板藍根制劑制備過程中成分變化及其藥效相關性研究

曹　奎（廣西玉林北流市城南街道社區衛生服務中心北流537400）

·醫藥論壇·

板藍根制劑制備過程中成分變化及其藥效相關性研究

曹奎（廣西玉林北流市城南街道社區衛生服務中心北流537400）

目的：探討研究板藍根制劑制備過程中成分變化及其藥效相關性。方法：對板藍根制劑的制備過程進行模擬，測定制備過程中各階段的成分質量、中間體溶液抗氧化活性分析成分質量分數-藥效活性數據的相關性。結果：在板藍根制劑制備過程中，藥物制劑的化學成分質量分數與抗氧化活性呈降低趨勢，尤其是在熱處理環節的損失較大，相關性分析顯示鳥苷、腺苷及靛玉紅這三者的質量分數與羥基自由基清除率呈正相關。結論：在板藍根制劑制備過程中，操作水平顯著影響其指標組分質量分數和藥效，尤其是濃縮干燥環節的影響最大，鳥苷、腺苷及靛玉紅是使藥物發揮抗氧化活性的重要成分。

板藍根 板藍根制劑 制備過程 成分變化 藥效 相關性

板藍根制劑的制備過程包括提取、濃縮、醇沉、干燥及制粒等多個環節，每個環節的操作都可能會影響最終藥效的發揮。為了研究板藍根制劑制備過程中成分變化及其藥效相關性，筆者對板藍根制劑的制備過程進行了模擬，并進行了實驗測定。

1　儀器與材料

本次實驗采用了安捷倫科技有限公司生產的Agilent 1260型高效液相色譜儀、德國賽多利斯集團生產的電子分析天平、江蘇康健醫療用品有限公司生產的XH-B型漩渦混合器、鄄城華魯電熱儀器有限公司生產的電熱套、上海愛朗儀器有限公司生產的QSB-2000油浴鍋、昆山市超聲儀器有限公司生產的KQ5200型超聲波清洗器、鄭州長城科工貿有限公司生產的SHB-III循環水式多用真空泵。對照品采用了鳥苷、尿苷、腺苷、告依春及靛玉紅各20mg，質量分數均≥98％；以及糊精、過氧化氫、水楊酸、七水合硫酸亞鐵、色譜乙腈、雙蒸餾水等。其他試劑均為分析純。

2　方法與結果

2.1成分質量分數測定

2.1.1樣品的制備：稱取板藍根25g，加入250mL水煎煮回流提取兩次，第一次2h、第二次1h，將兩次濾液合并，然后將所得提取液減壓濃縮至一定體積，加入乙醇直至含醇量60％，靜置一段時間后取上清液，將乙醇回收并濃縮至25mL，取10mL濃縮液繼續濃縮至恒定質量，得到干膏樣品，以20mL甲醇進行溶解，再取10mL濃縮至流浸膏狀態，加入糊精制成顆粒，得到提取液、濃縮液、干膏及顆粒4項樣品。各個環節所取的溶液均以微孔濾膜濾過，從而得到樣品溶液。

2.1.2對照品樣品的制備：稱取11.7mg尿苷、9.7mg鳥苷、13.5mg腺苷、12.0mg告依春、12.4mg靛玉紅，置于100mL瓶中，以雙蒸水超聲溶解核苷類成分，以甲醇溶解告依春和靛玉紅，定容搖勻，配制成0.117mg/mL尿苷、0.097mg/mL鳥苷、0.135mg/mL腺苷、0.120mg/mL告依春、0.124mg/mL靛玉紅，于4℃下保存備用。2.1.3色譜條件：色譜柱為Gemini C18110A柱（250mm×4.6mm，5μm），流動相為乙腈-水，體積流量為1mL/min，柱溫為30℃，檢測波長為245nm，進樣量為20μL。

2.1.4線性關系考察：取適量對照品樣品置于10mL瓶中進行溶解稀釋，取其中1mL以微孔濾膜濾過，按照色譜條件分別進樣，記錄質量濃度（X）、峰面積積分值（Y），分析后得到各成分的回歸方程、相關系數及線性范圍，結果示尿苷在2.34～29.25μg/mL、鳥苷在1.91～24.25μg/mL、腺苷在2.7～33.75μg/mL、告依春在2.4～30.0μg/mL、靛玉紅在12.4～37.2μg/mL，線性關系良好。

