線性方程為y=16.788 6 x+93.780 0，線性相關(guān)系數(shù)R2=0.999 5。

圖3 嘧霉胺線性關(guān)系圖

圖4 異菌脲線性關(guān)系圖

2.4 分析方法的精密度

在上述色譜操作條件下對(duì)同一個(gè)樣品進(jìn)行5次平行測(cè)定。測(cè)得嘧霉胺的標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.12，變異系數(shù)為0.79%；異菌脲的標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.14，變異系數(shù)為0.56%（見表1）。該方法的精密度能滿足定量分析要求。

表1 40%嘧霉·異菌脲懸浮劑精密度測(cè)定

2.5 分析方法的準(zhǔn)確度

為了考察分析方法的準(zhǔn)確度，測(cè)定了產(chǎn)品的回收率。在已知含量的40%嘧霉·異菌脲懸浮劑中加入一定量的嘧霉胺、異菌脲標(biāo)樣，按上述色譜操作條件進(jìn)行測(cè)定，并計(jì)算回收率。嘧霉胺平均回收率為99.42%，異菌脲平均回收率為99.23%（見表2）。

表2 40%嘧霉·異菌脲懸浮劑準(zhǔn)確度測(cè)定

3 結(jié)論

本文提出的40%嘧霉·異菌脲懸浮劑中有效成分質(zhì)量分?jǐn)?shù)的分析方法，具有較高的準(zhǔn)確度和精密度，并且操作簡(jiǎn)便、快速，是企業(yè)進(jìn)行產(chǎn)品檢測(cè)的理想方法。

［1］季汝泉，楊俊柱.嘧霉胺的高效液相色譜分析研究［J］.安徽化工，2005（2）：50-51.

［2］蔣廷福.嘧霉胺高效液相色譜和氣相色譜2種分析方法研究［J］.廣西植保，2012，25（1）：3-5.

［3］李吉海，宋國(guó)江，張明宇.嘧霉胺的高效液相色譜分析［J］.農(nóng)藥，2002，43（9）：22.

［4］朱偉軍.反相高效液相色譜法測(cè)定異菌脲原藥含量［J］.河南化工，2002，27（11）：44-45.

［5］張學(xué)忠.異菌脲的氣相色譜分析［J］.現(xiàn)代農(nóng)藥，2002，1（6）：15-16.

［6］中國(guó)農(nóng)業(yè)百科全書總編委會(huì)農(nóng)藥卷編委會(huì).中國(guó)農(nóng)業(yè)百科全書：農(nóng)藥卷［M］.北京：農(nóng)業(yè)出版社，1993：554.

［7］單煒力，簡(jiǎn)秋.復(fù)配制劑中異菌脲的毛細(xì)管氣相色譜分析［J］.農(nóng)藥科學(xué)與管理，2000，21（1）：7-8.

［8］張武，張強(qiáng)，曹宗興，等. 50%異菌脲可濕性粉劑的高效液相色譜定量分析［J］.天津農(nóng)業(yè)科學(xué)，2010，16（5）：91-93.

［9］呂岱竹，韓紅新.用固相萃取—高效液相色譜法測(cè)黃皮中的異菌脲殘留量［J］.熱帶作物學(xué)報(bào)，2006，27（4）：101-102.

Analysis of Pyrimethanil+Iprodione 40%SC by HPLC

PAN Jing，XU Yan，MA Chao，LIU Shi-lu，WANG Jia，DONG Qin，GAO Jing-yu
（Beijing Mindleader Agroscience Co.，Ltd.，Beijing 100085，China）

A method was developed for the determination of pyrimethanil + iprodione 40%SC by HPLC on C18column，with variable wavelength UV detector，using acetonitrile + 0.3%acetic acid aqueous solution as mobile phase. The results showed that the linear coefficients of pyrimethanil and iprodione were 0.999 2 and 0.999 5，the standard deviations were 0.12 and 0.14，the variation coefficients were 0.79%and 0.56%，the average recoveries were 99.42%and 99.23%，respectively.

pyrimethanil；iprodione；HPLC；analysis

TQ 450.7

A

10.3969/j.issn.1671-5284.2016.02.009

2015-10-31

潘靜（1974—），女，安徽省鳳陽(yáng)縣人，工程師，主要從事農(nóng)藥產(chǎn)品的分析與檢測(cè)工作。Tel：010-62975002；E-mail：panjing@mdldagro.com

顧林玲）

◆環(huán)境與殘留◆