ADAM17在胃癌中的表達及意義

陳橋　蔣建龍★　孫金兵　顧芯燁　盧曠逸

ADAM17在胃癌中的表達及意義

陳橋蔣建龍★孫金兵顧芯燁盧曠逸

目的 探討去整合素金屬蛋白酶17（ADAM17）在胃癌中的表達及意義。方法 采用免疫組織化學方法檢測胃癌組織中ADAM17的表達，并分析ADAM17表達與胃癌臨床病理特征之間的關系，同時觀察ADAM17表達與HER-2、VEGF表達的關系。結果 ADAM17在胃癌組織中表達陽性率為15.1%，兩組在年齡、性別、腫瘤位置、臨床分期、分化程度的差異無統計學意義（P＞0.05），浸潤深度、脈管侵犯、淋巴結轉移的差異有統計學意義（P＜0.05）。ADAM與VEGF表達差異具有統計學意義（P＜0.05），而ADAM與Her-2的表達差異不具有統計學意義（P＞0.05）。結論 ADAM17在胃癌中的表達與局部浸潤、淋巴結轉移、脈管侵犯有關，是預后不良的有效指標。

ADAM17 胃癌 淋巴結轉移 脈管侵犯 局部浸潤

胃癌的發生與轉移與許多基因和蛋白質的異常表達密切相關，整合素金屬蛋白酶17（a disintegrin andmetalloproteinase 17，ADAM17）是一種具有蛋白剪切酶樣作用的基因［1］。為明確ADAM17表達與臨床病理的相關性，作者采用免疫組化法檢測ADAM17在胃癌中的表達情況，并探討ADAM17在胃癌中表達的意義。

1　材料與方法

1.1標本收集 選取自2014年1月至12月期間本院收治并進行胃癌根治術的患者共53例。術前均未進行輔助化療與輔助放療。本項目通過本院倫理委員會批準并征得患者或其委托人同意。根據世界衛生組織制定的分化標準，11例為高分化，42例為中-低分化。按照TNM經典分期法進行臨床病理分期。所有標本用福爾馬林固定，石蠟包埋，蘇木精和伊紅染色后進行病理分析確定診斷。

1.2主要試劑 兔抗人ADAM17多克隆抗體購自美國adcam公司；兔抗人HER-2單克隆抗體購自上海紀寧實業有限公司；兔抗人VEGF單克隆抗體購自江蘇普羅賽生物技術有限公司。

1.3免疫組化分析 所有樣本進行免疫組化檢測ADAM17、HER-2、VEGF。4μm厚組織薄片用酒精脫石蠟與脫水，3%過氧化氫在室溫孵育10min消除內源性過氧化酶活性，5%血清封閉后，分別滴加兔抗人ADAM17、HER-2和VEGF I抗，稀釋1：100，37℃孵育1h，PBS沖洗后滴加二抗，繼續孵育30min，PBS沖洗后滴加鏈酶親和素-生物素-過氧化物酶，孵育30min后DAB顯色，蘇木精復染，脫水透明，中性樹膠封片。陰性對照以PBS代替一抗。未加一抗的為陰性對照，正常胎盤組織作為陽性對照，蘇木精染色后，由兩位高年資病理醫師獨立報告，＞10%染色為陽性。

1.4數據分析 ADAM17、HER-2、VEGF的免疫組化表達結果及其與臨床病理的關系用Chi-square test表示；n＞40并且所有理論數＞1并且存在≥1個理論數＜5，則用校正Chi-square test檢驗；n＞40并且存在≥1個理論數=1，則用Fisher精確概率計數法。

2　結果

2.1ADAM17、HER-2、VEGF的表達ADAM17在胃癌組織中表達（圖1A），陽性率為15.1%。HER-2在胃癌組織中表達（圖1B），陽性率為9.4%。VEGF在胃癌組織中表達（圖1C），陽性率為23.2%。

2.2ADAM17與HER-2、VEGF在胃癌細胞中的表達關系 見表1。

圖1　ADAM17、HER-2、VEGF在胃癌細胞中的表達

表1　ADAM17與HER-2、VEGF在胃癌細胞中的表達關系（n）

2.3ADAM17表達與臨床病理特征的關系 比較ADAM17表達與不表達的胃癌病例，發現年齡、性別、腫瘤位置、臨床分期、分化程度的差異無統計學意義（P＞0.05），浸潤深度、脈管侵犯、淋巴結轉移的差異有統計學意義（P＜0.05），ADAM表達陽性病例的淋巴結轉移比例87.5%高于陰性病例的40%。見表2。

