脂聯(lián)素rs266729多態(tài)性和肥胖在多囊卵巢綜合征中交互作用研究

鄧 莉，李 艷

(武漢大學(xué)人民醫(yī)院檢驗科，湖北 武漢 430060)

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脂聯(lián)素rs266729多態(tài)性和肥胖在多囊卵巢綜合征中交互作用研究

鄧 莉，李 艷

(武漢大學(xué)人民醫(yī)院檢驗科，湖北 武漢 430060)

目的 探討脂聯(lián)素rs266729多態(tài)性與多囊卵巢綜合征(PCOS)關(guān)聯(lián)性及其與肥胖交互作用。方法 采用多聚酶鏈反應(yīng)-限制性片段長度多態(tài)性(PCR-RFLP)方法分析2014年2月至2015年8月住院的120例PCOS患者和同期140例體檢正常對照者的rs266729基因型。非條件Logistic分析各基因型與發(fā)病易感性的關(guān)系以及與肥胖的交互作用。結(jié)果 攜帶C(CC/CT)基因個體患病風(fēng)險較非C基因攜帶者(TT)風(fēng)險明顯增加1.55倍(OR=1.55，95%CI：1.41～3.71，P=0.00；校正OR=1.61，95%CI：1.51～4.01，P=0.00)；非條件Logistic分析表明認(rèn)攜帶CC/CT基因型肥胖個體PCOS罹患風(fēng)險是攜帶TT基因非肥胖個體的3.88倍(OR=3.88，95%CI：2.72～5.76，P=0.00；RERI=2.51，95%CI：1.22～3.80；AP=0.54，95%CI：0.34～0.74；S=1.56，95%CI：1.12～2.83)。結(jié)論 脂聯(lián)素rs266729多態(tài)性增加多囊卵巢綜合癥罹患風(fēng)險，且與肥胖存在多囊卵巢綜合癥發(fā)病中存在協(xié)同效應(yīng)。

脂聯(lián)素；多態(tài)性；多囊卵巢綜合征；易感性；交互作用

多囊卵巢綜合征(polycystic ovarian syndrome，PCOS)是婦科一種常見的內(nèi)分泌紊亂疾病，其臨床癥狀主要是閉經(jīng)、多毛和雙側(cè)卵巢多囊性增大的無排卵相關(guān)綜合征，同時伴隨胰島素血癥、高瘦素血癥及高雄激素血癥。PCOS易好發(fā)2型糖尿病、高血壓、子宮內(nèi)膜癌及心血管疾病，對婦女的健康構(gòu)成嚴(yán)重威脅[1]。由于PCOS的發(fā)病機制尚不明了，因而了解原發(fā)型PCOS發(fā)病機制對于預(yù)防PCOS顯得尤為重要。近年來，隨著人們生活水平的提高以及體育鍛煉缺乏，肥胖癥已經(jīng)成為困擾人民群眾健康的重要因素。國內(nèi)外學(xué)者現(xiàn)一致明確肥胖是PCOS的危險因素[2-3]。脂聯(lián)素(adiponectin)是一種與肥胖密切相關(guān)的細(xì)胞因子，研究表明它具有抗炎、降糖和增敏胰島素的作用[4-5]。為此，本研究通過采用限制性片段長度多態(tài)性聚合酶鏈反應(yīng)探討脂聯(lián)素rs266729多態(tài)性與PCOS易感性關(guān)系以及與肥胖的交互作用。

1資料與方法

1.1研究對象

病例組選取2013年4月至2015年6月于武漢大學(xué)人民醫(yī)院婦產(chǎn)科門診患者，多囊卵巢綜合征診治符合中華醫(yī)學(xué)會婦產(chǎn)科學(xué)分會內(nèi)分泌學(xué)的《多囊卵巢綜合征診治指南》，選取體檢中心健康個體作為對照人群。年齡范圍21～41歲。最終120例病例，140例對照組受試者納入研究。

