白芷總揮發油對大鼠佐劑性關節炎的影響

孫守坤 叢立新 郭環宇

(吉林省腫瘤醫院中西醫結合科，吉林 長春 130012)

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白芷總揮發油對大鼠佐劑性關節炎的影響

孫守坤 叢立新1郭環宇

(吉林省腫瘤醫院中西醫結合科，吉林 長春 130012)

目的 探討白芷總揮發油(EOAD)對完全弗氏佐劑(CFA)誘導大鼠佐劑性關節炎的治療作用，并探討其作用機制。方法 Wistar 大鼠隨機分為空白對照組、模型組、地塞米松組(5 mg/kg)、EOAD低劑量組(70 mg/kg)和高劑量組(140 mg/kg)。除空白對照組外，各組大鼠足趾皮內注射CFA誘導佐劑性關節炎模型，于造模第15天起連續給藥7 d，觀察EOAD對大鼠體重、足腫脹及臟器指數的影響；檢測佐劑性關節炎大鼠血清中腫瘤壞死因子(TNF)-α、前列腺素(PG)E2、一氧化氮(NO) 含量及一氧化氮合酶(NOS)活力。結果 與空白對照組比較，模型組大鼠體重增長緩慢，足腫脹明顯，關節炎評分增加，胸腺和脾指數明顯增加，血清中NO、PGE2和TNF-α含量及NOS活力均明顯升高(P<0.05或P<0.01)。與模型組比較，EOAD治療可顯著減輕佐劑性關節炎大鼠右后足的足腫脹(P<0.05)，降低關節炎評分，并使大鼠體重及臟器指數增加，同時明顯降低血清中NOS活力和NO、TNF-α、PGE2 的含量(P<0.01)。結論 EOAD對大鼠佐劑性關節炎有顯著抑制作用，其作用機制可能與降低血清炎癥細胞因子TNF-α，PGE2水平及NOS活力有關。

白芷；佐劑性關節炎

風濕性關節炎、頸椎病、肩周炎、滑膜炎等疾病均屬于無菌性炎癥，發病率很高，嚴重危害人類的健康〔1〕。中醫將無菌性炎癥歸屬于“痹癥”，在治療上有悠久的歷史，具有多層面、多靶點的獨特優越性〔2〕。白芷為40種大宗常用藥材之一，始載于《神農本草經》，性溫、味辛，具有祛風止痛、排膿消腫之功效，主治感冒頭痛、眉棱骨痛、鼻塞、鼻淵頭痛、牙痛、風濕痹痛、瘡瘍腫痛等，是《中國藥典》中出現頻率最高，效果最好的中藥抗炎鎮痛藥之一〔3〕。揮發油是白芷的主要有效成分。有研究證實，白芷總揮發油(EOAD)可通過降低疼痛模型大鼠腦干去甲腎上腺素(NE)含量，升高多巴胺(DA)、5-羥色胺(5-HT)含量，起到確切的鎮痛作用〔4〕。但EOAD是否具有抗炎作用尚未見報道。本研究擬觀察EOAD對炎癥反應的抑制作用，并探討其可能機制。

1 材料與方法

1.1 藥品與試劑 EOAD(沈陽索福爾超臨界萃取設備有限公司制備，川白芷飲片4 kg，粉碎過40目篩，經CO2超臨界萃取，萃取條件：壓力18 mPa，溫度40℃，時間2 h，得EOAD 20 g)。完全弗氏佐劑(CFA，北京協和醫科大學藥物研究所提供)，地塞米松(河南潤弘制藥股份有限公司)，一氧化氮合酶(NOS)和一氧化氮(NO)檢測試劑盒(南京建成生物工程研究所)，前列腺素(PG)E2和腫瘤壞死因子(TNF)-α ELISA檢測試劑盒(北京碧云天生物技術研究所)。

1.2 儀器 PV-200足趾容積測量儀(成都泰盟科技有限公司)；Infinite M200TECAN酶標儀(瑞士TECAN集團公司)；ESJ110-4B電子分析天平(沈陽龍騰電子有限公司)；MH-2微量振蕩器(海門市其林貝爾儀器制造有限公司)；低溫離心機(美國Thermo公司)。

1.3 動物 雄性Wistar大鼠，體重(170±10)g，長春市億斯實驗動物技術有限責任公司提供，動物合格證號：SCXK(吉)：2012-0005。實驗前，大鼠適應性喂養1 w，選擇活動正常和狀態良好的鼠納入實驗，分籠飼養，飼養室溫度控制在18℃～22℃，濕度40%～60%，自由飲食飲水，3 d更換1次無菌墊料。

1.4 大鼠佐劑性關節炎模型制備及給藥 40只Wistar雄性大鼠隨機分為空白對照組、模型組、地塞米松組、EOAD低、高劑量組。除空白對照組大鼠外，其余四組大鼠右后足底部常規消毒，皮內注射CFA 10 mg/ml，0.1 ml/只，誘導大鼠佐劑性關節炎模型。于造模后第15天，地塞米松組大鼠給予5 mg/kg地塞米松皮下注射，EOAD治療組大鼠分別給予EOAD 70 mg/kg和140 mg/kg灌胃，而空白對照組及模型組大鼠分別給予等體積蒸餾水灌胃，連續用藥7 d。

