甜玉米芯多糖提取及抗凝血活性初探

馬永強,王 鑫,高 爽,周恪馳

(哈爾濱商業大學 食品工程學院省高校食品科學與工程重點實驗室,黑龍江哈爾濱 150076)

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甜玉米芯多糖提取及抗凝血活性初探

馬永強,王 鑫*,高 爽,周恪馳

(哈爾濱商業大學 食品工程學院省高校食品科學與工程重點實驗室,黑龍江哈爾濱 150076)

對甜玉米芯多糖進行提取并純化,并對其抗凝血活性進行初步研究。采用水提法提取甜玉米芯多糖,三氯乙酸、酶及Sevag-酶法脫除蛋白,雙氧水和樹脂法進行脫色研究,多糖醇沉分級后進行體內外抗凝血研究。結果表明:水提法提取甜玉米芯多糖得率為16.7%,Sevag-酶法脫蛋白效果最好,蛋白脫除率為84.94%,多糖保留率為70.74%。D301R陰離子大孔樹脂脫色效果最佳,脫色率為46.17%,多糖保留率為99.23%。甜玉米芯醇沉分級后多糖對出血時間(BT)和凝血時間(CT)均有顯著影響(p<0.05),各組分均可以延長活化部分凝血活酶時間(APTT)和凝血酶時間(TT)(p<0.05),但對凝血酶原時間(PT)影響不顯著(p>0.05),其中SCP-80抗凝血效果較好。

甜玉米芯,多糖,提取,抗凝血

隨著人們的經濟水平不斷提高以及膳食的變化,高脂和其導致的血栓日漸損害人體健康[1]。抗凝血藥物在血栓的治療過程中起到舉足輕重的作用,但是有一定副作用,如容易使血小板減少[2],急需研發新型安全有效的抗凝血藥物在天然產物中提取具有抗凝血作用的有效成分,進而研發新藥或開發功能性食品,具備周期短、節約成本、低毒的優點[3],是當前抗凝藥物研究的熱點。

甜玉米,又稱蔬菜玉米,是歐美等發達國家的主要蔬菜之一。因其營養價值高,且具有甜、鮮、脆、嫩的特色而深受各階層消費者青睞[4]。甜玉米芯是甜玉米果穗去籽脫粒后的穗軸,一般占甜玉米穗重量的20%～30%,具有組織均勻、硬度適宜、韌性好、吸水性強、耐磨性能好等優點,是一種可回收利用的資源。目前,很大一部分甜玉米芯主要用在造紙制漿、生物制糖和家畜飼料等方面,部分用作糠醛、木糖醇等產品的原料,資源浪費現象嚴重[5-7]。多糖是甜玉米芯中所含有的具有重要生物活性的成分之一。甜玉米芯多糖是一種多組分的水溶性糖,其中含有少量的酸性糖。多糖可用于抗氧化,抗腫瘤,防治糖尿病,高血脂等疾病,可作為藥物進行開發利用。趙銳等[8]研究了玉米芯多糖及其硫酸酯的抗凝血活性及其機制,實驗表明玉米芯粗多糖具有抗凝血活性,并通過內源性凝血途徑和共同凝血途徑來實現抗凝血作用。但目前,國內外對甜玉米芯的抗凝血活性還未有研究報道。因此,本文選取甜玉米芯作為原料,提取甜玉米芯多糖,并對其純化方法和分步醇沉進行研究,同時研究甜玉米芯多糖及其不同級分的抗凝血活性,為甜玉米芯的開發利用提供科學依據。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

甜玉米芯 昊偉集團有限公司;雄性ICR小鼠 長春億斯動物中心;APTT、TT、PT試劑盒 上海太陽生物科技有限公司;正己烷、氯仿、正丁醇、雙氧水、無水乙醇、溴化鉀、生理鹽水,均為分析純。