1.2一般資料

收集年齡、性別、體重指數(shù)、吸煙史、飲酒史等一般資料。病例組和對照組中罹患其他系統(tǒng)嚴(yán)重疾病個體應(yīng)予以排除。本文若男性酒精消耗大于140g/周，女性大于>70g/周至少2年則定義飲酒，所有肥胖診斷均符合按照《中國高血壓防治指南2010》；即女性患者腰圍≥80cm。高等教育定于為高中以上的教育。

1.3脂聯(lián)素多態(tài)性檢測

采取經(jīng)典酚-氯仿經(jīng)典方法提取外周血基因組DNA。根據(jù)脂聯(lián)素基因的核苷酸序列設(shè)計各個位點的擴增引物使用PCR擴增目的基因片段。PCR擴增引物序列:脂聯(lián)素(脂聯(lián)素)引物為:上游：5′-GAGCCGTGGTGCCACCTGGG-3′；下游：5′-CGCCTCTTTACTCCCTCCGAC-3′；PCR反應(yīng)體系(25μL)包含100ng提取DNA，1.0UTaq酶，2μL上游以及下游引物2×PCR buffer。PCR反應(yīng)條件：95℃變性6分鐘，94℃ 30 秒，60℃30秒，72℃45秒30個循環(huán)，最后72℃延伸10分鐘。限制性內(nèi)切酶BsaHI、NlaIII酶切。酶切產(chǎn)物進行3%瓊脂糖電泳，EB染色成像以此判定酶切基因型。

1.4.統(tǒng)計學(xué)方法

本研究中的資料均采用SPSS 19.0進行分析。基因型和等位基因頻率比較采用非條件Logistic回歸分析，基因型Hardy-Weinberg平衡法卡方檢驗。計量資料符合正態(tài)分布則采用均數(shù)加減標(biāo)準(zhǔn)差表示。用t檢驗，運用logistic分析脂聯(lián)素rs266729多態(tài)性在多囊卵巢綜合征中作用。通過非條件Logistic以及Bootstrap方法估脂聯(lián)素多態(tài)與肥胖 間的相加交互作用[6]，計算相對超額危險度比(relative excess risk due to interaction，RERI)、歸因比(proportion attributable to interaction，AP)和交互作用指數(shù)(the synergy index,S)及其95%CI。如RERI和AP值95%CI包括0、S值95%CI包括1，表明不存在相加交互作用[6]。以P<0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1一般情況

病例組和對照組年齡、高等教育、家族史、飲酒等方面均無明顯統(tǒng)計學(xué)差異(均P>0.05)，而體力勞動、初潮月經(jīng)紊亂等方面有顯著性差異(均P<0.05)，見表1。

變量病例(n=120)對照(n=140)t/χ2P年齡(歲)26.51±6.7227.92±5.531.230.46高等教育39(32.50)48(34.29)2.130.12PCOS家族史54(4.50)6(4.29)0.120.92飲酒15(12.50)18(12.86)0.410.76體力勞動46(38.33)44(31.43)8.110.01初潮月經(jīng)紊亂26(21.67)25(17.86)6.810.03肥胖71(59.17)50(35.71)6.120.03

2.2脂聯(lián)素rs266729多態(tài)性與多囊卵巢綜合征易感性

rs266729對照組和病例組均符合Hardy-Weinberg平衡法(χ2=0.45，P=0.41；χ2=0.47，P=0.39)；rs1799983基因型CT的患病風(fēng)險是基因型TT的1.21倍(OR=1.21，95%CI：1.09～1.89，P=0.04)。CC基因型者患病風(fēng)險是基因型TT的1.45倍(OR=1.45，95%CI：1.31～3.23，P=0.00)。C基因攜帶者(CC+CT)患病風(fēng)險是非C基因攜帶者(TT)的1.55倍(OR=1.51，95%CI：1.41～3.71，P=0.00)。利用非條件Logistic回歸分析校正體力勞動,初潮月經(jīng)紊亂等因素T基因攜帶者(TT/CT)患病風(fēng)險是非T基因攜帶者(CC)1.61倍(OR=1.61，95%CI：1.51～4.01，P=0.00)，見表2。

