臍帶血干細(xì)胞治療原發(fā)性SS合并周圍神經(jīng)病的療效研究

張敏，聶淑科，張清安，張允建

臍帶血干細(xì)胞治療原發(fā)性SS合并周圍神經(jīng)病的療效研究

張敏，聶淑科，張清安，張允建

目的觀察臍帶血干細(xì)胞移植治療原發(fā)性干燥綜合征（SS）伴周圍神經(jīng)病患者的臨床療效。方法前瞻性納入2010年1月～2014年6月治療的原發(fā)性SS合并周圍神經(jīng)病患者30例，隨機(jī)分為對照組和干細(xì)胞組（n=15），對照組給予常規(guī)抗風(fēng)濕及營養(yǎng)神經(jīng)治療，干細(xì)胞組在對照組治療基礎(chǔ)上給予臍帶血干細(xì)胞靜脈注射（單次干細(xì)胞數(shù)量為5.0×107，每3 d 1次，共3次）。分別于治療前及治療3個月后，采用Fugl-Meyer運(yùn)動量表（FMA）和四肢肌電圖檢查評估兩組四肢運(yùn)動功能及神經(jīng)功能恢復(fù)情況。結(jié)果治療前兩組的FMA評分及神經(jīng)傳導(dǎo)速度差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）；治療后，兩組的FMA評分及正中神經(jīng)、橈神經(jīng)及腓腸神經(jīng)傳導(dǎo)速度均較治療前顯著改善，而干細(xì)胞組改善幅度優(yōu)于對照組（P＜0.05）。結(jié)論臍帶血干細(xì)胞治療有助于恢復(fù)原發(fā)性SS伴周圍神經(jīng)受損的神經(jīng)功能。

臍帶血；干細(xì)胞，原發(fā)干燥綜合征；周圍神經(jīng)病；神經(jīng)功能

原發(fā)性干燥綜合征（SS）是常見的自身免疫性疾病，主要累及外分泌腺，臨床表現(xiàn)為口干、眼干，唾液及眼淚減少，同時也可累及神經(jīng)系統(tǒng)、腎臟及血液系統(tǒng)等多個系統(tǒng)［1］。約有10%～40%的原發(fā)性SS患者合并周圍神經(jīng)受損，嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量和工作，同時加重其經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)［2］。近年來，大量研究表明，間充質(zhì)干細(xì)胞可分化為神經(jīng)細(xì)胞，并可促進(jìn)髓鞘的再生和再髓鞘化［11］，促進(jìn)周圍神經(jīng)及中樞神經(jīng)功能的恢復(fù)。人臍帶血來源豐富，采集過程簡便，含有豐富的造血干/祖細(xì)胞，不存在胚胎干細(xì)胞的倫理和成瘤性問題，亦不存在自體骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的高齡患者細(xì)胞治療和分化能力下降的問題，在細(xì)胞治療和再生醫(yī)學(xué)的應(yīng)用中有巨大的潛力和前景［3］。目前國內(nèi)尚無臍帶血治療原發(fā)性SS合并周圍神經(jīng)病的研究。本研究對原發(fā)性SS合并周圍神經(jīng)病的患者進(jìn)行臍帶血干細(xì)胞治療，觀察對周圍神經(jīng)功能的修復(fù)效果。

1 資料與方法

1.1 病例資料選擇2010年1月～2014年6月在荊門市神經(jīng)內(nèi)科住院的30例SS合并周圍神經(jīng)病變的患者，均符合2002年國際風(fēng)濕學(xué)年會修訂的干燥綜合征診斷標(biāo)準(zhǔn)［4］。排除標(biāo)準(zhǔn)：其他原因引發(fā)的周圍神經(jīng)病變，如尿毒癥、脊椎病、重金屬中毒；正在或曾服用過神經(jīng)毒性藥物；合并糖尿病、甲狀腺功能亢進(jìn)癥、長期飲酒、腰椎病等。30例患者按入院時間完全隨機(jī)設(shè)計分為兩組各15例，對照組：男2例，女13例；年齡36～59（46.73±6.30）歲。干細(xì)胞組：男3例，女12例；年齡35～57（48.13±6.92）歲。兩組一般資料比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），患者均簽署治療知情同意書，所有患者的治療方案均經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)。

1.2 治療方法對照組采取常規(guī)治療模式，給予強(qiáng)的松1 mg/kg，1次/d；羥氯喹0.2 g，2次/d；肌肉注射鼠神經(jīng)生長因子30 μg，1次/d，連續(xù)治療2 w。干細(xì)胞組在對照組治療基礎(chǔ)之上，給予臍帶血干細(xì)胞治療，具體方法如下：

