沙格列汀降低自發性高血壓大鼠血壓的效果及作用機制

殷　音

(石河子大學醫學院第一附屬醫院心內科，新疆　石河子　832008)

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沙格列汀降低自發性高血壓大鼠血壓的效果及作用機制

殷音

(石河子大學醫學院第一附屬醫院心內科，新疆石河子832008)

〔摘要〕目的探討沙格列汀降低自發性高血壓大鼠(SHR)血壓的效果及作用機制。方法選擇30只SHR，按隨機數字表法分為干預組和對照組(n=15)，同時選擇15只Wistar-Kyoto(WKY)大鼠作為WKY組。干預組大鼠每日給予劑量為10 mg/kg的沙格列汀灌胃處理，同期給予對照組及WKY組等體積的超純水，均持續8 w。以無創傷血壓測定儀測量三組大鼠處理前后的尾動脈收縮壓(SBP)，測量間期2 w；顯微鏡下觀察主動脈的病理形態學變化；分別采用放射免疫法、酶聯免疫法、硝基還原法檢測血漿中的胰高血糖素樣肽(GLP)-1、內皮素(ET)-1和一氧化氮(NO)水平。結果(1)干預組SBP隨處理時間的延長逐漸降低，而對照組逐漸升高，且干預組處理后的SBP均低于同期對照組，而仍高于同期WKY組(P<0.05)。(2)顯微鏡下觀察顯示，對照組和干預組均表現不同程度的平滑肌細胞增生肥大、內膜增厚，但干預組較對照組有所改善。(3)8 w后干預組大鼠的血漿GLP-1水平均顯著高于WKY組及對照組(P<0.05)；對照組和干預組的ET-1水平較WKY組明顯升高，NO水平明顯降低，而干預組ET-1水平低于對照組，NO水平高于對照組(P<0.05)。結論沙格列汀可降低SHR的動脈血壓，其機制可能與抑制ET-1的釋放、促進NO的合成有關。

〔關鍵詞〕沙格列汀；自發性高血壓；內皮素-1；一氧化氮

高血壓是公認的心腦血管疾病的獨立危險因素。沙格列汀是一種新型的強效降血糖藥物，主要通過抑制二肽基肽酶4(DPP-4)對胰高血糖素樣肽(GLP)-1的降解，延長腸促胰島素在體內的半衰期而發揮作用〔1〕。近年來沙格列汀對心血管的保護作用受到廣泛矚目〔2〕，而關于其是否具有降壓效果仍存在一定爭議。本研究擬探索沙格列汀的降壓效果及機制。

1材料與方法

1.1實驗動物選擇SPF級成年雄性自發性高血壓大鼠(SHR)30只及同周齡的健康雄性Wistar-Kyoto(WKY)大鼠15只(石河子大學動物實驗中心提供)，體質量200～250 g。于動物實驗室以普通飼料適應性飼養3 d，自由飲食。室溫(23.0±2.0)℃，自然光照。

1.2動物分組與處理將30只SHR按隨機數字表法分為干預組和對照組，每組15只。干預組大鼠每天給予沙格列汀灌胃處理10 mg/kg，同期以等體積超純水予對照組及WKY組，均持續8 w。

1.3指標與方法

1.3.1尾動脈收縮壓(SBP)的測量固定大鼠尾部，白熾燈照射尾動脈10～20 min以舒張尾部血管。采用無創傷血壓測定儀(ZH-HX-Z，上海軟隆科技)和MedLab生物信號采集處理系統測量和采集大鼠清醒、安靜狀態下的動脈壓及脈搏曲線，在出現第1個脈搏波時打氣，使尾動脈血流漸進式中斷后放氣，待第1個脈搏波再次出現時記錄此時的血壓值，即為SBP。取3次測量平均值為最終血壓，每隔2 w測量1次。

1.3.2主動脈病理形態學改變8 w后，禁食12 h，自由飲水。腹腔注射10%的水合氯醛麻醉大鼠，仰臥固定，5%碘酊消毒后打開腹腔，暴露主動脈，手術剪分離1 cm的胸主動脈，用PBS緩沖液沖洗干凈。分別經10%甲醛固定、乙醇脫水、透明、浸臘、包埋后，制成厚度約4 μm的連續切片，烤干后行蘇木素-伊紅(HE)染色，顯微鏡下觀察主動脈的病理形態學變化。

1.3.3血漿GLP-1、內皮素(ET)-1和一氧化氮(NO)的測定處死大鼠后心臟穿刺采集3 ml全血，4℃ 4 000 r/min離心20 min，去上清，-80℃凍存。分別采用放射免疫法GLP-1試劑盒(北京東亞免疫技術研究所)和酶聯免疫法ET-1試劑盒(美國R&D公司)及硝基還原法NO測試試劑盒(南京建成生物工程研究所)檢測血漿中的GLP-1、ET-1和NO水平，所有操作均嚴格按照試劑盒要求進行。

1.4統計學方法應用SPSS14.0軟件，計量資料采用單因素方差分析進行三組均數的比較，兩兩均數的比較采用SNK-q檢驗。

2結果

2.1三組大鼠處理前后SBP比較處理前干預組與對照組SBP比較無差異(P>0.05)，而均高于同期WKY組(P<0.05)。WKY組大鼠處理前后比較無差異(P>0.05)，對照組SBP隨處理時間的延長逐漸升高，而干預組逐漸降低(P<0.05)，且干預組均低于同期對照組(P<0.05)。見表1。