表2 脂聯(lián)素rs266729基因型分布及與PCOS易感性的關(guān)系

注：a:體力勞動，初潮月經(jīng)紊亂因素。

2.3 rs266729與肥胖交互作用

本文采用非條件Logistic分析rs266729多態(tài)性與肥胖交互作用。與攜帶TT基因不肥胖個體相比，攜帶CT/CC基因型不肥胖個體罹患PCOS風(fēng)險增加1.21倍(OR=1.21，95%CI：1.14～2.76，P=0.04)；攜帶TT基因型肥胖個體罹患PCOS風(fēng)險增加1.16倍(OR=1.16，95%CI：1.09～2.31，P=0.05)；攜帶CT/CC基因型肥胖個體罹患PCOS風(fēng)險增加3.88倍(OR=3.88，95%CI：2.72～5.76，P=0.00；RERI=2.51，95%CI：1.22～3.80；AP=0.54，95%CI：0.34～0.74；S=1.56，95%CI：1.12～2.83)，RERI和AP值的95%CI不包括0,S值的95%CI不包括1。相加交互作用分析結(jié)果表明OR=1.67，95%CI:1.21～2.87，見表3。

表3 rs266729多態(tài)性與肥胖二者交互作用

注：a體力勞動，初潮月經(jīng)紊亂因素；Padd：相加交互作用P值；Pmulti：相乘交互作用P值。

3討論

3.1脂聯(lián)素rs266729基因型分布及與多囊卵巢綜合征易感性

迄今為止，國內(nèi)外脂聯(lián)素多態(tài)性與多囊卵巢綜合征易感性的關(guān)系可見報道。我國學(xué)者發(fā)現(xiàn)武漢、天津等地區(qū)人群中多囊卵巢綜合癥發(fā)病脂聯(lián)素多態(tài)性明顯相關(guān)[7-8]；而印度、伊朗發(fā)現(xiàn)多囊卵巢綜合征發(fā)病與脂聯(lián)素多態(tài)性無明顯的相關(guān)[9-10]。上述結(jié)果提示不同地區(qū)脂聯(lián)素基因多態(tài)性與多囊卵巢綜合征的關(guān)聯(lián)性表現(xiàn)出一定的差異。為此，探討湖北地區(qū)人群脂聯(lián)素多態(tài)性與易感性關(guān)聯(lián)性。本文通過病例-對照實驗分析發(fā)現(xiàn)脂聯(lián)素rs266729攜帶C(CC/CT)基因個體患病風(fēng)險較非C基因攜帶者(TT)風(fēng)險明顯增加1.21倍，提示rs266729是PCOS的危險因素。人類脂聯(lián)素基因位于人類3號染色體3q27 ，目前發(fā)現(xiàn)該基因存在近多個多態(tài)性位點，不同個體脂聯(lián)素表達(dá)水平呈現(xiàn)一定的差異，這可能與脂聯(lián)素多態(tài)性有關(guān)[9]。多囊卵巢綜合征發(fā)病除與生活環(huán)境以及自身因素有關(guān)外，還與飲食以及遺傳感染密切相關(guān)[1]。現(xiàn)已有研究報道提示，脂聯(lián)素多態(tài)性與二型糖尿病、代謝綜合征、非酒精性脂肪性肝病等代謝性疾病易感性密切相關(guān)[10-12]。近年來，流行病學(xué)不斷證實遺傳因素在多囊卵巢綜合征發(fā)病中發(fā)揮著重要作用。從遺傳易感性角度確定多囊卵巢綜合征高危人群，并進行針對性的預(yù)防是目前降低多囊卵巢綜合征發(fā)生風(fēng)險的有效措施。