表2　ADAM17表達與臨床病理特征的關系

3　討論

我國是胃癌高發地區之一，胃癌的診斷手段日趨成熟，但在輔助治療、預后判斷等領域進展緩慢。近年來，眾多學者研究發現了許多與胃癌相關的分子，以期通過分子靶向藥物、抗體或腫瘤疫苗制定個體化治療策略，精確判斷預后的同時提高輔助治療的效果。整合素金屬蛋白酶（ADAM）家族不僅是細胞生長和組織分化中的調控物質，還在肝癌、食管癌、前列腺癌等腫瘤的發展過程中具有重要的作用［2-4］。ADAM17是ADAM家族的一員，作為TNF-α的轉化酶，調節著幾乎每個細胞的增殖與遷移過程。本資料結果顯示ADAM17（+）組浸潤深度、脈管侵犯率、淋巴結轉移率均較高，差異具有統計學意義（P＜0.05）。提示ADAM17可能參與胃癌的進展，具有致癌作用。其機制可能是通過剪切蛋白表面分子來實現的。ADAM17介導多種生長因子、細胞因子、受體和粘附分子的胞外結構域的脫落，譬如鈣粘連蛋白、EGFR、Notch and Eph/ephrin通路蛋白等。其中，鈣粘連蛋白在細胞之間的連接上起重要作用，相關研究發現在結直腸腫瘤中，高表達的ADAM9 可以降解生長因子介導的鈣粘連蛋白，從而使腫瘤細胞之間或與基質間的連接變“松散”，促進細胞“游走”，有利于腫瘤細胞的浸潤和轉移［5］，作為同一家族的ADAM17 在胃癌中可能發揮了類似的作用。

血管內皮生長因子（VEGF）對腫瘤新生血管形成起重要作用［6］。原癌基因HER-2 編碼的蛋白產物是分子量為185kD的受體酪氨酸激酶（RTK）。HER-2的異常表達與上皮組織惡性腫瘤的發生、發展密切相關，在腫瘤細胞的增殖、遷移、浸潤等多個環節中均有促進作用［7］。其陽性提示腫瘤細胞侵襲性強，腫瘤復發快，化療不敏感，患者預后不良。ADAM17是HER-2的上游物質，能夠調控HER-2的擴增［8］。本研究將ADAM分別與VEGF、Her-2的陽性率對比，結果顯示ADAM與與Her-2的陽性率一致，提示兩者在胃癌中的表達可能具有一定相關性（相關系數OR=1.46），有待進一步研究闡明。

浸潤深度、脈管侵犯率、淋巴結轉移陽性率是胃癌預后不良的重要因素，因此，高表達的ADAM17可能是預后標志和抗癌治療的潛在靶點。ADAM17是HER-2的上游物質，ADAM17抑制劑對HER-2陽性患者應能產生協同的抗癌作用，增強靶向藥物的療效，具有廣闊的應用前景。綜上所述，ADAM17在胃癌中的表達與局部浸潤、淋巴結轉移、脈管侵犯有關，是預示胃癌患者預后不良的可能指標。在腫瘤臨床分期的基礎上檢測ADAM17將有助于評估腫瘤侵襲和轉移的潛力，指導臨床決策，提高預后判斷的準確性，增加輔助治療的效果。本研究結果對利用ADAM17作為胃癌治療的新靶點提供了新的動力。

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［3］劉宏斌, 楊其昌, 沈屹, 等. 食管鱗狀細胞癌組織中去整合素-金屬蛋白酶17mRNA表達的臨床病理意義.腫瘤研究與臨床, 2012, 24(7): 444-446, 450.

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［5］Hirao T, Nanba D, Tanaka M, et al. Overexpression of ADAM9 enhances growth factor-mediated recycling of E-cadherin in human colon cancer cell line HT29 cells. Exp Cell Res, 2006, 312(3): 331-339.

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［7］Qiu Z, Sun W, Zhou C, et al. HER2 expression variability between primary gastric cancers and corresponding lymph node metastases. Hepatogastroenterology, 2015, 62(137): 231-233.

［8］Li J, Liu B, Gao X, et al. Overexpression of sigma-1 receptor inhibits ADAM10 and ADAM17 mediated shedding in vitro. Protein and Cell, 2012, 3(2): 153-159.

Objective Discussion disintegrin metalloprotease 17（ADAM17）expression and significance in gastric cancer. Methods Immunohistochemical method to detect the expression of ADAM17 in gastric cancer tissues.Analyze the relationship between ADAM17 expression and clinicopathological features of gastric cancer.While observing ADAM17，HER-2，VEGF expression. Results ADAM17 expression was 15.1% in gastric cancer.No signifi cant difference between the two groups in age，sex，tumor location，clinical stage，degree of differentiationwere found（P＞0.05）. Depth of invasion，vascular invasion，lymph node metastasis were signifi cantly different（P＜0.05）.ADAM and VEGF expression had significant difference（P＜0.05），whereas the expression of ADAM and Her-2 does not have a statistically significant difference（P＞0.05）. Conclusions ADAM17 expression in gastric cancer with infi ltration，lymph node metastasis，vascular invasion related，is an effective indicator of poor prognosis.

ADAM17 Gastric Cancer Lymph node metastasis Vascular invasion Local infi ltration

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