p57/Kip2在食管鱗癌腦轉(zhuǎn)移瘤中的表達(dá)及意義

茹 藝 陳曉杰 張鵬飛 高社干 高 強(qiáng) 王玉峰 劉麗娜 馮笑山*

1)河南科技大學(xué)第一附屬醫(yī)院 洛陽(yáng) 471000 2)南陽(yáng)市第二人民醫(yī)院腫瘤科 南陽(yáng) 473000

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p57/Kip2在食管鱗癌腦轉(zhuǎn)移瘤中的表達(dá)及意義

茹 藝1)陳曉杰1)張鵬飛1)高社干1)高 強(qiáng)1)王玉峰1)劉麗娜2)馮笑山1)*

1)河南科技大學(xué)第一附屬醫(yī)院 洛陽(yáng) 471000 2)南陽(yáng)市第二人民醫(yī)院腫瘤科 南陽(yáng) 473000

目的 探討p57/Kip2在食管鱗癌腦轉(zhuǎn)移瘤組織中的表達(dá)，探討其在食管鱗癌腦轉(zhuǎn)移中的作用。方法 選擇食管鱗癌腦轉(zhuǎn)移瘤組織，采用免疫組化檢測(cè)p57/Kip2的表達(dá)水平。結(jié)果 免疫組化方法結(jié)果顯示，食管鱗癌腦轉(zhuǎn)移癌旁組織中 p57/Kip2的表達(dá)水平顯著高于癌組織，且與腫瘤病理分化程度相關(guān)(P<0.05)，p57/Kip2在中-高分化病例中的陽(yáng)性表達(dá)率為57.1%，在中-低分化病例中陽(yáng)性表達(dá)率為18.2%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.000)。結(jié)論 p57/Kip2食管鱗癌腦轉(zhuǎn)移癌組織中表達(dá)顯著下調(diào)，且與病理分化程度相關(guān)，即表達(dá)下調(diào)明顯病理分化程度越差。

食管鱗癌；p57/Kip2；病理分化；腦轉(zhuǎn)移

p57/Kip2基因具有抑制細(xì)胞增殖和分化作用，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，并與基因組印記有關(guān)[3]。本研究通過檢測(cè)p57/Kip2在賁門癌及其配對(duì)的癌旁組織中的表達(dá)以及與臨床病理資料之間的關(guān)系，探討p57/Kip2在賁門癌發(fā)生、發(fā)展中的作用。

1 資料與方法

1．1 研究對(duì)象 選擇2006-01—2016-02河南科技大學(xué)第一附屬醫(yī)院及南陽(yáng)市第二人民醫(yī)院神經(jīng)外科經(jīng)手術(shù)切除的15例食管鱗癌腦轉(zhuǎn)移瘤手術(shù)標(biāo)本，診斷均有病理檢查支持。男10例，女5例；年齡60～72歲。所有患者術(shù)前均未經(jīng)放療治療。病理診斷及分級(jí)參照WHO消化道系統(tǒng)腫瘤分類標(biāo)準(zhǔn)(2007年版)：15例病例中低-分化7例，中分化5例，中-高分化3例。另選取15例同期住院的經(jīng)手術(shù)切除的正常腦組織的患者(正常腦組織組)，男10例，女5例，年齡23～47歲。標(biāo)本切除離體后，病理科常規(guī)石蠟包埋切片。

1．2 方法

1．2.1 HE染色：二甲苯侵泡15 min(2次)，無水乙醇侵泡5 min(2次)，95%乙醇侵泡 5 min(2次)，80%乙醇侵泡 5 min，水洗，蘇木精染色 5 min，流水沖洗，1%鹽酸分化1 s，0.5%伊紅液染色 5 min，水洗，80%乙醇侵泡5 min，95%乙醇侵泡5 min(2次)，無水乙醇侵泡 5 min，95%乙醇侵泡5 min，二甲苯侵泡5 min(2次)，中性樹膠封片。

1．2.2 免疫組織化學(xué)染色：所有組織切片均進(jìn)行常規(guī)免疫組織化學(xué)染色，主要步驟如下：脫蠟，水化，抗原修復(fù)，封閉，PBS漂洗，一抗(兔IgG)孵育并且4℃過夜，TBS漂洗10分鐘，二抗孵育10～30 min，PBS漂洗，DAB顯色，蒸餾水漂洗，1%鹽酸酒精分化，蘇木素復(fù)染，脫水，透明，封片，顯微鏡下觀察。

1．2.3 判定免疫組化的結(jié)果：在光學(xué)顯微鏡下對(duì)組織切片進(jìn)行觀察，閱片采取2位病理科醫(yī)師雙盲閱片方法，每張切片取6個(gè)高倍視野 (×400)，對(duì)視野內(nèi)陽(yáng)性細(xì)胞計(jì)數(shù)。陽(yáng)性表達(dá)細(xì)胞的判斷標(biāo)準(zhǔn)：①完全沒有著色 0分，輕度淡黃色著色 1分，中度棕黃色著色 2分，3棕褐色著色 3分。判斷陽(yáng)性范圍：0分：<5%，1分：5%～25%，2分：26%～50%，3分：51%～75%，4分>75%；二者相加分?jǐn)?shù)為判定結(jié)果：陰性(-)：<2分，弱陽(yáng)性(+)：2～3分，中度陽(yáng)性(++)：4～5分，強(qiáng)陽(yáng)性(+++)：6～7分。

1．3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 所有數(shù)據(jù)采用SPSS 18．0軟件進(jìn)行處理，采用Wilcoxon符號(hào)秩檢驗(yàn)比較配對(duì)設(shè)計(jì)的等級(jí)資料。