3.2脂聯(lián)素多態(tài)性與肥胖在多囊卵巢綜合征交互作用

現(xiàn)已知家族史、飲酒、體力勞動、初潮月經(jīng)紊亂均為多囊卵巢綜合征的重要的影響因素[1]。為了排除這些混雜因素在脂聯(lián)素rs266729多態(tài)性與多囊卵巢綜合征關(guān)聯(lián)性研究中的影響，本文采取非條件Logistic回歸予以校正，校正后發(fā)現(xiàn)脂聯(lián)素 多態(tài)性與多囊卵巢綜合征仍有顯著的關(guān)聯(lián)性(P<0.05)。眾所周知，多囊卵巢綜合征患病是個體遺傳因素與外界環(huán)境因素共同作用的結(jié)果[1]，為了進一步探討脂聯(lián)素rs266729多態(tài)性與肥胖對多囊卵巢綜合征患病是否有交互作用。本文可采用非條件Logistic回歸分析予以驗證[5]，結(jié)果還表明攜帶CC/CT基因型肥胖個體多囊卵巢綜合征罹患風(fēng)險是攜帶TT基因非肥胖個體的3.33倍，提示脂聯(lián)素rs266729多態(tài)性與肥胖在多囊卵巢綜合征發(fā)病中存在協(xié)同作用。脂聯(lián)素多態(tài)性和肥胖在多囊卵巢綜合征及其他疾病中的交互作用鮮見報道，其機制目前尚無法闡明。既往研究報道脂聯(lián)素多態(tài)性與肥胖的相關(guān)[13]。參照脂聯(lián)素多態(tài)性可以影響其表達(dá)水平高低的相關(guān)報道[7]，脂聯(lián)素多態(tài)性既可直接增加多囊卵巢綜合征易感性[13-15]，同時也可以影響肥胖而間接增加多囊卵巢綜合征易感性而發(fā)揮協(xié)同效應(yīng)[1]。本研究存在一定不足，最顯著的是診斷只考慮了是否肥胖，而沒有充分考慮肥胖的嚴(yán)重程度。其次，本文僅僅考慮肥胖，而沒有考慮生活習(xí)慣以及環(huán)境因素的影響。再次，研究中樣本量較小，需要進一步擴大樣本量。

總之，脂聯(lián)rs266729多態(tài)性可以增加個體多囊卵巢綜合征罹患風(fēng)險，且和肥胖在多囊卵巢綜合征發(fā)病中發(fā)揮著協(xié)同作用。本研究存在一定不足，為更好研究脂聯(lián)素多態(tài)性在多囊卵巢綜合征易感性以及與肥胖的交互作用尚需要開展更大樣本量、設(shè)計更嚴(yán)謹(jǐn)?shù)难芯俊?/p>

[1]王婷,柏海燕,師娟子.青春期多囊卵巢綜合征的研究進展[J].中國婦幼健康研究,2014,25(3):549-551.

[2]王嬋,侯麗輝,吳效科,等.炎癥介質(zhì)與肥胖和多囊卵巢綜合征[J].中國婦幼健康研究,2011,22(1):111-113.

[3]Bu Z,Dai W,Guo Y,etal.Overweight and obesity adversely affect outcomes of assisted reproductive technologies in polycystic ovary syndrome patients [J].Int J Clin Exp Med,2013,6(10):991-995.

[4]Nigro E,Scudiero O,Monaco M L,et al.New insight into adiponectin role in obesity and obesity-related diseases[J].Biomed Res Int,2014,2014,658913.

[5]Esfahani M,Movahedian A,Baranchi M,etal.Adiponectin: an adipokine with protective features against metabolic syndrome[J].Iran J Basic Med Sci,2015,18(5):430-442.

[6]陳卿,唐迅,胡永華.應(yīng)用廣義多因子降維法分析數(shù)量性狀的交互作用[J].中華流行病學(xué)雜志,2010,31(8):938-941.