1.2.1 干細(xì)胞提取在我院婦產(chǎn)科專科醫(yī)生協(xié)助下，選擇無血液系統(tǒng)傳播疾病的健康產(chǎn)婦，簽署知情同意書，采集臍帶血，嚴(yán)格無菌操作。于產(chǎn)婦分娩后取臍帶血100 ml，采用臍帶血細(xì)胞分離試劑盒（濟(jì)南賽爾生物科技有限公司）分離臍帶血干細(xì)胞：（1）去除血細(xì)胞：將采集的臍帶血與A液混勻，然后再加入B液，徹底混勻，室溫靜置于25 min，可見紅細(xì)胞沉淀至底層；（2）使用高壓滅菌的移液管吸取上清后，2500 r/min離心5 min，棄上清，生理鹽水稀釋收集細(xì)胞；（3）向50 ml左右的干細(xì)胞稀釋液中加入25 ml C液，取中間細(xì)胞懸浮液于另一含有25 ml的C液，1800 r/min離心30 min后，吸取中間云霧狀細(xì)胞層，加入生理鹽水至50 ml后，2500 r/min離心5 min，棄上清；（4）生理鹽水稀釋混勻，1800 r/min離心3 min，反復(fù)5次后，取底層細(xì)胞懸液保，調(diào)節(jié)細(xì)胞濃度至1.0×107/ml，冰水浴保存。

1.2.2 干細(xì)胞移植患者簽署同意書后，完成術(shù)前檢查，將5 ml細(xì)胞懸液（細(xì)胞濃度為1.0×107/ml）用生理鹽水稀釋為50 ml靜脈滴注，用生理鹽水100 ml沖管，分別在入院后第2、5、8 d各滴注1次，共3次。

1.3 療效評估分別在患者入院后第1 d和治療3個月后，進(jìn)行下述檢查：（1）Fugl-Meyer運(yùn)動功能［12］評估：每項(xiàng)0～2分，其中0分：無任何運(yùn)動；1分：部分運(yùn)動；2分：正常運(yùn)動。評判標(biāo)準(zhǔn)：＜50分：嚴(yán)重運(yùn)動障礙；50～84分：中度運(yùn)動障礙；85～100分：輕度運(yùn)動障礙。（2）肌電圖檢查：采用肌電圖誘發(fā)定位儀（型號NDI-092，上海海神醫(yī)療電子儀器有限公司）檢查尺神經(jīng)、正中神經(jīng)、橈神經(jīng)、脛神經(jīng)、腓腸神經(jīng)、腓淺神經(jīng)神經(jīng)感覺支等的神經(jīng)傳導(dǎo)速度。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS16.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行處理，計量資料以x±s表示，組內(nèi)治療前后比較采用配對t檢驗(yàn)，組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)；計數(shù)資料用例和率表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 治療前后運(yùn)動功能評分及神經(jīng)傳導(dǎo)速度測定

治療前，兩組的FMA評分及四肢周圍神經(jīng)傳導(dǎo)速度差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。治療后，兩組的FMA評分及正中神經(jīng)、橈神經(jīng)及腓腸神經(jīng)傳導(dǎo)速度均較治療前顯著改善，而干細(xì)胞組改善幅度優(yōu)于對照組（P＜0.05，表1）。

2.2 免疫排斥反應(yīng)及不良反應(yīng)干細(xì)胞組未見嚴(yán)重不良反應(yīng)及免疫排斥現(xiàn)象。

3 討論

原發(fā)性SS伴周圍神經(jīng)病的發(fā)病機(jī)制目前還未完全明確，目前普遍認(rèn)為有以下兩種假說：（1）SS引起的血管炎與免疫復(fù)合物介導(dǎo)的免疫及淋巴細(xì)胞活化有關(guān)［5］；（2）細(xì)胞免疫或者體液免疫介導(dǎo)的抗神經(jīng)元免疫反應(yīng)［6］。腓腸神經(jīng)活檢表明，神經(jīng)外膜有大量炎性細(xì)胞浸潤，腓腸神經(jīng)有嚴(yán)重的脫髓鞘表現(xiàn)，據(jù)此推測T淋巴細(xì)胞浸潤后根神經(jīng)節(jié)是感覺神經(jīng)受損的主要原因，而且體液免疫也與發(fā)病有關(guān)［7］。總之，原發(fā)性SS神經(jīng)受損與免疫功能紊亂密不可分。由于臨床上缺乏有效緩解周圍神經(jīng)受損的方法，給患者及其家庭帶來嚴(yán)重的負(fù)擔(dān)。

