PH值和鹽度對噬菌體的裂解活性的影響

于鴿

摘要：本文從自然環境中分離，篩選了一株致病溶藻弧菌和它的噬菌體。測定了不同pH值和鹽度對噬菌體的裂解活性的影響，實驗結果表明：噬菌體的最適pH為8.0，太酸或者太堿的環境都不適合噬菌體的生存；在鹽度為25%。的情況下，對溶藻弧菌的裂解能力最強，這可能是因為這株噬菌體是在海水環境下分離出來的有關，所以對于高鹽度的耐受性比較好。

關鍵詞：溶藻弧菌；噬菌體；pH；鹽度

近年來，隨著科學技術和研究方法的不斷發展，人們對噬菌體在海洋生態環境中作用的研究越來越深入，并取得了一系列可喜的進展[1，2，3]。分離和研究海洋環境中的噬菌體，有助于了解噬菌體在海洋環境中的生態學和遺傳學作用，同時可為監控海洋環境中海洋生物病菌快速檢定及防治方法建立提供可靠理論依據。

噬菌體有其他病毒的一些共同特性，如個體微小、可通過除菌濾器，沒有細胞結構、只有一種核酸等外，每種噬菌體又有其獨特的一些特性，如宿主特異性、核酸性質、生長和裂菌特性等。我們研究pH值和鹽度對噬菌體的裂解活性的影響，這些研究數據將為進一步將噬菌體裂解技術用于生產實踐中溶藻弧菌的滅活研究奠定了基礎。

一、材料

1.菌種

溶藻弧菌（Vibrio alginolyticus）：由蝦塘排污渠水體中分離獲得。

2.噬菌體

溶藻弧菌噬菌體。濃度為1010pfu/mL。本文分離于南三島蝦塘排污渠水體中。

3.培養基及藥品、試劑

下層固體瓊脂；上層半固體瓊脂；蛋白胨水等。

4.主要實驗儀器

恒溫培養箱，鹽度計，震蕩器，高速離心機，超凈工作臺，手提式高壓滅菌鍋，數顯恒溫水浴鍋，ORION710型精密pH計等。

二、方法

1.不同pH值下噬菌體的裂解活性

參照文獻[4，6，5]的方法，將pH值分別為3，4，5，6，7，8，9，10，11，12的蛋白胨水溶液4.5mL加入口徑一致的試管中，放在25℃，當溫度平衡后加入0.5mL效價為104～105pfu/mL的噬菌體液，放在25℃計時處理一小時后，用pH7.0的蛋白胨水稀釋，取0.1mL用雙平板法，做噬菌體記數，同時做三個平板，以做對照。培養12-18小時后觀察記數噬菌斑。

2.鹽度對裂解率的影響

凡納濱對蝦可在1‰—36‰的鹽度范圍內存活、生長。因此我們配制鹽度分別為0、5、10、15、20、25、30、35‰的蛋白胨上層和下層培養基，然后取103pfu/mL的噬菌體液做雙層平板，然后放入培養箱中培養12～18小時，觀察出斑情況。

三、結果

1.不同pH值下噬菌體的裂解活性

此實驗結果表明該噬菌體感染宿主的最適pH為8.0，pH小于4.0或大于11.0則很少吸附。說明太酸或者太堿都不適合噬菌體的生存。

2.鹽度對裂解率的影響

由實驗結果看出：鹽度對溶藻弧菌噬菌體的裂解率有明顯的影響，在鹽度為25‰的情況下裂解率最高。噬菌體在鹽度為35‰的情況下裂解率依然很高，這可能是因為這株噬菌體是在海水環境下分離出來的有關，所以對于高鹽度的耐受性比較好，而對于低鹽度的耐受性比較差。

四、討論

本實驗測得溶藻弧菌噬菌體對pH值的適應范圍較寬。我們知道噬菌體侵染的第一步是吸附，即噬菌體附著在宿主表面.吸附分為兩個階段，第一階段是非特異的靜電吸附，第二階段是受體與配體的特異性結合階段，酸堿度對噬菌體的存活及吸附效率產生影響的原因在于pH的變化導致細菌與噬菌體表面上吸附位點或受體的電荷發生變化，從而影響了二者之間的靜電作用效果。靜電吸附在噬菌體吸附的第一階段（即可逆的非特異性吸附階段）起著至關重要的作用，因此pH的變化必然會影響噬菌體的吸附效率，進而影響了它的侵染活性。在遠離最適pH的條件下，噬菌體的吸附效率愈來愈低。由于酸堿對噬菌體的滅活作用是瞬間的、不可逆的，因此被酸堿處理過的噬菌體，其吸附能力大大降低或消失了，結果使其感染活性也就大大降低。不同噬菌體吸附不同寄主時，它的最適的吸附pH是不同的。