HPLC法測定枸骨葉中金絲桃苷的含量

蔡　偉（武漢市中醫(yī)醫(yī)院　武漢430014）

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HPLC法測定枸骨葉中金絲桃苷的含量

蔡偉（武漢市中醫(yī)醫(yī)院武漢430014）

摘要：目的：建立HPLC法測定枸骨葉中金絲桃苷含量。方法：色譜柱Kromasil-C18（4.6mm×250mm，5μm）；流動相為乙腈-0.1%磷酸（28:72）；流速1.0mL·min-1；檢測波長356nm；柱溫25℃。結(jié)果：金絲桃苷在0.20～4.00μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好（r=0.9998），平均回收率為100.17%，RSD為1.10%；枸骨葉中金絲桃苷的平均含量為1.18mg·g-1。結(jié)論：本法操作簡便，準(zhǔn)確性高，重現(xiàn)性好，可用于測定枸骨葉中金絲桃苷的含量。

關(guān)鍵詞：HPLC枸骨葉金絲桃苷含量測定

枸骨葉始載于《本草拾遺》，又名貓兒刺、枸骨刺，為冬青科植物枸骨Ilex cornuta Lindl.ex Paxt.的干燥葉，具有清熱養(yǎng)陰、益腎、平肝之功效，臨床上常用于肺癆咯血、骨蒸潮熱、頭暈?zāi)垦５劝Y[1]。現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，枸骨葉還具有降血脂、抗心肌缺血、抗氧化等作用。枸骨葉的化學(xué)成分復(fù)雜，主含黃酮及三萜類成分[2]。關(guān)于枸骨葉化學(xué)成分的含量測定，國內(nèi)學(xué)者做了研究，已有報道。本文采用HPLC法建立枸骨葉中金絲桃苷的含量測定分析方法，現(xiàn)報道如下。

1　儀器與試藥

LC-20A型高效液相色譜儀（日本島津）；XS205型分析天平（瑞士梅特勒）。

枸骨葉（安徽亳州藥材市場，經(jīng)鑒定符合現(xiàn)行藥典標(biāo)準(zhǔn)）；金絲桃苷對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號：111521-201205）；乙腈（色譜純），水為自制蒸餾水。

2　方法與結(jié)果

2.1色譜條件：色譜柱為：Kromasil-C18（4.6mm×250mm，5μm）；流動相：乙腈-0.1%磷酸（28∶72），流速1.0mL·min-1，檢測波長356nm，柱溫25℃。

2.2對照品溶液的制備：取已干燥的金絲桃苷對照品適量，精密稱定，加甲醇制成含金絲桃苷0.2mg·mL-1的溶液，搖勻，即得。

2.3供試品溶液的制備：取粉碎至中粉的枸骨葉藥材約2g，精密稱定，置錐形瓶中，精密加入75%甲醇100mL，稱定，超聲提取1h，放冷，再稱定重量，用75%甲醇補(bǔ)重，搖勻，濾過（0.45μm），取續(xù)濾液，即得。

2.4線性關(guān)系考察：精密吸取金絲桃苷對照品溶液1μL、2μL、4μL、10μL、20μL，進(jìn)樣測定峰面積，以峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得線性方程Y=548378X+1398.2，r= 0.9998，結(jié)果顯示金絲桃苷進(jìn)樣量在0.20～4.00μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.5精密度考察：精密吸取金絲桃苷對照品溶液10μL，重復(fù)進(jìn)樣6次，測定色譜峰面積，RSD為0.63%，結(jié)果顯示儀器精密度良好。2.6穩(wěn)定性考察：精密吸取枸骨葉供試品溶液，分別于0、2、4、6、12、24h進(jìn)樣，測定色譜峰面積，RSD為1.13%，結(jié)果顯示枸骨葉供試品溶液中金絲桃苷在24h內(nèi)穩(wěn)定。

2.7重復(fù)性考察：分別取同一份枸骨葉藥材粉末樣品，照“2.3”項下制備方法，制備6份供試品溶液，測定色譜峰面積，RSD為1.69%，表明該方法重復(fù)性良好。

2.8加樣回收率考察：分別取已知含量的枸骨葉藥材粉末樣品6份，精密稱定，分別加入金絲桃苷對照品適量，照“2.3”項下制備方法，制備供試品溶液，分別測定色譜峰面積，計算加樣回收率，結(jié)果顯示金絲桃苷平均回收率100.17%，RSD為1.10%。

2.9枸骨葉藥材含量測定：取3批次枸骨葉藥材，粉碎至中粉，照“2.3”項下方法制備供試品溶液，測定色譜峰面積，計算金絲桃苷含量，結(jié)果顯示3批枸骨葉藥材樣品中金絲桃苷含量分別為1.10、1.19、1.25mg·g-1，平均含量為1.18mg·g-1。

3　討論

金絲桃苷是一種從天然植物中提取的黃酮醇苷類化合物，普遍存在于金絲桃科、薔薇科、唇形科等植物的果實與全草中，具有明顯的抗炎、抗血栓以及抗肝損傷等作用[3～5]。

現(xiàn)行藥典收載了枸骨葉，但尚未對所含成分進(jìn)行含量測定。本文采用HPLC法建立了枸骨葉中金絲桃苷含量測定分析方法，該方法操作簡便，準(zhǔn)確性高，重復(fù)性好，可為今后對其質(zhì)量控制提供數(shù)據(jù)依據(jù)。

參考文獻(xiàn)

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[3]KU SK，KWAK S，KWON O J，et al.Hyperoside inhibits highglucose-induced vascular inflammation in vitro and in vivo[J]．Inflammation，2014，37（5）：1389-1400.

[4]KU S K，KIM T H，LEE S，et al.Antithrombotic and profibrinolytic activities of isorhamnetin-3-O-galactoside and hyperoside [J].Foodchem toxicol，2013，53：197-204.

[5]黃明春，陳劍鴻，胡小剛，等.金絲桃苷對CCl4誘導(dǎo)大鼠急性肝損傷抗氧化應(yīng)激研究[J].局解手術(shù)學(xué)雜志，2013，22（6）：588-590.

中圖分類號：R284.1

文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A

文章編號：1672-8351（2016）01-0003-01