人參Rb組皂苷對大鼠體內外血栓形成的影響

曲 莉 于曉風 徐華麗 睢大筼

(吉林省疾病預防控制中心，吉林 長春 130062)

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人參Rb組皂苷對大鼠體內外血栓形成的影響

曲 莉 于曉風1徐華麗1睢大筼1

(吉林省疾病預防控制中心，吉林 長春 130062)

目的 觀察人參Rb組皂苷(G-Rb)對大鼠體內、外血栓形成的影響。方法 Wistar大鼠隨機分為對照組，G-Rb 17.5、35、70 mg/kg組及陽性藥組。對照組灌胃0.5%羧甲基纖維素鈉2 ml/kg，G-Rb三個劑量組分別灌胃G-Rb 17.5、35、70 mg/kg，陽性藥組灌胃通心絡膠囊1 000 mg/kg，連續7 d。①體外旁路循環實驗：從頸總動脈至頸外靜脈插入一根帶有絲線并充滿肝素-生理鹽水的聚乙烯套管，連接形成體外旁路循環。②電刺激實驗：分離右頸總動脈，將不銹鋼電極放置在該動脈處，并在其遠端放置溫度測量探頭備測血管表面的溫度。1.5 mA直流電持續刺激7.5 min。③體外血栓形成實驗：用硅化注射器由腹主動脈采血1.8 ml，立即注入內徑4 mm硅化聚乙烯塑料環中，置LBY-S5體外血栓形成儀上分別測定血栓濕重及血栓干重。結果 G-Rb 35、70 mg/kg組均可使體外旁路循環法所致血栓濕重明顯減輕，明顯延長電刺激法所致頸總動脈血栓形成時間及凝血時間，顯著提高凝血酶原濃度，并可使體外血栓形成實驗所致血栓濕重及血栓干重均明顯減輕(P<0.05或P<0.01)。結論 G-Rb對大鼠體內、外血栓形成均具有明顯抑制作用。

人參Rb組皂苷；血栓；體外旁路循環

人參Rb組皂苷(Ginsenoside-Rb,G-Rb)系從五加科人參屬植物西洋參(Panax Quinquefolium Linn)莖葉及根提取的總皂苷中分離得到的有效部位群，保證了人參皂苷Rb組分(包括Rb1、Rb2和Rb3)的完整性。前期研究表明，G-Rb能縮小急性心肌梗死犬心肌梗死面積，降低血清磷酸肌酸激酶及乳酸脫氫酶活性，并明顯降低血清LPO含量，提高超氧化物歧化酶(SOD)活性〔1〕；可明顯降低實驗性心肌梗死大鼠血液黏度和游離脂肪酸水平〔2〕；亦能降低心肌耗氧量，改善冠脈循環、抗自由基氧化損傷及增加心肌營養性血流量等〔3～5〕；對結扎大鼠腹主動脈所致壓力超負荷性心室重構具有保護作用，可改善心室重構大鼠的左心收縮和舒張功能，減少縮血管活性物質對心肌的損傷，糾正PGI2/TXA2失衡〔6〕；對大鼠結扎雙側頸總動脈伴低血壓所致實驗性腦缺血模型具有明顯保護作用〔7〕。G-Rb是否也具有防治體內、外血栓形成作用，目前尚未見文獻報道。本文觀察G-Rb對大鼠體內、外血栓形成的影響，為擴大其治療缺血性腦中風的適應證提供科學依據。

1 材料和方法

1.1 動物 清潔級Wistar大鼠，雌雄各半，體重220～250 g，合格證號SCXK-(吉)2007-0003，吉林大學實驗動物中心提供。

1.2 藥品 G-Rb 由吉林人參研究院提供，批號：20101220，人參皂苷Rb組分含量86.5%，實驗時以0.5%羧甲基纖維素鈉配制成所需濃度；陽性對照藥品：通心絡膠囊，石家莊以嶺藥業股份有限公司產品，批號20110706；規格：0.38 g/粒；用法：口服，2～4粒/次，3次/d。功能主治：益氣活血、通絡止痛，用于冠心病心絞痛，證屬心氣虛乏、血瘀絡阻者。試驗時以0.5%羧甲基纖維素鈉配制成所需濃度。