FW177型中草藥粉粹機 天津市泰斯特儀器有限公司;81-2型恒溫磁力攪拌器 上海縣曹行無線電元件廠;TDL-5-A型飛鴿牌低速大容量離心機 上海安亭科學儀器廠;SHB-ⅢA型循環水式多用真空泵 鞏義市予華儀器有限責任公司;TU-1900型雙光束紫外可見分光光度計 上海奧析科學儀器有限公司;CA7000全自動凝血儀 北京普利生儀器有限公司;BILON-1000CT超聲波提取儀 上海比朗儀器制造有限公司;Spectrum one傅里葉紅外光譜儀 美國Perkin-Elmer公司。

1.2 實驗方法

1.2.1 甜玉米芯多糖的提取

1.2.1.1 甜玉米芯多糖提取工藝 工藝流程：原料→干燥(60 ℃、24 h)→粉碎→脫脂→過篩(80 目)→提取→過濾→上清液→濃縮→除蛋白→脫色→靜置→離心→上清液→冷凍干燥→多糖粗品

甜玉米芯經烘箱50 ℃干燥,用粉碎機粉碎,過80目篩,用正己烷脫脂。甜玉米芯在溫度100 ℃、料液比1∶20(g∶mL)、時間3 h的條件下進行熱水浸提,離心,取上清液,得到甜玉米芯粗多糖溶液,每組進行3次平行實驗,于4 ℃貯存備用,命名為SCP。

1.2.1.2 多糖標準曲線得繪制 準確稱取標準葡萄糖樣品(預先在105 ℃恒溫干燥箱干燥至恒重)2.00 g,溶解定容至250 mL的容量瓶中,吸取1 mL置于100 mL容量瓶中定容,即得濃度為80 μg/mL葡萄糖溶液,分別吸取0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2 mL葡萄糖溶液,各用蒸餾水稀釋至體積為2.00 mL制成葡萄糖溶液稀釋液,采用苯酚-硫酸法先后依次加入1.00 mL質量分數為6%的苯酚溶液和5.00 mL濃硫酸,搖勻,室溫放置20 min,待冷卻后于490 nm測吸光值。橫坐標為多糖濃度,縱坐標為吸光值,繪制標準曲線。

1.2.1.3 多糖含量的測定 準確吸取0.1 mL甜玉米芯多糖提取液,定容至50 mL。取1.0 mL定容液,采用苯酚-硫酸法測定樣品的吸光值,根據葡萄糖標準曲線方程計算甜玉米芯多糖得率。計算公式如下:

式(1)

式中:X-多糖得率,%;c-測量濃度,μg/mL;n-稀釋倍數;V-提取液體積,mL;m-原料干重,g。

1.2.2 甜玉米芯多糖純化

1.2.2.1 甜玉米芯多糖脫蛋白方法的選擇 三氯乙酸法脫蛋白：吸取5份等量甜玉米芯粗多糖提取溶液20 mL,分別加入質量分數為10%、20%、30%、40%、50%三氯乙酸試劑20 mL,充分混勻后,在30 ℃條件下靜置過夜后,離心(3000 r/min 10 min),收集上清液[9]。采用苯酚硫酸法測定多糖保留率,福林酚法測定蛋白質脫除率。

Sevag法脫蛋白：多糖溶液與Sevag試劑體積比為4∶1混合,常溫下攪拌1 h,使其充分混勻,于分液漏斗中靜置1 h,除去有機試劑層和蛋白層。取適量上層甜玉米芯粗多糖溶液進行粗多糖和蛋白質含量測定[10]。繼續向剩余的上層溶液中添加Sevag試劑,方法同上,重復上述步驟3次。測定方法同1.2.2.1。

木瓜蛋白酶法脫蛋白：吸取50 mL的甜玉米芯粗多糖提取溶液,添加酶量為2%,調節pH至7,酶解后(50 ℃,2 h),沸水浴5 min,冷卻后離心(3000 r/min,10 min),除去變性酶沉淀[11]。測定方法同1.2.2.1。

Sevag-酶法脫蛋白：采用木瓜蛋白酶法處理后進一步用Sevag法脫蛋白[12],測定方法同1.2.2.1。

脫蛋白指標的計算

式(2)

