可見分光光度法測定醬菜中亞硝酸鈉含量

殷紫　 江蘇護理職業學院 淮安 223003

可見分光光度法測定醬菜中亞硝酸鈉含量

殷紫 江蘇護理職業學院 淮安 223003

本次實驗目的是采用可見分光光度法來測定市場醬菜中的亞硝酸鈉含量。采用的方式，在弱酸性條件下亞硝酸鹽與對氨基苯磺酸重氮化反應后，再與鹽酸萘乙二胺偶合形成紫紅色的物質，于540nm處測定吸光度。此方法的優點在于操作簡便、靈敏度高、穩定性好，適用于測量醬菜中亞硝酸鹽的含量。

醬菜；亞硝酸鹽；可見分光光度法

0 前言

人們在日常生活中最常見的一種腌制蔬菜就是醬菜,長期食用會對人體造成一定的危害，越來越多的檢測實驗室開始開展亞硝酸鹽含量的檢測項目，于是選擇準確經濟并且快速又操作簡便的檢測方法就顯得十分重要[1]。

亞硝酸鹽是國際公認的致癌物質，因為它具有防腐劑和增強風味的作用往往被添加到食品中，但是添加過量的量會損害人體。本文采納可見分光光度法來測定市場中醬菜亞硝酸鈉的含量，該方法具有操作簡單、花費少、耗時短、線性關系好等諸多優點。

1 實驗內容

1.1實驗步驟

1.1.1原理

實驗在弱酸性條件下，亞硝酸鹽與對氨基苯磺酸重氮化反應，然后再與鹽酸萘乙二胺偶合形成紫紅色物質，該紫色物質最大吸收波長為540nm，且色澤深淺與亞硝酸鹽含量在一定范圍內呈正比，通過與標準對照確定含量[2]。

1.2實驗藥品與儀器

1.2.1實驗藥品

乙酸鋅溶液，批號（2016012)；亞鐵氰化鉀溶液，批號(2016074)；飽和硼砂溶液，批號（160120）；對氨基苯磺酸溶液，批號（20151124）；鹽酸萘乙二胺溶液(2g/L)，批號（20150922）；亞硝酸鈉標準溶液(250μg/ml)，批號（20160102）；亞硝酸鈉標準使用液（5.0μg/ml），批號（20151222）。

1.2.2實驗儀器

使用該法所需的儀器有：可見分光光度計（上海美普達儀器有限公50006567），精密電子天平（上海美普達儀器有限公司7292838），硅膠干燥器，100ml容量瓶、500ml容量瓶，50ml具塞比色管。

1.3樣品預處理

實驗前，稱取被粉碎均勻的樣品8.0克，置于50ml燒杯中，然后加入硼砂飽和溶液12.5ml，充分攪拌均勻，備用。在500ml的燒杯加入70℃的熱水300ml，溶解上述備用的飽和溶液，再在80℃熱水中水浴15分鐘，然后慢慢放冷到與室溫一樣的溫度，放冷，在攪拌的同時加入5ml的亞鐵氰化鉀溶液，充分搖勻后再加入乙酸鋅溶液5ml，目的是為了使蛋白質沉淀，避免對實驗的影響。靜置半個小時，除去上層脂肪，然后過濾，除去初濾液，再放入500ml的容量瓶中，進行最后的定容。

1.4樣品的測定

吸取40ml的樣品溶液放入50ml的具塞比色管中，加入2ml的對氨基苯磺酸(4g/L)溶液，充分搖勻。放置5分鐘后，再加入lml的鹽酸萘乙二胺(2g/L)溶液，添加純化水至刻度線處，充分搖勻，室溫下靜置15分鐘，然后置于波長540nm處測吸光度。與此同時，做空白試驗。

2 結果與討論

2.1最大吸收波長的選擇

在50ml的容量瓶中加入精密吸取的亞硝酸鈉標準使用液(5.0μg/ml)2ml，然后再加入對氨基苯磺酸(4g/L)溶液2ml，搖勻，靜置5分鐘。5分鐘后再分別加入乙二胺(2g/L)溶液1ml，加水至刻度線，輕輕搖勻，在25℃的環境下放置15分鐘后，用lcm的比色皿在波長400到600nm處，用空白試劑作為參比，測定其吸光度，測量結果為0.22，0.32，0.47，0.61，0.5，結果顯示亞硝酸鹽的最大吸收波長是540nm。