[7]Dhillon P K,Penney K L,Schumacher F,etal.Common polymorphisms in the adiponectin and its receptor genes,adiponectin levels and the risk of prostate cancer[J].Cancer Epidemiol Biomarkers Prev,2011,20(12):2618-2627.

[8]Li L,Yun J H,Lee J H,etal.Association study of +45G15G(T/G) and +276(G/T) polymorphisms in the adiponectin gene in patients with polycystic ovary syndrome[J].Int J Mol Med,2011,27(2):283-287.

[9]Nambiar V, Vijesh V V, Lakshmanan P,etal. Association of adiponectin and resistin gene polymorphisms in South Indian women with polycystic ovary syndrome[J]. Eur J Obstet Gynecol Reprod Biol,2016,200:82-88.

[10]Ramezani Tehrani F, Daneshpour M,Hashemi S,etal. Relationship between polymorphism of insulin receptor gene, and adiponectin gene with PCOS[J].Iran J Reprod Med,2013,11(3):185-194.

[11]Yoshihara K,Yahata T,Kashima K,etal.Association of single nucleotide polymorphisms in adiponectin and its receptor genes with polycystic ovary syndrome[J].J Reprod Med,2009,54(11-12):669-674.

[12]Wang W L,Zhu H,Xie Y,etal.Relation between ADIPOQ gene polymorphisms and type 2 diabetes in a Chinese population[J].Int J Clin Exp Med,2015,8(4):6124-6128.

[13]Hsieh C J,Wang P W,Hu T H.Association of adiponectin gene polymorphism with nonalcoholic fatty liver disease in Taiwanese patients with type 2 diabetes[J].PLoS One,2015,10(6):e0127521.

[14]Li P,Jiang R,Li L,etal.Correlation of serum adiponectin and adiponectin gene polymorphism with metabolic syndrome in Chinese adolescents[J].Eur J Clin Nutr,2015,69(1):62-67.

[15]Lu J F,Zhou Y,Huang G H,etal.Association of ADIPOQ polymorphisms with obesity risk: a meta-analysis[J].Hum Immunol,2014,75(10):1062-1068.

[專業(yè)責(zé)任編輯： 呂淑蘭]

Interaction between adiponectin rs266729 polymorphisms and obesity in polycystic ovarian syndrome

DENG Li, LI Yan

(Department of Clinical Laboratory, Renmin Hospital, Hubei Wuhan 430060, China)

Objective To study the relationship between rs266729 polymorphism in endothelial adiponectin and polycystic ovarian syndrome (PCOS) and the interaction with obesity. Methods Genotypes of rs266729 of 120 hospitalized cases of PCOS and 140 controls selected from February 2014 to August 2015 were examined by polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism (PCR-RFLP). The unconditional Logistic regression (ULR) was performed to assess the correlation of genotypes with susceptibility and the interaction with obesity. Results The risk of developing PCOS for CC/CT genotype carriers increased by 1.55 times compared to TT (OR=1.55, 95%CI: 1.41-3.71,P=0.00;ORadjust=1.61,95%CI:1.51-4.01,P=0.00). ULR analysis showed that obesity-positive subjects with genotype CT/CC had 3.88 times of PCOS risk of obesity-negative subjects with genotype TT (OR=3.88,95%CI:2.72-5.76,P=0.00) (RERI=2.51, 95%CI:1.22-3.80;API=0.54,95%CI:0.34-0.74;S=1.56,95%CI:1.12-2.83).Conclusion Adiponectin rs266729 polymorphism is associated with increased risk for PCOS, and its interaction with obesity has synergistic effects on risk of PCOS.

adiponectin; polymorphism; polycystic ovarian syndrome (PCOS); susceptibility; interaction

2015-11-12

鄧 莉(1981-)，女，主治醫(yī)師，主要從事分子生物學(xué)檢驗工作。

李 艷，教授。

10.3969/j.issn.1673-5293.2016.10.013

R711.6

A

1673-5293(2016)10-1204-03