式中:C1為脫蛋白處理前甜玉米芯多糖液中粗多糖含量;C2為脫蛋白處理后甜玉米芯多糖液中粗多糖含量;

式(3)

式中:A1為脫蛋白處理前甜玉米芯多糖液中蛋白含量;A2為脫蛋白處理后甜玉米芯多糖液中蛋白含量。

1.2.2.2 甜玉米芯多糖脫色方法的選擇 采用H2O2和靜態吸附法(活性炭、D301陰離子交換樹脂、D152陽離子交換樹脂、AB-8大孔吸附樹脂、201×7陰離子交換樹脂)對甜玉米芯多糖溶液脫色,選擇脫色率較高及多糖損失率較低的方法。

H2O2法：將30%濃度的H2O2加入甜玉米芯多糖溶液中至溶液體積的40%,在40 ℃恒溫水浴鍋中保溫2 h,分別在400、490 nm處測定其吸光度[13],計算脫色率及多糖損失率。

靜態吸附法：采取靜態吸附法對多糖溶液脫色,取預處理后的活性炭、D301陰離子交換樹脂、D152陽離子交換樹脂、AB-8大孔吸附樹脂、201×7陰離子交換樹脂按2∶15(g∶mL)分別加入已除蛋白的甜玉米芯多糖溶液[14-15],振蕩2 h(25 ℃,120 r/min)后取濾液,分別在400、490 nm處測定其吸光度,計算脫色率及多糖損失率。

計算公式

式(4)

式中:A1-400 nm處脫色前的吸光值;A2-400 nm處脫色后的吸光值

式(5)

式中:C1為脫色前甜玉米芯多糖液中粗多糖含量;C2為脫色后甜玉米芯多糖液中粗多糖含量。

1.2.2.3 紫外吸收光譜分析 準確稱取甜玉米芯粗多糖組分2mg,加入蒸餾水充分溶解,配制多糖溶液,以蒸餾水作為空白對照,在190～400nm波長范圍內進行紫外光譜掃描。

1.2.3 甜玉米芯多糖分級 取9份濃縮液各15mL,分別以乙醇濃度10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%和90%進行醇沉靜置過夜。取200mL濃縮液,以乙醇濃度10%進行醇沉靜置過夜,離心,得到醇沉物稱量質量。將醇沉物復溶,定容至20mL,采用苯酚-硫酸法測定多糖含量,計算得率命名為SCP-10。將離心所得上清液添加乙醇至濃度為20%繼續醇沉,收集醇沉物,命名為SCP-20。依照上述步驟操作,再依次調整乙醇濃度30%、40%、50%、60%、70%、80%和90%進行醇沉。

1.2.4 紅外光譜檢測甜玉米芯多糖及其不同級分 分別稱取干燥的甜玉米芯不同級分多糖1.0mg于瑪瑙研缽,與溴化鉀(KBr)粉末混合研磨均勻,在壓片機上壓片,壓力在 8MPa左右,保持5min,樣品放入樣品室的光路中,操作OPUS軟件,使紅外光譜儀在 4000～450cm-1波長范圍內進行光譜掃描。

1.2.5 甜玉米芯多糖及不同級分抗凝血活性研究 選取ICR小鼠30只,取分步醇沉后10%～30%、40%～60%和70%～90%三個階段得率最高的三個組分(SCP-30、SCP-50、SCP-80)進行抗凝血實驗研究,按照100mg/kg劑量SCP、SCP-30、SCP-50、SCP-80腹腔注射,生理鹽水為對照組,隨機分成5組。

1.2.5.1 體內抗凝血活性研究 小鼠全凝血時間(CT)測定：使用眼科鑷迅速將小鼠一側的眼球摘除,在載玻片的兩端分別滴1滴血滴,直徑5mm左右。馬上用秒表計時,每隔10s用干凈針頭自血滴邊緣向內輕微挑動1次,觀察是否挑起血絲。從開始采血到挑起血絲的所用時間為CT。而另外1滴血用來判斷正常凝血情況。記錄各組小鼠的CT[16]。

