不同液相色譜儀測定辣椒油中維生素E的含量分析※

劉翠紅 陳 科 姚雪清 鐘智軒 劉楚楚

不同液相色譜儀測定辣椒油中維生素E的含量分析※

劉翠紅 陳 科 姚雪清 鐘智軒 劉楚楚

目的 建立不同液相色譜儀測定辣椒油中維生素E的含量測定方法。方法 在相同試驗條件下，采用不同液相色譜儀測定辣椒油中維生素E的含量。以維生素E為標準物質，C18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）為分離柱，甲醇為流動相洗脫，紫外檢測，流速1.0 ml/min。結果 維生素E線性范圍10～80 μg/ml，3臺儀器測得維生素E的相關系數分別為0.9978、0.9990、0.9998，加標回收率和相對標準偏差（RSD）分別為97.8%、1.8%，98.2%、0.92%，99.4%、0.53%。結論 超高效液相色譜法試劑簡單，操作簡便，結果重現性好，準確快速，回收率高，適用于辣椒油中維生素E含量的測定。

紫外檢測器；超高效液相色譜儀；辣椒油；維生素E

辣椒油是一種調料，但其辣度與營養密切相關。辣椒中含有豐富的維生素C、E、β-胡蘿卜素、葉酸、鎂及鉀[1]；辣椒中的辣椒素還具有抗炎及抗氧化作用，有助于降低心臟疾病、某些腫瘤及慢性疾病的發病率[2]。人體試驗研究發現，辣椒能增加人體能量消耗，幫助減肥[3]；經常進食辣椒可以有效延緩動脈粥樣硬化發展及血液中脂蛋白的氧化[4]。大部分人認為，經常進食辣椒可刺激胃部，甚至引起胃潰瘍[5]。但實際上辣椒素可預防和治療胃潰瘍[6]。

維生素E也稱為生育酚[7]，由4種生育酚和8種同系物質組成，屬于脂溶性維生素[8]。維生素E可以維持人體肌肉和生殖系統正常代謝，保持中樞神經和血管系統的完整，還可有效清除自由基[9]。維生素E有促進生育和抗氧化功能，已廣泛應用于化妝品、食品和醫藥行業中，但其結構較復雜，給分析檢測工作帶來了一定困難[10]。維生素E在自然環境中極不穩定，影響因素復雜，其含量測定也是難點[11]。維生素E的主要檢測方法包括滴定法、紫外可見分光光度法、紅外分光光度法、熒光檢測法、電化學分析法、薄層色譜法、超臨界色譜法、高效液相色譜法[12]。前7種檢測方法存在試樣前處理復雜、重復性差、結果準確度低等缺點，而高效液相色譜法，特別是超高效液相色譜法，具有靈敏度高、重復性好、檢測速度快和準確度高等優點。

超高效液相色譜法是采用細粒徑填料（117 μm）和細內徑柱子而獲得柱效高達（100 000～300 000）的液相色譜技術[13]，利用創新技術進行整體設計，從而大幅度改善色譜分離度、樣品通量和靈敏度[14]。

本研究將采用國產和島津高效液相色譜儀、超高效液相色譜儀，對辣椒油中維生素E的含量進行測定，比較高效液相色譜和超高效液相色譜兩種儀器檢測維生素E含量結果，建立一種辣椒油中維生素E快速、準確的檢測方法。

1 材料與儀器

1.1 藥品與試劑 維生素E標準物質，中國藥品生物制品檢定所，批號：100062-200608；辣椒油，四川翠宏食品有限公司，批號：20151206；色譜純甲醇。

1.2 儀器 L-3000高效液相色譜儀；LC-20AT島津高效液相色譜儀；L-6000超高效液相色譜儀；超聲波清洗器。

2 方法與結果

2.1 標準儲備液的制備 精密稱取維生素E標準物質0.1000 g置于10 ml容量瓶中，用甲醇溶解定容至刻度，配成濃度為10 mg/ml的標準儲備溶液。

2.2 系列標準溶液的制備 精密量取標準儲備溶液適量，加甲醇分別稀釋為10、20、40、60、80 μg/ml系列標準溶液。

2.3 樣品溶液的制備 準確稱取樣品約0.2 g，置于10 ml離心管中，加適量甲醇，混合均勻，超聲提取1 min，加甲醇定容，以3.5×103rpm離心1 min，取上清液過0.45 μm濾膜后作為待測溶液。

2.4 色譜條件 色譜柱：C18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流動相：甲醇；流速：1.0 ml/min；柱溫：30 ℃；檢測波長：284 nm；紫外檢測器。