2.2三組大鼠主動脈病理形態學改變WKY組主動脈血管內膜完整、光滑，中膜處彈性纖維以同心圓狀整齊排列，平滑肌細胞排列規則，無增生、肥大；對照組主動脈內膜呈輕度增生，部分內膜脫落，中膜處彈性纖維排列紊亂，部分可見斷裂，平滑肌細胞增生肥大，血管壁增厚；干預組主動脈內膜較平滑，中膜處彈性纖維排列較整齊，平滑肌細胞增生肥大及管壁增厚現象有所減輕。

2.3三組大鼠血漿GLP-1、ET-1和NO水平比較干預組大鼠的血漿GLP-1水平均顯著高于WKY組及對照組(P<0.05)，而WKY組與對照組比較無差異(P>0.05)。對照組和干預組的ET-1水平較WKY組明顯升高，NO水平明顯降低，而干預組與對照組相比ET-1水平更低、NO水平更高(P<0.05)。見表2。

表1　三組大鼠處理前后SBP的變化比較

與同期WKY組比較:1)P<0.05；與同期對照組比較:2)P<0.05；與同組處理前比較:3)P<0.05

表2　三組大鼠的血漿GLP-1、ET-1和NO水平比較

與WKY組比較：1)P<0.05；與對照組比較：2)P<0.05

3討論

高血壓是一種以體循環動脈血壓升高為主要特征的全身性慢性疾病，常伴發主動脈、心臟、腦等重要靶器官的損害及其并發癥〔3〕。隨著生活水平的提高，人們的生活方式和飲食習慣發生了巨大變化，同時加上生活壓力的增大和人口老齡化的發展，我國高血壓的發生率俱增〔4〕，對患者生命健康產生嚴重威脅。關于高血壓的產生機制中，內皮功能異常學說得到廣泛認可〔5〕，其認為內皮合成的大量血管活性物質對維持血管床和外周阻力的平衡具有重要作用，而其功能紊亂將引起內皮細胞源性的縮血管因子及舒血管因子失衡，從而導致血管收縮、血壓升高。ET-1和NO是兩種重要的血管活性物質，具有不同的血管調節作用。ET-1作為內皮細胞產生的一種生物活性肽，具有強烈持久的血管收縮效應和促平滑肌細胞的增生的作用。其途徑與ET-1促進平滑肌血管緊張素Ⅱ的釋放和激活絲裂原活化蛋白激酶的活性有關〔6〕。NO具有防止內皮損傷、抑制平滑肌增生及動脈硬化形成等作用；同時還可通過活化平滑肌細胞內的鳥苷酸環化酶，增加Ca2+濃度，使平滑肌松弛，擴張血管、降低血壓〔7〕。

高血壓的治療藥物多樣，為了達到良好的降壓目標或降低不良反應，臨床上往往采用兩種或多種藥物的聯合治療〔8〕。目前關于DPP-4酶抑制劑沙格列汀的降血壓作用引起學者的關注〔9〕。本研究結果顯示，沙格列汀對SHR具有一定的降壓作用，但其降壓效果有限。

從內皮功能調節的角度分析其降壓作用機制。首先，對主動脈的病理形態學觀察可見，干預組的主動脈與對照組相比，其平滑肌細胞增生肥大及管壁增厚現象有所改善。提示沙格列汀對高血壓引起的內皮結構紊亂具有一定的修復作用。其次，本研究發現沙格列汀在動物體內發揮DDP-4抑制作用，可能以ET-1和NO為靶點而發揮降壓作用。本次研究結果與邵宇等〔10〕的研究結果相符。因此本研究認為沙格列汀可通過抑制內皮細胞中ET-1的釋放和促進NO的合成，從而修復損傷的內皮細胞、抑制平滑肌細胞增生等，最終恢復血管的血壓調節功能。

4參考文獻

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2湯智慧，巴建明.DPP-4抑制劑的心血管保護作用〔J〕.藥品評價，2012；9(34)：6-10.

3農彩麗，韋錦斌.高血壓并發癥動物模型研究進展〔J〕.醫學綜述，2013；23(19)：4287-90.

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6Lytsy P，Lind L，Sundstrom J.Endothelial function and risk of hypertension and blood pressure progression：the prospective investigation of the vasculature in Uppsala seniors〔J〕.J Hypertens，2013；31(5)：936-9.

7Ahmed LA，Obaid AA，Zaki HF，etal.Role of oxidative stress，inflammation，nitric oxide and transforming growth factor-beta in the protective effect of diosgenin in monocrotaline-induced pulmonary hypertension in rats〔J〕.Eur J Pharmacol，2014；740(4)：379-87.

8張宜錦.高血壓治療方法的分析〔J〕.中國中醫藥資訊，2012；4(3)：483.

9Solun B，Marcoviciu D，Dicker D.Dipeptidyl peptidase-4 inhibitors and their effects on the cardiovascular system〔J〕.Curr Cardiol Rep，2013；15(8)：1-8.

10邵宇，王孝萍，楊生平，等.沙格列汀對自發性高血壓大鼠血壓的影響〔J〕.寧夏醫學雜志，2015；37(2)：117-9.

〔2015-12-18修回〕

(編輯袁左鳴)

〔中圖分類號〕R54

〔文獻標識碼〕A

〔文章編號〕1005-9202(2016)12-2850-02；

doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2016.12.010

第一作者：殷音(1979-)，女，主治醫師，主要從事心內科臨床研究。