1.3 實驗方法

1.3.1 對大鼠動脈-靜脈旁路血栓形成的影響 50只Wistar大鼠隨機分為對照組，陽性藥通心絡膠囊1 000 mg/kg組及G-Rb 17.5、35、70 mg/kg組，每組10只。G-Rb及陽性藥組分別灌胃給藥，對照組灌胃0.5%羧甲基纖維素鈉，均1次/d，連續7 d。末次給藥后30 min，以戊巴比妥鈉30 mg/kg麻醉大鼠，按文獻方法制作大鼠動脈-靜脈旁路血栓模型〔8〕，分離右頸總動脈及左頸外靜脈，將充滿肝素的聚乙烯管(將兩根內徑1 cm、長10 cm的聚乙烯管2根，接于內徑2 cm、長8 cm聚乙烯管1根，粗管段上放入1根6 cm已稱重的線)一端插入靜脈，另一端插入頸總動脈。開啟動脈，血流由頸總動脈流入頸靜脈。15 min后中斷血流，取出絲線用微量電子秤取濕重(mg)，計算血栓重量及抑制率。血栓濕重(mg)= 總重量-線重量。抑制率=〔(對照組血栓重-給藥組血栓重)/ 對照組血栓重〕×100%。

1.3.2 對大鼠電刺激血栓形成時間、凝血時間及凝血酶原濃度的影響 50只Wistar大鼠隨機分為對照組，陽性藥(予通心絡膠囊1 000 mg/kg)組及G-Rb 17.5、35、70 mg/kg組，每組10只。G-Rb及陽性藥組分別灌胃給藥，對照組灌胃0.5%羧甲基纖維素鈉，均1次/d，連續7 d。末次給藥后30 min，以戊巴比妥鈉30 mg/kg腹腔注射麻醉，分離右頸總動脈15 mm，將不銹鋼電極放置在該動脈處，并在其遠端放置溫度測量探頭備測血管表面的溫度。1.5 mA直流電持續刺激7.5 min。當頸總動脈內因血栓形成堵塞血流時，血管遠端溫度突降，從刺激開始到溫度突降所需時間為血栓形成時間(OT)。以OT值和延長率作為判斷藥效的指標。延長率=(給藥組血栓形成時間-空白對照組血栓形成時間)/空白對照組血栓形成時間×100%。大鼠取血，測凝血時間；離心，取血清，測定大鼠凝血酶原濃度〔9〕。

1.3.3 對大鼠體外血栓形成的影響 50只Wistar大鼠隨機分為對照組，陽性藥(予通心絡膠囊1 000 mg/kg)組及G-Rb 17.5、35、70 mg/kg組，每組10只。G-Rb及陽性藥組分別灌胃給藥，對照組灌胃0.5%羧甲基纖維素鈉，均1次/d，連續7 d。末次給藥后30 min，按文獻方法〔8〕制作體外血栓模型，腹主動脈取血2.0 ml加入體外血栓管中，將血栓管環狀套在體外血栓形成儀轉動盤上，開動儀器，圓盤轉動速度為17 r/min。轉動15 min后停轉，迅速取下血栓管，把管內血液及形成血栓倒在培養皿中，將血栓放在干濾紙上，測量其長度，吸干表面鮮血，稱重，減去紙片重量后記錄血栓的濕重，將濕血栓連同紙片放入烤箱中(64℃)20 min，取出稱其重量，減去紙片重量為血栓干重。

2 結 果

2.1 G-Rb對大鼠動脈-靜脈旁路血栓形成的影響 與對照組比較，G-Rb 35、70 mg/kg組及陽性藥組的血栓濕重均明顯降低(P<0.05)，其抑制率分別為23.94%、26.06%及24.65%，見表1。

表1 G-Rb對大鼠動脈-靜脈旁路血栓形成的影響

與對照組比較：1)P<0.05

2.2 G-Rb對大鼠電刺激血栓形成時間、凝血時間及凝血酶原濃度的影響 與對照組比較，G-Rb 35、70 mg/kg組及陽性藥組均能明顯延長血栓形成時間及凝血時間(P<0.05 或P<0.01)，G-Rb 70 mg/kg組亦能顯著提高凝血酶原濃度(P<0.05)，見表2。