2.5 線性關系考察 吸取系列標準溶液10、20、40、60、80 μg/ml各20 μl注入液相色譜儀中，分別測定，以峰面積（y）對系列標準溶液濃度（x）進行回歸，得回歸方程，維生素E在10～80 μg/ml與峰面積保持良好線性關系，見表1。

2.6 精密度試驗 取40 μg/ml的維生素E標準溶液20 μl，連續進樣5次，記錄保留時間和峰面積，計算其相對標準偏差（RSD），L-3000型高效液相色譜儀測得保留時間和峰面積的RSD為1.3%和1.8%，LC-20AT型高效液相色譜儀測得保留時間和峰面積的RSD為0.50%和1.2%，L-6000型超高效液相色譜儀測得保留時間和峰面積的RSD為0.059%和0.11%，結果見表2。

表1 線性關系考察結果

表2 精密度試驗結果

2.7 回收率試驗 精密稱取已知含量的辣椒油（批號：20151206）樣品約0.2 g，共6份，分別精密加入濃度為1.0 mg/ml維生素E標準溶液0.2、0.5、1.0 ml，按2.3項下制備樣品溶液，取20 μl注入液相色譜儀，記錄峰面積，計算維生素E的回收率及其RSD，L-3000型高效液相色譜儀測得維生素E的平均回收率和RSD為97.8%、1.8%，LC-20AT型高效液相色譜儀測得維生素E的平均回收率和RSD為98.2%、0.92%，L-6000型超高效液相色譜儀測得維生素E的平均回收率和RSD為99.4%、0.53%，結果見表3。

表3 加標回收率試驗結果

3 討論

按中華人民共和國衛生部GB/T 5009.28-2003《食品中維生素A和維生素E的測定》[15]、中華人民共和國衛生部GB 5413.9-2010《嬰幼兒食品和乳品中維生素A、D、E的測定》[16]、中華人民共和國農業部NY/T 1598-2008《食用油中維生素E組分和含量的測定高效液相色譜法》[17]測定方法，只適用于一般的樣品，而辣椒油中含有辣椒和油，存在特殊性，采用國標處理方法不能有效處理。目前，對辣椒油中維生素E進行測定的方法報道較少，檢測沒有參考依據。超高效液相色譜法試劑簡單，操作簡便，結果重現性好，準確快速，回收率高，適用于辣椒油中維生素E含量的測定。

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[9] 朱姜,張鵬.高效液相色譜-串聯質譜法測定奶粉中維生素E的維生素A、維生素D、維生素E[J].中國衛生檢驗雜志,2015,25(11)∶1733-1739.

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[15] 中華人民共和國衛生部.GB/T5009.28-2003《食品中維生素A和維生素E的測定》[S].北京,2003.

[16] 中華人民共和國衛生部.GB5413.9-2010《嬰幼兒食品和乳品中維生素A、D、E的測定》[S].北京,2010.

[17] 中華人民共和國農業部.NY/T1598-2008《食用油中維生素E組分和含量的測定 高效液相色譜法》[S].北京,2008.

Comparison of the content of vitamin E in pepper oil by different liquid chromatograph

Liu Cuihong Chen Ke Yao Xueqing Zhong Zhixuan Liu Chuchu

Objective Establish different liquid chromatograph the content determination method for determination of vitamin E in chili oil.Methods Under the same experimental conditions,the analytical method of the content of vitamin E in chili oil was determined by different instruments.Vitamin E as a standard substance,C18column (250 mm× 4.6 mm,5 μm)as Separation column,Methanol as mobile phase elution,UV detection,Flow rate of 1.0 ml/min.Results the linear range of vitamin E was between 10-80 μg/ml,The correlation coefficients of vitamin E were measured by three instruments were 0.9978,0.9990,0.9998,the recovery rate and relative standard deviation were 97.8%,1.8%, 98.2%,0.92%,99.4%,0.53%.Conclusion Ultra performance liquid chromatography reagent is simple and easy to operate.The results are reproducible,accurate,rapid and high recovery rate.It is suitable for the determination of vitamin E in chili oil.

UV;UHPLC;Chili oil;Vitamin E

TS255.7

A 【DOI】10.12010/j.issn.1673-5846.2016.11.005

廣東省?；瘷z測中心有限公司，廣東廣州 510663

國家重大科學儀器設備開發與專項--新型高速、高靈敏度、高通量色譜分析儀器的開發與應用項目，應用超高效液相色譜進行化妝品與保健品的快速檢測方法開發和驗證任務（2012YQ14000807）

劉翠紅（1978-），碩士學位。研究方向：化妝品、保健食品、藥物標準研究