1.5 關節炎的評價 造模前后、治療前后仔細觀察大鼠足部腫脹情況、活動情況、體毛的色澤、神志及進食情況的動態變化。與此同時，每3 d測量1次大鼠體重及大鼠右足足爪容積(ml)。足腫脹度計算：足腫脹度(ml)=致炎后致炎側后足容積(ml)-致炎前同側后足容積(ml)。

1.6 血清中NO，PGE2，TNF-α含量及NOS活性的檢測 造模后第24天，末次測量足爪容積后，各組大鼠以烏拉坦(100 mg/kg)腹腔注射麻醉，腹主動脈取血并處死。每只大鼠約取血4～5 ml，分離血清，用于檢測NO、PGE2、TNF-α含量及NOS活力。血清NO含量及NOS活力檢測采用酶法，PGE2和TNF-α含量采用ELISA方法，具體檢測方法參照試劑盒說明書進行。

1.7 統計學方法 應用SPSS13.0軟件，多組間比較用單因素方差分析(One Way ANOVA)，兩組間比較采用最小顯著差(LSD)t檢驗。

2 結 果

2.1 EOAD對佐劑性關節炎大鼠體重的影響 造模前各組大鼠體重無顯著性差異，空白對照組大鼠隨著時間的增長體重呈現持續穩定增長的趨勢。與對照組相比，模型組大鼠在注射CFA后體重增長緩慢，并于第12天體重(234.86±11.36)g低于對照組〔(248.71±11.27)g，P<0.05〕。與模型組相比，EOAD 給藥組可不同程度地增加關節炎大鼠體重，于第18天(即給藥后第4天)體重高于模型組(P<0.05)。地塞米松組大鼠體重明顯下降，低于空白對照組和模型組(P<0.01)。見圖1。

2.2 EOAD對佐劑性關節炎大鼠足腫脹的影響 各組大鼠右后足容積在造模前(0 d)沒有明顯差別，從注射CFA后第3天起，各組大鼠右后足即有明顯腫脹，說明大鼠原發性足腫脹造模成功。與模型組比較，地塞米松組大鼠右后足腫脹從給藥后第2天起明顯減輕(P<0.01)，EOAD低、高劑量組大鼠右后足腫脹從給藥后第4天(即造模第18天)起也開始明顯減輕(P<0.05)。見圖2。

2.3 EOAD對佐劑性關節炎大鼠胸腺和脾指數的影響 如表1所示，模型組大鼠的胸腺、脾指數明顯高于空白對照組(P<0.05)；而低、高劑量EOAD組大鼠的胸腺、脾指數低于模型組(P<0.05)。地塞米松組大鼠的胸腺、脾指數不僅明顯低于模型組而且低于空白對照組(P<0.01)。見表1。

2.4 EOAD對大鼠血清NO、NOS、PGE2和TNF-α的影響 與空白對照組比較，模型組大鼠血清NO含量、NOS活力、PGE2和TNF-α水平均明顯升高(P<0.01)；與模型對照組比較，地塞米松組、EOAD低、高劑量組大鼠血清NO含量、NOS活力、PGE2和TNF-α水平均顯著降低(P<0.05 或P<0.01)。見表1。

與空白對照組比較：1)P<0.05，2)P<0.01；與模型組比較：3)P<0.05，4)P<0.01，下圖表同圖1 EOAD對佐劑性關節炎大鼠體重的影響

圖2 EOAD對佐劑性關節炎大鼠足腫脹的影響

組別胸腺指數(%)脾指數(%)NO(μmol/ml)NOS(U/ml)PGE2(ng/L)TNF?α(ng/L)空白對照組016±0024027±00262384±5921446±38233537±46491770±189模型組021±00411)035±00371)7041±12042)5296±10262)45833±38832)2170±1991)EOAD低劑量組018±0038031±00426691±7284316±2913)40511±55343)2026±1423)EOAD高劑量組017±00213)025±00293)5317±8823)3708±2843)36081±33734)1924±1473)地塞米松組003±00034)021±00364)3627±8334)2152±3144)34801±39874)1859±1673)

3 討 論

白芷為傘形科( Umbeliferae)當歸屬 (Angelica )植物的根，是一種臨床常用的解表藥，經適當配伍廣泛用于全身各部位的疼痛病癥，如中藥復方制劑都梁丸、元胡止痛片等均含有白芷，療效顯著〔5〕。白芷具有明顯的鎮痛、抗炎和解痙作用〔6〕，但關于白芷發揮藥效的物質基礎研究較少。