表2 G-Rb對電刺激血栓形成及凝血時間、凝血酶原濃度的影響

與對照組比較:1)P<0.05，2)P<0.01；下表同

2.3 G-Rb對大鼠體外血栓形成的影響 與對照組比較，G-Rb 35、70 mg/kg組及陽性藥組均能明顯降低大鼠體外血栓濕重及干重(P<0.05 或P<0.01)，G-Rb 70 mg/kg組亦能明顯降低大鼠血栓長度(P<0.05 )，見表3。

表3 G-Rb對大鼠體外血栓形成的影響±s，n=10)

3 討 論

動脈粥樣硬化是心腦缺血的病理基礎。血栓形成不僅與動脈粥樣硬化斑塊有關，在斑塊破裂、斑塊內出血與斑塊碎屑等導致動脈閉塞等一系列變化的過程中起主要作用〔10〕。血栓形成的直接因素為血液凝固及血小板黏附與聚集，也與血管壁損傷、血液黏度的升高及血流速度減慢有關。Chandler法形成血栓的組織結構與人的動脈血栓相似，其中含有血小板、紅細胞、纖維蛋白和水分等〔11〕。

本實驗結果顯示，G-Rb可使體外旁路循環法所致血栓濕重明顯減輕，明顯延長電刺激法所致頸總動脈血栓形成時間及凝血時間，顯著提高凝血酶原濃度，并可使體外血栓形成實驗所致血栓濕重及血栓干重均明顯減輕，提示其對大鼠體內、外血栓形成均具有明顯的拮抗作用，這種活性對防治缺血性腦血管疾病非常有價值。G-Rb抑制血栓形成的作用可能與延長凝血時間、提高凝血酶原濃度有關，確切機制有待進一步研究。

1 睢大員，陳滿秋，于曉風，等.人參Rb組皂苷對犬實驗性心肌梗死的保護作用〔J〕.中草藥，2001;32(2):136-9.

2 覃秀川，睢大員，楊景文，等.人參Rb組皂苷對實驗性心梗大鼠血液粘度和游離脂肪酸水平的影響〔J〕.中草藥，2002;32(6):540-4.

3 孫 乾，睢大員，于曉風，等.人參Rb組皂苷對實驗性心肌梗死犬心臟血流動力學和氧化謝的影響〔J〕.中草藥，2002;33(8):718-22.

4 覃秀川，睢大員，楊景文，等.人參Rb組皂甙對急性心肌梗死大鼠自由基代謝的影響〔J〕.吉林中醫藥，2002;22(3)：51-3.

5 徐華麗，翟玉榮，曲紹春，等.人參Rb組皂苷對小鼠心肌營養性血流量的影響〔J〕.人參研究，2003;15(3):2-4.

6 王天曉，于曉風，曲紹春，等.人參Rb組皂苷對壓力負荷性心肌肥厚大鼠心室重構的影響及其作用機制〔J〕.時珍國醫國藥，2008;19(7)：1615-7.

7 張涵亮，于曉風，曲紹春，等.人參Rb 組皂苷對大鼠實驗性腦缺血的影響〔J〕.中國老年學雜志，2011;31(12)：2247-9.

8 石鶴坤，甘 雨，秦文艷，等.贏絡復欣顆粒對大鼠血栓形成及小鼠腸系膜微循環障礙的影響〔J〕.中國實驗方劑學雜志，2011;17(3)：167-9.

9 岳海濤，李金成，呂銘洋，等.紅花注射液對大鼠血栓形成的影響及其作用機制〔J〕.中草藥，2011;42(8)：1585-7.

10 劉澤霖，賀石林，李家增，等.血栓性疾病的診斷與治療〔M〕.北京：人民衛生出版社，2000;262-3.

11 殷蔚荑，孟娟如，劉進揚，等.四甲基吡嗪對實驗性血栓形成的影響〔J〕.中國藥理學報，1981;2(4)：238-40.

〔2015-11-12修回〕

(編輯 徐 杰)

吉林省科技發展計劃項目(20085060)

睢大筼(1957-)，男，教授，博士生導師，主要從事心腦血管藥理學研究。

曲 莉(1963-)，女，主任醫師，主要從事老年病、慢性疾病防控研究。

R-322

A

1005-9202(2016)21-5258-03；

10.3969/j.issn.1005-9202.2016.21.019

1 吉林大學藥學院藥理教研室