不同血小板濃度對血小板聚集率的影響探討

但　剛，羅鴻雁，江忠勇，胡莉娜，吳艾霖，劉晨霞，熊　杰

不同血小板濃度對血小板聚集率的影響探討

但剛，羅鴻雁，江忠勇，胡莉娜，吳艾霖，劉晨霞，熊杰

目的觀察不同濃度的血小板數量對于聚集率檢測的影響，并探索血小板聚集率檢測的適宜濃度范圍，以保證測定血小板聚集率的準確性。方法選取49例臨床健康體檢者標本，使用不同的離心力分離出富血小板血漿（PRP）和乏血小板血漿（PPP），利用血細胞分析儀測定血小板濃度，將PRP用自身PPP按倍比稀釋方法調制成4個不同濃度的PRP，觀察不同濃度的PRP在加入誘導劑后血小板的聚集率的變化。結果血小板聚集率隨著血小板濃度降低而明顯降低，不同濃度的PRP的聚集率有統計學差異（P＜0.05），血小板聚集率與其濃度呈正相關（P＜0.05）；當血小板濃度＜90×109/L時，其聚集率低于正常參考，提示在此濃度下，其聚集率已經不能準確反映血小板的真實聚集情況了。結論血小板濃度對其聚集率有明顯影響。血小板濃度在（90～250）×109/L時測定，能真實反映其聚集率；PRP在血小板＜90×109/L時，其聚集率測定易造成假性降低的結果。

血小板；濃度；聚集率；測定

血小板（PLT）具有黏附、聚集、釋放反應，促凝血、血管收縮等生理功能，血小板聚集是血小板活化及其釋放反應、膜糖蛋白受體等綜合因素的共同表現。其聚集率的檢測，已被廣泛應用于血栓性疾病及出血的診斷、治療和療效評估。有研究顯示，血小板絕對數量與血小板的聚集能力密切相關［1］。本研究擬以健康人血漿為研究對象，以光學比濁法分析在二磷酸腺苷（ADP）和花生四烯酸（AA）等誘導劑的誘導作用下，在不同血小板濃度下血小板聚集率的變化，以觀察不同濃度的血小板數量對于聚集率檢測的影響，并探索血小板聚集率檢測的適宜濃度范圍。

1　對象與方法

1.1研究對象選擇2014年10月～2015年1月在本院健康體檢中心體檢的49名體檢者，體檢結論均為健康，排除血液系統疾病患者，未口服抗血小板類藥物。其中男性26名，女性23名。年齡30～55（41.2±7.5）歲。

1.2主要儀器與試劑SYSMEX XE-2100五分類血細胞分析儀（日本SYSMEX公司）及其配套試劑；美國海倫娜（Helena）血小板聚集分析儀及其配套試劑：誘導劑：ADP、AA（美國海倫娜公司）。

1.3方法

1.3.1標本采集抽取受檢者靜脈全血于枸櫞酸鈉真空抗凝管2管，同時抽取EDTA-K2真空抗凝管1管。

1.3.2血小板濃度測定將EDTA-K2抗凝全血用SYSMEX XE-2100五分類血細胞分析儀測定血小板濃度。

1.3.3血小板聚集率測定將枸櫞酸鈉抗凝全血經800 r/min離心10 min，分離出富血小板血漿（PRP），吸取PRP后，剩余血漿再經3000 r/min離心10 min，分離乏血小板血漿（PPP）。利用其自身PPP將PRP倍比稀釋成0、2、4、8倍稀釋的4個濃度的PRP［濃度范圍分別為（190～250）×109/L、（120～90）× 109/L、（75～45）×109/L、（36～25）×109/L］。采用光學比濁法，在海倫娜血小板聚集測試儀上測定不同濃度PRP的血小板聚集率，誘導劑為配套的ADP和AA，分別記錄ADP和AA誘導下的最大聚集率。

1.4統計學方法應用SPSS13.0統計軟件進行數據分析，計量資料組間比較采用配對t檢驗，相關性分析采用Spearman檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2　結果

2.1不同濃度PRP的血小板聚集率測定結果

檢測標本的血小板原始濃度范圍為（190～250）×109/L，其聚集率平均值為（87.1±13.6）%；隨著稀釋濃度的降低，血小板聚集率顯著下降（P＜0.05）；當濃度降低至＜90×109/L時，血小板聚集率檢測結果低于正常參考范圍（55%～96%），提示出現假性降低結果。見表1。

2.2PRP濃度與聚集率的相關性分析Spearman相關分析結果顯示，PRP濃度與血小板聚集率呈顯著正相關，ADP為誘導劑時（r=0.984，P＜0.05）；AA為誘導劑時（r=0.978，P＜0.05）。

表1　不同濃度PRP的血小板聚集率測定結果（n=49）

3　討論

血小板聚集是血小板主要功能，血小板活化和黏附聚集特性在維持機體穩定和防御中有著重要的生理學意義。這一功能不但參與了正常的生理止凝血功能，同時還是心腦血管疾病血栓形成的物質結構基礎［2］。關于血小板聚集功能的研究發現，有效評估和干預血小板聚集功能，可以有效地干預心腦血管疾病的病程發展。鑒于血小板聚集的重要作用，血小板聚集功能檢測已廣泛應用于臨床。但由于血小板聚集檢測原理和干擾因素的影響，導致其應用的真正價值未能有效的體現。目前臨床上使用最為廣泛測定聚集率的方法依然是血漿比濁法，其基本具體原理為：在富含血小板的血漿中，加入ADP或AA等誘導劑，在磁珠的不斷攪拌下，就能誘發血小板聚集，通過測定其吸光度的變化，就能準確檢測出血小板聚集率的高低［2-3］。