佐劑性關節炎(AA)大鼠模型是以細胞免疫功能紊亂為主的經典自身免疫性炎癥模型，其關節組織學特點包括滑膜增生、單核細胞浸潤、關節軟骨及骨組織破壞，與人類的類風濕關節炎(RA)相似〔7〕。本研究結果顯示EOAD對FCA誘導的大鼠佐劑性關節炎即自身免疫性炎癥具有一定抑制作用。雖然其對佐劑性關節炎大鼠關節腫脹的改善程度弱于地塞米松，但是EOAD治療組大鼠的一般狀況明顯改善，如飲食量增加、體重增長和關節活動障礙減輕等，而地塞米松組在顯著抑制炎癥的同時大鼠出現皮毛無光澤、食欲減退、體重減輕甚至低于模型組等癥狀，提示EOAD對大鼠的副作用弱于地塞米松。

胸腺和脾臟是機體的主要免疫器官，在某些免疫抑制劑的作用下二者均可出現不同程度的萎縮；而免疫增強劑可使二者增重〔8〕。因此，胸腺和脾臟指數是觀察藥物對免疫功能影響的重要指標。地塞米松可顯著抑制機體免疫功能，甚至造成胸腺萎縮，而本實驗的研究結果與其一致〔9〕。EOAD可能具有免疫調節作用，并有可能是其治療關節炎的作用途徑，這方面還需要進一步驗證。

炎癥因子的釋放在炎癥反應的產生和加劇過程中起到了重要作用。其中NO對機體免疫系統有雙重作用，低水平的NO作為信號分子，可參與免疫應答的信號轉導，而高水平NO作為細胞毒性因子卻發揮細胞毒性作用，并介導免疫損傷〔10〕。RA時關節軟骨細胞分泌大量NO，引起RA軟骨破壞；同時，NO可促進巨噬細胞合成釋放TNF-α和白細胞介素(IL)-1等炎性細胞因子，導致滑膜和炎性細胞產生〔11〕。NO也可通過激活環氧酶促進PGE2產生，PGE2能選擇性抑制Ts細胞功能，導致B細胞功能亢進，釋放出大量的抗體，損傷體內組織器官，這是形成RA 的重要原因〔12〕。本文結果表明EOAD治療使佐劑性關節炎大鼠血清中NO合成關鍵酶NOS活力及NO水平降低的同時，血清中TNF-α、PGE2水平也明顯下降，說明EOAD的抗感染作用與其抑制炎癥病變部位炎性因子活性和降低這些炎癥介質含量有關。

1 Li R，Sun J，Ren LM，etal.Epidemiology of eight common rheumatic diseases in China：a large-scale cross-sectional survey in Beijing〔J〕.Rheumatology (Oxford)，2012；51(4)：721-9.

2 Li Y，Li R，Ouyang Z，etal.Herb network analysis for a famous TCM doctor′s prescriptions on treatment of rheumatoid arthritis〔J〕.Evid Based Complement Alternat Med，2015；2015:451319.

3 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)〔M〕.北京：中國醫藥科技出版社，2010.

4 聶 紅，沈映君，曾 南，等.白芷總揮發油對疼痛模型大鼠神經遞質的影響〔J〕.中藥藥理與臨床，2002；18(3)：11-4.

5 鄧虹珠，陳育堯，陳江華，等.都梁軟膠囊的藥效及毒性試驗〔J〕.第一軍醫大學學報，2002；22：561-3.

6 Kang OH，Chae HS，Oh YC，etal.Anti-nociceptive and anti-inflammatory effects of Angelicae dahuricae radix through inhibition of the expression of inducible nitric oxide synthase and NO production〔J〕.Am J Chin Med，2008；36(5)：913-28.

7 Taurog JD，Argentieri DC，McReynolds RA.Adjuvant arthritis〔J〕.Methods Enzymol，1988；162：339-55.

8 Handy RD，Abd-El Samei HA，Bayomy MF，etal.Chronic diazinon exposure：pathologies of spleen，thymus，blood cells，and lymph nodes are modulated by dietary protein or lipid in the mouse〔J〕.Toxicology，2002；172(1)：13-34.

9 Wyllie AH.Glucocorticoid-induced thymocyte apoptosis is associated with endogenous endonuclease activation〔J〕.Nature，1980；284(5756)：555-6.

10 Presle N，Cipolletta C，Jouzeau JY，etal.Cartilage protection by nitric oxide synthase inhibitors after intraarticular injection of interleukin-1beta in rats〔J〕.Arthritis Rheum，1999；42(10)：2094-102.

11 王 強，徐玉川，董 巍.全身調控一氧化氮水平對大鼠佐劑性關節炎的影響〔J〕.中華風濕病學雜志，2002；6(3)：209-10.

12 Amin AR，Attur M，Abramson SB.Nitric oxide synthase and cyclooxygenases：distribution，regulation，and intervention in arthritis〔J〕.Curr Opin Rheumatol，1999；11(3)：202-9.

〔2015-11-19修回〕

(編輯 袁左鳴)

郭環宇(1978-)，男，主治醫師，主要從事中西醫結合研究。

孫守坤(1978-)，男，主治醫師，主要從事中西醫結合研究。

R28

A

1005-9202(2016)22-5544-03；

10.3969/j.issn.1005-9202.2016.22.022

1 長春中醫藥大學第一附屬醫院干部二療區