2 結(jié)果

2．1 p57/Kip2表達(dá)的檢測(cè)結(jié)果 細(xì)胞染色定位于細(xì)胞核，胞核呈棕黃色為表達(dá)陽(yáng)性，。轉(zhuǎn)移癌組織中p57/Kip2總陽(yáng)性表達(dá)率和強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)率分別為26.7%(4/15)、0；癌旁組織為 73.3%(11/15)、26.7%(4/15)。正常組織為 100%(15/15)、53.3%(8/15)。根據(jù)Wilcoxon秩檢驗(yàn)結(jié)果看出腫瘤、癌旁組織及正常組織中p57/Kip2的表達(dá)差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

2．2 p57/Kip2與臨床病理分化具有相關(guān)性 為檢測(cè)腫瘤組織中p57/Kip2的表達(dá)水平與臨床病理分化程度是否具有相關(guān)性，我們采用COX回歸分析p57/Kip2的表達(dá)水平與臨床病理分化程度之間的關(guān)系。結(jié)果提示腫瘤組織中p57/Kip2 的表達(dá)水平與臨床病理分化程度具有相關(guān)性(P<0.01)，即病理分化程度越高p57/Kip2表達(dá)水平越高。見表2、表3。

表1 各組p57/Kip2表達(dá)情況比較 [n(%)]

注：與瘤旁組比較，*P<0.05；與正常組比較，#P<0.05

表2 賁門癌臨床特征分布

表3 臨床病理分化程度與p57/Kip2蛋白表達(dá)情況比較 (n)

注：與中-高分化組比較，#P<0.05

3 討論

不同腫瘤出現(xiàn)腦轉(zhuǎn)移的幾率不同，惡性腫瘤出現(xiàn)腦轉(zhuǎn)移為 15%～40%，食管癌腦轉(zhuǎn)移僅為1.4%～1.7%[1]，比較少見。 我院 9 a間共收治食管癌腦轉(zhuǎn)移患者 15 例，占同期食管癌患者的 2.11%。國(guó)內(nèi)外對(duì)于食管癌腦轉(zhuǎn)移尚無大宗臨床報(bào)道。食管癌腦轉(zhuǎn)移多出現(xiàn)在食管癌診斷后1 a以內(nèi)。診斷主要依據(jù)病史、癥狀、體征以及影像學(xué)檢查，臨床癥狀多見頭暈、頭痛、惡心、嘔吐及步態(tài)不穩(wěn)等。 影像學(xué)檢查可顯示單發(fā)或多發(fā)的顱內(nèi)占位性病變，且多伴明顯的瘤周水腫，增強(qiáng)造影可出現(xiàn)病灶被強(qiáng)化。活檢為最終診斷手段。我國(guó)食管癌腦轉(zhuǎn)移多見于食管鱗癌患者，與我國(guó)食管鱗癌高發(fā)一致。食管癌腦轉(zhuǎn)移患者男性居多，且發(fā)病年齡較大，中位年齡60歲。 Wadhwa R等[2]報(bào)道食管癌腦轉(zhuǎn)移患者，臨床分期較差。

p57/Kip2是Matsuoka等于1995年發(fā)現(xiàn)、定位于人染色體11p15.5、作用于細(xì)胞周期的基因[3]。

CDKN1C(p57KIP2)抑制細(xì)胞周期依賴激酶(CDK)的活性，是Cip/Kip家族成員之一，多項(xiàng)研究證明在絕大多數(shù)腫瘤細(xì)胞中該蛋白的表達(dá)水平明顯下降。許多腫瘤組織中存在p57/Kip2基因變異率低而蛋白表達(dá)下降或失活率高的現(xiàn)象，與p57/Kip2蛋白表達(dá)水平除了取決于基因外還要受轉(zhuǎn)錄、翻譯、翻譯后修飾等多個(gè)環(huán)節(jié)的影響有關(guān)[4]。p57KIP2的氨基末端區(qū)域與其他的Cip/Kip家族成員具有同源性，該區(qū)域能夠結(jié)合cyclin-CDK復(fù)合體從而控制細(xì)胞周期的進(jìn)程。然而人類的p57KIP2該區(qū)域富含脯氨酸序列(PAPA)，這在其他Cip/Kip家族成員中未發(fā)現(xiàn)，本研究提示與其他家族成員相比p57KIP2可能具有特殊功能。p57KIP2參與多個(gè)細(xì)胞生命活動(dòng)，包括對(duì)細(xì)胞周期的調(diào)控、細(xì)胞分化、凋亡以及腫瘤的發(fā)生、發(fā)展。因此根據(jù)基因的染色體位置、生物功能和作為遺傳印跡的地位，p57KIP2已經(jīng)被公認(rèn)為抑癌基因。此外，因在許多晚期腫瘤中p57KIP2表達(dá)缺失，p57KIP2在臨床上有潛在的預(yù)測(cè)預(yù)后和臨床治療腫瘤的價(jià)值。本研究通過檢測(cè)p57/Kip2在賁門癌及其配對(duì)的癌旁組織中的表達(dá)以及與臨床病理資料之間的關(guān)系，探討p57/Kip2在賁門癌發(fā)生、發(fā)展中的作用。結(jié)果提示，腫瘤組織中p57/Kip2的表達(dá)水平與臨床病理分化程度有相關(guān)性，即病理分化程度越高p57/Kip2表達(dá)水平越高。

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(收稿2016-03-18)

2011年河南省科技公關(guān)重大項(xiàng)目112101310100

馮笑山，男，博士，教授，E-mail：samfeng137@hotmail.com

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