血小板數量、溫度、pH值、血漿蛋白含量、血漿離子濃度、藥物等眾多因素均可干擾血小板聚集，其中血小板數量對于血小板聚集率的影響較大。國際血栓學會（ISTH）在指南中指出，對于血小板聚集實驗而言，檢測標本的渾濁度是最重要的因素之一［4］。有研究顯示：在使用電阻法測定中，正常人群血小板聚集率與血小板濃度相關，血小板濃度與聚集率之間可能存在對數關系，但該報道中血小板的濃度僅僅是某些特定值，且使用血細胞分析儀稀釋液對標本進行稀釋［5］。

本研究采用血漿比濁法測定聚集率，并通過來自本體的乏血小板血漿稀釋，完全模擬人體內血小板聚集的環境（血漿蛋白、pH值等），避免了其他因素激活血小板。本研究旨在探索在ADP和AA誘導下，不同濃度血小板對聚集率的影響，并確定測定血小板聚集率所需的可信的血小板濃度。研究結果顯示，正常健康人群的血小板原始濃度為（250～190）×109/L，對其原始濃度和（120～90）×109/L濃度的PRP進行檢測，血小板聚集率均在本實驗室的正常參考范圍55%～96%內。其聚集率也隨著PRP中血小板濃度的降低而降低，且各濃度組聚集率比較均有統計學差異，顯示血小板濃度對聚集率有顯著影響。同時，結果顯示血小板聚集率與PRP濃度呈正相關（P＜0.05）。而當PRP濃度下降至＜90×109/L時，聚集率檢測結果出現明顯降低，低于本實驗室的正常參考范圍，提示出現假性降低結果。因此認為，當PRP濃度＜90×109/L時，其聚集率不能正確反映血小板聚集功能。本結論對指導臨床判斷血小板聚集功能具有重要指導意義，能有效排除因血小板數量降低而導致的其聚集功能的假性降低。

依據吳小利等［6］的《PL-11血小板功能分析儀檢測ADP誘導的血小板聚集率參考區間初步調查》一文，不同年齡對血小板聚集率無明顯影響，因此，本研究在設置參考區間時未考慮年齡因素。

綜上所述，血小板濃度對其聚集率有顯著影響，當PRP濃度＜90×109/L時，其聚集率不能正確反映血小板聚集功能。故測定血小板聚集功能時，應保證血小板濃度＞90×109/L，其檢測結果才能正確反映血小板真實聚集功能。

［1］王偉娜.血小板聚集試驗及其臨床應用進展［J］.臨床軍醫雜志，2015.43（11）:874-876.

［2］崔美紅，劉惠亮.血小板聚集功能監測［J］.心臟雜志，2014，26（4）：494-496.

［3］孫越紅，王雅杰，周景茹.血小板聚集實驗條件優化的研究［J］.現代檢驗醫學雜志，2007，22（2）：8-9.

［4］International Society on Thrombosis and Haemostasis（ISTH）. Diagnosis of inherited platelet function disorders:guidance from the SSC of the ISTH［J］.J Thromb Haemost，2015，13（2）:314-322

［5］李祖蘭，楊亮程，任軍偉，等.富血小板血漿中血小板濃度對血小板聚集的影響［J］.標記免疫分析與臨床，2012，19（2）：94-96.

［6］吳小利，李健，劉紅英，等.PL-11血小板功能分析儀檢測ADP誘導的血小板聚集率參考區間初步調查［J］.臨床檢驗雜志，2013，31（9）：715-717.

Effects of different platelet concentration on platelet aggregation

Dan Gang，Luo Hongyan，Jiang Zhongyong，Hu Lina，Wu Ailin，Liu Chengxia，Xiong JieDepartment of Laboratory，General Hospital of Chengdu Military Command，Chengdu，610083，China

ObjectiveTo observe the impacts of different platelet（PLT）concentration on the detection of PLT aggregation rate and explore the appropriate concentration range for such detection to ensure the accuracy of such detection.MethodsA total of 49 healthy examinees were collected as samples.The platelet rich plasma（PRP）and platelet poor plasma（PPP）were isolated with different centrifugal forces.PLT concentration was determined with hematology analyzer.PRP was prepared into PRP with four different concentrations with PPP and by multiple proportion attenuation to observe the change of PLT aggregation rate in PRP with different concentrations after the addition of inducer.ResultsPLT aggregation rate decreased with the decrease of PLT concentration；PLT aggregation rate for PRP at different concentrations were significantly different（P＜0.05）；therefore，PLT aggregation rate was positively correlated with its concentration（P＜0.05）；when PLT concentration was＜90×109/L，PLT aggregation rate was lower than the normal value，indicating that it had been unable to reflect the actual aggregation of PLT accurately under such concentration. ConclusionPLT concentration has a significant effect on the aggregation rate of PLT.The aggregation rate can be reflected accurately when PLT concentration is within the range of（90-250）×109/L；the aggregation rate determination may cause the pseudo reduced results when the concentration is＜90×109/L.

PLT；concentration；aggregation rate；determination

R 331.143

A

1004-0188（2016）08-0832-03

10.3969/j.issn.1004-0188.2016.08.002

四川省衛計委科研課題（140007）

610083成都，成都軍區總醫院檢驗科（但剛，江忠勇，胡莉娜，吳艾霖，劉晨霞，熊杰），四川省自貢軍分區干休所（羅鴻雁）

，熊杰，E-mail：byx410@sina.com

（2016-05-10）