2.1.5精密度試驗：精密吸取對照品樣品20μL，按照色譜條件重復進樣6次，結果示尿苷的峰面積RSD為1.56％、鳥苷為2.47％、腺苷為2.67％、告依春為1.24％、靛玉紅為2.63％，均＜3％，證明精密度良好。

2.1.6穩定性試驗：精密吸取對照品樣品20μL，按照色譜條件進樣，每隔4h測定一次，共監測24h，結果示尿苷的峰面積RSD為1.30％、鳥苷為1.67％、腺苷為2.86％、告依春為0.44％、靛玉紅為1.80％，均＜3％，證明穩定性良好。

2.1.7重復性試驗：精密吸取板藍根6份，制備樣品，按照色譜條件分別進樣，結果示尿苷的質量分數RSD為2.80％、鳥苷為0.80％、腺苷為2.63％、告依春為0.26％、靛玉紅為2.57％，均＜3％，證明重復性良好。

2.1.8回收率試驗：取已測定的板藍根樣品9份，分別根據成分質量分數的100％加入適量對照品，按照色譜條件分別進樣，結果示尿苷的回收率為98.94％、鳥苷為98.07％、腺苷為97.95％、告依春為98.25％、靛玉紅為92.42％，尿苷的RSD為1.12％、鳥苷為2.29％、腺苷為2.54％、告依春為1.55％、靛玉紅為2.68％，證明回收率良好。

2.1.9各成分的質量分數測定：取各樣品20μL，注入高效液相色譜儀，在色譜條件下測定各成分的質量分數，結果示各成分的分離度良好。在制備過程中，各成分呈下降趨勢，每一環節的操作都可能會影響到指標成分質量分數。其中尿苷的損失率為39.5％、鳥苷為57.8％、腺苷為47.7％、告依春為67.3％、靛玉紅為56.3％。濃縮環節損失最大，其次為干燥、制粒及醇沉。

2.2羥基自由基清除率測定：在96孔板中加入50μL 2.5mmol/L七水合硫酸亞鐵和50μL 2.5mmol/L水楊酸、50μL不同制備階段的提取液、5％過氧化氫，在37℃的水浴鍋中加熱0.5h，于536nm波長下測定吸光度（A0）；再以雙蒸水代替樣品，同樣測定吸光度（A1）。同時加入七水合硫酸亞鐵、水楊酸及不同制備階段的提取液各50μL，加入50μL蒸餾水，測定吸光度（A2）。結果示在不同制備階段的羥基自由基清除率呈下降趨勢，在濃縮、醇沉及干燥環節抗氧化活性顯著下降，羥基自由基清除率下降分別為31.47％、7.61％、2.79％。

2.3成分質量分數-藥效活性數據的相關性：利用偏最小二乘法相關性分析譜效關系方程為：Y=-2.09407X1+2.11084X2+ 0.0853001X3-2.58097X4+3.52879X5，其中X代表特征峰峰面積，Y代表羥基自由基清除率，X1代表尿苷、X2代表鳥苷、X3代表腺苷、X4代表告伊春、X5代表靛玉紅。可見鳥苷、腺苷及靛玉紅這三者的質量分數與羥基自由基清除率呈正相關。

3　討論

板藍根是菘藍的干燥根，它是一種中藥材，具有清熱解毒、涼血利咽、解熱鎮痛、活血化瘀之效。近年來，藥理學研究表明，板藍根的抗炎及免疫調節機制主要與其中的生物堿成分和核苷類成分有關，這些物質主要發揮著消炎抑菌、調節免疫、抗腫瘤以及干擾病毒核酸合成的作用，具有很強的藥理活性。由于這些成分在板藍根中占有較高比例，可以作為衡量藥物質量的指標性成分[1]。

根據本文結果顯示：在板藍根制劑制備過程中，藥物制劑的化學成分質量分數與抗氧化活性呈降低趨勢，尤其是在熱處理環節的損失較大，相關性分析顯示鳥苷、腺苷及靛玉紅這三者的質量分數與羥基自由基清除率呈正相關。可以得出結論：在板藍根制劑制備過程中，操作水平顯著影響著其指標組分質量分數和藥效，尤其是濃縮干燥環節的影響最大，鳥苷、腺苷及靛玉紅是使藥物發揮抗氧化活性的重要成分。

[1]林麗君，聶黎行，戴忠，等.板藍根的研究概況[J].中國藥業，2015，21∶1-4.

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1672-8351（2016）11-0119-02