小鼠出血時間(BT)的測定：腹腔注射大約20min后,用手術刀在小鼠尾尖3mm處迅速切斷,到血流出時開始用秒表計時,每隔30s用濾紙在尾尖吸1次血滴,直到沒有血溢出(即濾紙上無血點時截止),記錄BT[17]。

1.2.5.2 體外抗凝血活性研究 超聲波提取的甜玉米芯多糖及不同級分按100mg/kg劑量進行實驗,以生理鹽水為對照組,分別取1mL不同組溶液加入清潔試管后,于40 ℃真空干燥,加入相應血漿0.5mL,測定活化部分凝血活酶時間(APTT)、凝血酶時間(TT)和凝血酶原時間(PT)。

2 結果與討論

2.1 甜玉米芯多糖提取結果分析

在490nm下測得葡萄糖標準曲線,如圖1,吸光度與葡萄糖質量濃度之間的回歸方程為:y=0.0146x+0.0021,R2=0.9997,在濃度范圍0～48μg/mL內回歸方程線性顯著。根據標準曲線,采用苯酚硫酸法測得甜玉米芯多糖平均得率為16.67%。

圖1 葡萄糖標準曲線Fig.1 The standard curve of glucose

2.2 甜玉米芯多糖脫蛋白方法結果分析

由圖2可知,三氯乙酸法蛋白脫除率為73.12%,多糖保留率為50.94%;Sevag法蛋白脫除率最高為96.31%,幾乎完全脫除,多糖保留率較低為59.73%;木瓜蛋白酶法蛋白脫除率最低為44.32%,多糖保留率較高為70.65%;Sevag-酶法蛋白脫除率較高為84.94%,多糖保留率最高為70.72%。三氯乙酸法是酸性物質,能使蛋白質帶正電荷從而與酸根負離子結合成不溶性的鹽類,并伴隨蛋白質分子變性,三氯乙酸同樣會對多糖產生破壞,產生不期的結果[18];Sevag法是經典的脫蛋白質方法,條件比較溫和,但需反復多次才能除去盡量多的蛋白質,通常耗時較長,對于少量與多糖結合很牢或被多糖包裹的蛋白,用Sevage法很難除去,這樣會使得多糖粗制品中蛋白含量較高;酶法在脫除甜玉米芯粗多糖中蛋白質的同時,具有操作條件溫和、利于保持多糖的活性、避免了使用有機試劑帶來的危害等優點,所以酶法脫蛋白是一種脫蛋白效率較高、操作簡單、多糖損失較小的有效脫蛋白的方法[19]。利用木瓜蛋白酶降解聯合Sevag法脫除蛋白質,由于木瓜蛋白酶的降解作用,使得甜玉米芯粗多糖提取液中的大部分游離蛋白質和部分結合蛋白水解,減少了后續有機溶劑除蛋白的次數,從而降低了多糖隨凝膠物沉淀而損失的可能,多糖的保留率提高,同時粗多糖中蛋白含量降低。綜合考慮,選擇Sevag-酶法對甜玉米芯多糖脫蛋白。

圖2 多糖脫蛋白方法選擇結果Fig.2 Results of the methods of deproteinization of polysaccharides

2.3 甜玉米芯多糖脫色方法結果分析

由圖3可知,H2O2法脫色率為60.21%,多糖保留率為77.69%;活性炭脫色率為16.67%,多糖保留率為92.66%;D301R陰離子交換樹脂脫色效果最好,脫色率達到46.17%,且多糖保留率最高為99.23%;D152陽離子交換樹脂脫色效果最差,脫色率為4.92%,多糖保留率為95.79%;AB-8大孔吸附樹脂脫色率為40.16%,多糖保留率為94.70%;201×7陰離子交換樹脂脫色率較低為9.56%,多糖保留率最低為69.58%。H2O2是強氧化劑,很容易造成多糖結構的破壞,從而影響其活性[20-23];活性炭法脫色時間較長,多糖保留率低;大孔樹脂具有表面積大,物理化學穩定性高、選擇性好、處理能力強、解吸條件溫和、吸附速度快、使用周期長、對色素的吸附能力強、可再生、成本低等性質,其操作方法簡便。因此選擇D301R陰離子交換樹脂對甜玉米芯多糖脫色。