2.2最佳顯色劑用量的確定

精密量取5μg/ml的亞硝酸鈉標準溶液2ml，分別加入6只規格均為50ml的具塞比色管中。然后6只具塞比色管中再分別加入配制好了的對氨基苯磺酸溶液（4g/L)2ml，搖勻，靜置5分鐘，靜置后逐個加入萘乙二胺溶(2g/L)0.6ml、0.8ml、1.0ml、1.2ml、1.4ml、1.6ml，加水至刻度，輕輕搖勻，在25℃的環境下靜靜的放置15分鐘，在波長540nm處進行掃描，用空白試劑作為參比，測量結果為0.27，0.285，0.32，0.31，0.285，0.27。據此得出最佳顯色劑用量為1ml。

2.3最佳反應溫度對吸光度的確定

精密量取5ug/ml的亞硝酸鈉標準溶液2ml，分別加入6只規格均為50ml的具塞比色管中，然后6只具塞比色管中分別加入配制好了的對氨基苯磺酸溶液（4g/L)2ml，搖勻，靜置5分鐘，靜置后再加入鹽酸萘乙二胺溶液(2g/L)1ml，加水到刻度線，搖勻，靜置時間為15分鐘，分別在環境溫度為10℃、15℃、20℃、25℃、30℃、35℃下，在波長為540nm處進行測定，并且以空白試劑為參比，測量的結果為0.21，0.265，0.315，0.33，0.32，0.3，0.29。得出其最佳反應溫度為25℃。

2.4最佳反應時間的確定

精密量取5μg/ml的亞硝酸鈉標準溶液2ml，分別加入6只規格為50ml的具塞比色管中。往50ml的具塞比色管中分別加入對氨基苯磺酸溶液（4g/L)2ml，輕輕搖勻，靜置時間為3到5分鐘，靜置后再加入鹽酸萘乙二胺溶液(2g/L)1ml，加水到刻度線，輕輕搖勻，在溫度環境為25℃的情況下分別靜置5min、10min、15min、20min、25min、30min，在540nm處測定吸光度，以空白試劑為參比，測量結果為0.29，0.31，0.325，0.31，0.3，0.26。結果反映在15分鐘時吸光度最大。

2.5標準曲線的繪制

取9只相同規格為50mL具塞比色管，分別滴加亞硝酸鈉標準使用液(5.0μg/ml)0.0ml、0.2ml、0.4ml、0.6ml、0.8ml、1.0ml、1.5ml、2.0ml、2.5ml。然后分別加入對氨基苯磺酸溶液（4g/L） 2ml，輕搖，靜置5分鐘，靜置過后再加入鹽酸萘乙二胺溶液（2g/L）1ml，加水到刻度線，搖勻，在25℃的環境下靜置15分鐘，在波長540nm處測定其吸光度，用空白試劑做對照實驗，其測量的結果分別0.1,0.2,0.3,0.4,0.41,0.55,0.8,1。用測量結果制作標準曲線，如圖1所示。

圖1　亞硝酸鈉標準曲線

2.6樣品分析與結果

通過以上實驗得出市場中售醬菜中亞硝酸鈉含量的測定結果，見表1。

表1　醬菜中亞硝酸鈉的含量

3 結論

經過對實驗結果的研究，我們可以知道，使用可見分光光度法來測定醬菜中亞硝酸鹽中的含量，這種方法的優點有測量結果準確、操作過程簡單、省時省力、經濟效益高、線性關系好、測量范圍廣。但是此方法有要求，只能在弱酸性的條件下進行，鹽酸萘乙二胺是顯色劑。

醬菜中的亞硝酸鹽含量不得超過20mg/kg，這在我國的食品分析標準法中是有明確規定的。我們通過一系列的測量，發現市面中醬菜的亞硝酸鹽含量是不高于20mg/kg。因此亞硝酸鹽的含量指標是合格，是不會對人體造成傷害的。

[1]李鵬飛，王福磊，周海燕，等.格里斯比色法用于亞硝酸鹽檢測的可靠性論證[J]，化學分析計量，2008，17（5）:55-57.

[2]柏林洋，宋金海，馮剛，亞硝酸鹽檢測方法的研究進展[J]，廣州化工，2011年13期.

殷紫，女，1987年10月生，籍貫常州，中藥藥理，碩士研究生，講師。