治療原發(fā)性SS并發(fā)周圍神經(jīng)病的關(guān)鍵在于改善周圍神經(jīng)的血供，抑制神經(jīng)細(xì)胞周圍的免疫反應(yīng)，促進(jìn)神經(jīng)細(xì)胞的再生。大量研究表明，臍帶血間充質(zhì)干細(xì)胞進(jìn)入體內(nèi)后能被誘導(dǎo)分化為神經(jīng)細(xì)胞、膠質(zhì)細(xì)胞、血管細(xì)胞等，同時能分泌大量的細(xì)胞營養(yǎng)因子，如腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子、血管內(nèi)皮生長因子、堿性成纖維生長因子等，均可促進(jìn)神經(jīng)的再生［8］，還可分泌外源性基質(zhì)細(xì)胞衍生長因子等促進(jìn)血管再生［9］，干細(xì)胞還可以促進(jìn)Treg/Th17細(xì)胞亞群平衡誘導(dǎo)的免疫耐受參與調(diào)節(jié)免疫，能減輕炎性反應(yīng)，抑制異常免疫，幫助免疫系統(tǒng)恢復(fù)正常［10］。干細(xì)胞這些分化和分泌功能，能從SS并發(fā)周圍神經(jīng)病的發(fā)病機(jī)制上解決神經(jīng)受損問題。本研究表明，臍帶血干細(xì)胞治療SS并發(fā)周圍神經(jīng)病能明顯改善患者周圍神經(jīng)的傳導(dǎo)速度，從而改善患者肌力，提高患者的生活能力。

表1 兩組治療前后運(yùn)動功能評分及神經(jīng)傳導(dǎo)速度測定（n=15）

臍帶血干細(xì)胞是間充質(zhì)干細(xì)胞的一種，來源充足，其不能識別異體基因抗原標(biāo)準(zhǔn)簇，并且因缺少免疫激活相關(guān)信號通路而免疫耐受，移植物抗宿主反應(yīng)發(fā)生率低；同時不存在自體骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞因高齡患者其細(xì)胞治療和分化能力下降的問題，與骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞相比其更為原始，擴(kuò)增能力更強(qiáng)；從臍帶處取血，獲取方便，應(yīng)用不涉及倫理問題，在臨床干細(xì)胞治療中有非常廣闊的應(yīng)用前景。本研究中并未發(fā)現(xiàn)明顯的免疫排斥和不良反應(yīng)，表明通過靜脈途徑輸注臍帶血干細(xì)胞治療原發(fā)性SS合并周圍神經(jīng)病是安全可靠的。

本研究的不足之處在于，由于原發(fā)性SS合并周圍神經(jīng)病變的患者發(fā)病率較低，本研究無法納入足夠例數(shù)的樣本。同時缺乏長期的隨訪研究和深入的機(jī)制闡述，移植后遠(yuǎn)期的安全性和干細(xì)胞分化過程中的具體機(jī)制等，還需要下一步深入研究。

綜上所述，臍帶血干細(xì)胞治療是一種具有巨大潛力的治療神經(jīng)系統(tǒng)相關(guān)疾病的方法，其有助于恢復(fù)原發(fā)SS伴周圍神經(jīng)受損的神經(jīng)功能，為臨床治療決策提供了重要參考。

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Research on curative effects of umbilical cord blood stem cell transplantation on patients with primary Sjogren's syndrome associated with peripheral neuropathy

Zhang Min1，Nie Shuke2，Zhang Qing'an1，Zhang Yunjian21.Department of Neurology，the First People's Hospital Jingmen City，Jingmen，Hubei，448000，China；2.Department of Neurology，Xiehe Hospital of Tongji Medical College，Huazhong University of Science and Technology，Wuhan，Hubei，430022，China

ObjectiveTo investigate the clinical curative effects of the umbilical cord blood stem cell transplantation on patients with primary Sjogren's syndrome（SS）associated with peripheral neuropathy.MethodsThirty patients with primary SS associated with peripheral neuropathy treated between January 2010 and June 2014 were respectively selected and randomly divided into control group and stem cell group（15 cases in each group）.Both groups were given the conventional anti-rheumatic and neurotrophic treatment，while the stem cell group also received the intravenous injection with umbilical cord blood stem cells（5.0×107per time，once every three days，3 times in total）.Fugl-Meyer motor scale and limb EMG were used to evaluate the quadruped locomotion function and rehabilitation of nerve function of the two groups before and three months after the treamtent.ResultsThere was no significant difference in the FMA scores and nerve conduction velocity between the two groups（P＞0.05）.After the treatment，compared with the situation before the treamtent，the FMA scores and nerve conduction velocity of median nerve，radial nerve，and sural nerve in the two groups were significantly improved after the treatment，and the improvement extent in the stem cell group was superior to that in the control group（P＜0.05）.ConclusionThe umbilical cord blood stem cell transplantation can recover the nerve function damage in patients with primary SS associated with peripheral neuropathy.

umbilical cord blood；stem cell；primary Sjogren's syndrome；peripheral neuropathy；nerve function

R 749.24

A

1004-0188（2016）05-0472-03

10.3969/j.issn.1004-0188.2016.05.003

2015-06-04）

荊門市2012年市級研究與開發(fā)引導(dǎo)計劃項(xiàng)目（2012YD34）

448000湖北荊門，荊門市第一人民醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科（張敏，張清安）；華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬協(xié)和醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科（聶淑科，張允建）