圖3 多糖脫色方法選擇結果Fig.3 Results of the methods of decolorization of polysaccharides

2.4 甜玉米芯多糖紫外光譜分析

如圖4所示,紫外光譜結果顯示260、280 nm處均無明顯吸收峰,表明SCP中不含核酸、蛋白質等雜質成分。

圖4 SCP的紫外吸收光譜圖Fig.4 Ultraviolet absorption spectrumof SCP

2.5 甜玉米芯多糖分級結果分析

采用熱水浸提甜玉米芯多糖,脫蛋白脫色,濃縮后進行分步醇沉,結果見圖5。

圖5 不同濃度乙醇分級結果Fig.5 Results of different concentration of ethanol

由圖5可知,隨著乙醇濃度的升高,醇沉出的多糖含量呈現平穩后遞減而后上升又驟減的趨勢。乙醇能夠減少多糖與水的作用,使多糖脫水而相互聚集沉淀。一定濃度的乙醇對應一定分子量的多糖,待分離多糖的相對分子質量越小,沉淀多糖的乙醇濃度越高,不同濃度的乙醇可以使多糖的不用組分先后沉淀,起到分步沉淀的效果。從10%～30%趨于平穩,故選擇30%乙醇濃度作為一個醇沉點。40%到50%濃度大幅度上升,選擇50%乙醇濃度作為醇沉點。80%醇沉點則為60%～90%的最高點,故選擇分步醇沉后10%～30%、40%～60%和70%～90%三個階段得率最高的三個組分(SCP-30、SCP-50、SCP-80)進行后續實驗研究。

2.6 紅外光譜分析

從圖6中可以看出,三種級分多糖的紅外吸收光譜圖相似,在3400～3500 cm-1處,均出現一強而寬的吸收峰,是多糖上的O-H形成分子間、內氫鍵;吸收譜帶在2349.21 cm-1均出現一窄而尖的吸收峰,為飽和C-H伸縮振動的信號;在1636 cm-1處出現一吸收峰是質子化羧酸中羰基 C=O 的伸縮振動造成的;吸收譜帶在1385 cm-1處,是C-H引起的變角振動。三種多糖的吸收譜帶在890 cm-1附近出現的小峰是次甲基的橫向振動引起的,說明三種糖存在β-糖苷鍵。

圖6 三種級分甜玉米芯多糖紅外光譜圖Fig.6 Infrared spectrum of three fractionations of SCP

2.7 體內抗凝血活性研究

出血時間和凝血時間是檢測具有抗凝活性的前提條件,通常選為初篩指標。

表2 體外抗凝血活性檢測結果表Table 2 Results of anticoagulant activity in ±s,t(s))

由表1可知,與肝素組比較，甜玉米芯多糖及不同級份多糖對小鼠CT和BT均有延長。甜玉米芯粗多糖對CT和BT影響不顯著(與對照組比較)。SCP-30對CT影響顯著,其它級份甜玉米芯多糖對CT和BT影響極顯著,表明甜玉米芯多糖對小鼠的凝血起到抑制作用。

Table 1 Results of anticoagulant

組別劑量(mg/kg)CTBT對照組10053.8±1.0294.35±0.84肝素組1009.19±0.15A8.45±0.32ASCP10053.61±0.77B95.74±0.53BSCP-3010056.96±1.06aB112.04±1.02ABSCP-5010072.28±0.81AB120.54±2.09ABSCP-8010095.75±1.05AB131.46±2.69AB

注:a,p<0.05,A,p<0.01 與對照組比較;b,p<0.05,B,p<0.01 與肝素組比較，表2同。

2.8 體外抗凝血活性研究結果分析

APTT、TT和PT是分別反映內源性、外源性和共同凝血途徑的指標。由表2可知,甜玉米芯多糖及各級分多糖對APTT和TT影響均顯著,但對PT無顯著影響(與對照組比較)。這說明甜玉米芯多糖及各級分多糖是通過內源性凝血途徑和共同凝血途徑完成的抗凝血作用。

3 結論

采用甜玉米芯為原料,通過水提法提取甜玉米芯多糖,得率為16.67%。多糖提取據報道還有微波輔助法、酶法、超聲波輔助法等,但容易使大分子多糖降解成小分子物質,改變原有物質的性質及分子量,采用傳統的水提法提取多糖,不需要特殊設備,生產工藝成本低,安全。適合工業化大生產,是一種可取的提取方法。但是由于水的極性較大,容易把蛋白質、苷類等水溶性的成分浸提出來,因此必須對粗提取進行純化。研究表明,Sevag-酶法脫蛋白最好,蛋白脫除率為84.94%,多糖保留率為70.74%。D301R陰離子大孔樹脂脫色效果最佳,脫色率為46.17%,多糖保留率為99.23%。采用分步醇沉選取三個階段得率較高的組分(分別為SCP-30,SCP-50和SCP-80)進行體內外抗凝血實驗。表明分步醇沉后對CT和BT均有顯著影響(p<0.05),原塘對其影響不顯著(p>0.05)。說明甜玉米芯經純化醇沉后具有一定的抗凝血作用。APTT、PT和TT分別反映內源性、外源性和共同凝血途徑的指標[8]。實驗表明各組分均可以延長APTT和TT時間(p>0.05),但對PT影響不顯著(p<0.05),其中SCP-80抗凝血效果較好。初步推測甜玉米芯多糖是通過內源性和共同凝血途徑達到抗凝血作用。通過紅外分析表明,三種級份多糖均存在β-糖苷鍵。甜玉米芯部分用作糠醛、木糖醇,少量用于清儲飼料,很大一部分作為農業廢棄物被燃燒,造成很大的浪費及污染。研究其甜玉米芯中多糖的提取并對其生物活性進行探討。為從中開發出針對性強的高效低毒、安全實用的藥物、保健品、血漿代用品等,是開發利用甜玉米芯資源的最終目標,無疑具有重大的社會經濟效益和廣闊的市場應用前景。

[1]王有國.血粘導致腦梗阻[J].中國心血管病研究雜志,2001(2):19-20.

[2]Ekanayake P M,Nikapitiya C,Zoysa M D,et al.Novel anticoagulant compound from fermented red alga Pachy-meniopsis elliptica[J].European Food Research and Technology,2008,227:897-903.

[3]周永國,楊越冬,王樹元,等. 天然活性多糖在生物醫藥領域中的研究進展[J].高分子通報,2006(9):16-23.

[4]徐淑芬.淺談甜玉米芯的綜合利用[J].科技情報開發與經濟,2011,21(17):174-175.

[5]王關斌,趙光輝,賀東海,等. 玉米芯資源的綜合利用[J]. 林業化工通訊,2005,39(5):44-46.

[6]石永峰,戴紅霞.玉米芯的綜合利用[J].陜西糧油科技，1995,20(1):53-55.

[7]柳巖.玉米芯綜合資源利用的基礎研究[D].長春:吉林大學,2009.

[8]趙銳,郭彩霞,張鳴,等.玉米芯多糖及其硫酸酯抗凝血活性及其機制[J].吉林大學學報(醫學版),2012,38(1):62-66.

[9]李宏燕.大棗多糖的提取分離研究[D].西安:西北大學,2004.

[10]高思思,高航,張文靜，等.微波輔助提取花生粕多糖的五種脫蛋白方法研究[J].糧食與油脂,2015,28(11):29-32.

[11]何曉梅,張穎,許星云,等.低檔綠茶多糖的酶法輔助提取及抗氧化活性研究[J].食品工業科技,2015,36(10):153-157.

[12]崔鏨,韓冠英,馬寅達，等.蘿藦果殼多糖脫蛋白方法研究[J]. 中國現代應用藥學,2013,30(8):856-859.

[13]玄光善,李青,王艷波.樺褐孔菌多糖脫色方法及其成分分析[J].食品科學,2014,35(10):207-211.

[14]魯曉麗,劉繼婷,張自萍.大孔吸附樹脂脫除枸杞多糖色素技術研究[J].食品工業科技,2014,35(18):293-297.[15]李厚兵,任愛農,鄒義芳.大孔吸附樹脂純化野菊花多糖工藝[J].中國實驗方劑學雜志,2012,18(2):49-53.

[16]王賢波,成浩,趙蕓,等.茶葉中EGCG對小鼠抗凝血作用實驗研究[J].茶葉科學,2011,31(6):532-536.

[17]余曉斌,尤蓉.云芝菌絲體多糖的分離純化研究[J].天然產物研究與開發,2003:1-15.

[18]秦微微,金婷,宋學東,等.米糠多糖的脫蛋白工藝研究[J].中國食品添加劑,2014(1):183-187.

[19]任曉蕾,霍金海,董文婷,等.北青龍衣總多糖脫蛋白工藝比較[J].中國實驗方劑學雜志,2015,21(10):16-18.

[20]李進偉,丁霄霖.金絲小棗多糖的提取及脫色研究[J].食品科學,2006,27(4):150-154.

[21]付學鵬,楊曉杰.植物多糖脫色技術的研究[J].食品研究與開發,2007,28(11):166-169.

[22]朱越雄,孫海一,曹廣力.野生糙皮側耳子實體多糖的脫色素效果比較[J].光譜實驗室,2005,22(5):1070-1073.

[23]袁紅波,張勁松,賈薇,等.利用大孔樹脂對低分子量靈芝多糖脫色的研究[J]. 食品工業科技,2009,30(3):204-206.

Extraction and anticoagulant activities of polysaccharides from sweet corncob

MA Yong-qiang,WANG Xin*,GAO Shuang,ZHOU Ke-chi

(Key Laboratory of Food Science and Engineering,School of Food Engineering,Harbin University of Commerce,Harbin 150076,China)

Themethodsofextraction,purificationandanticoagulantactivitiesofpolysaccharideswereresearchedfromsweetcorncob.Thepolysaccharideswereextractedwiththemethodofwater,theremovingproteinofpolysaccharideswiththemethodsoftrichloroaceticacid,enzymeandSevag-enzymerespectively.Thedecolorationofpolysaccharidesbyhydrogenperoxideandresin,anticoagulantactivitiesofpolysaccharideswereresearchedaftergradingusealcohol.Theresultsshowedthattheoptimumyieldofpolysaccharideswasupto16.7%withthemethodofwater.Thedeproteinizationeffectofsevag-enzymewasbest,theremovalrateofproteinandtherecoveryrateofpolysaccharidesofsweetcorncobswas84.94%and70.74%,respectively.ThedecolorizationeffectofD301Rresinwasbest,thedecolorizationrateandtherecoveryrateofpolysaccharidesofsweetcorncobswas46.17%and99.23%,respectively.Anticoagulantactivitiesin vivoandvitroshowedthatpolysaccharidesanddifferentfractionsofsweetcorncobshadasignificantinfluenceonbleedingtimeandbloodcoagulationtime(p<0.05),allthecomponentscanprolongAPTTandTT(p<0.05),buthadnosignificanteffectonPT(p>0.05),theanticoagulantactivitiesofSCP-80wasbetter.

sweetcorncob;polysaccharides;extraction;anticoagulant

2016-04-08

馬永強(1963-)，男，碩士，教授，研究方向：食品化學，E-mail：qyma126@163.com。

*通訊作者:王鑫(1984-)，女，在讀博士，工程師，研究方向：食品生物技術，E-mail：wangxinfood@163.com。

哈爾濱商業大學研究生創新項目(YJSCX2015-392HSD)。

TS209

A

1002-0306(2016)21-0114-06

10.13386/j.issn1002-0306.2016.21.014