ANS活性在乳鼠心房肌細胞KAch通道表達中的作用

田 銀 楊 龍 夏桂玲 鄧 娜

ANS活性在乳鼠心房肌細胞KAch通道表達中的作用

田 銀 楊 龍 夏桂玲 鄧 娜

目的 探討ANS活性在乳鼠心房肌細胞KAch通道表達中的作用。方法 在2015年9月～2016年9月，選60只實驗用大鼠，分為去甲腎上腺素組和對照組，去甲腎上腺素組利用去腎上腺素干預，對照組僅應用生理鹽水；使用實時熒光定量RT-PCR檢測二組大鼠乳鼠心房肌細胞的Kir 3．1、Kir 3．4 mRNA的轉錄水平。結果 ANS活性和乳鼠心房肌細胞KAch通道上Kir 3．1、Kir 3．4 mRNA表達水平之間存在著相關性。結論 ANS活性影響乳鼠心房肌細胞KAch通道上很多因子的表達水平。

ANS活性；乳鼠心房肌細胞；KAch通道 ；表達

自主神經系統（Autonomic Nervous System，ANS）在心臟分布密度極高，而心臟功能受ANS的調節［1］。目前ANS在心臟功能調節中的作用倍受關注。ANS活性變化與心臟疾病，如心力衰竭等疾病都已經證實與ANS活性有著非常重要的關系［2］。本研究主要是對ANS活性在乳鼠心房肌細胞KAch通道表達中的作用進行分析，選擇2015年9月～2016年3月45只實驗用大鼠乳鼠，對其進行實驗研究，具體情況如下所示：

1 一般材料和方法

1.1 一般方法

將清潔級SD（Sprague-Dawley）乳鼠稱重，ip10%水合氯醛（30 mg/kg）麻醉，麻醉成功后處死乳鼠分離心房肌細胞，進行細胞培養及干預。進行分組后，分別給藥。對照組進行生理鹽水0.1 ml/100 g的注射（22只）。去甲腎上腺素組給予去甲腎上腺素NE-氯化鈣混合液0.1 ml/100 g（23只）。

1.2 方法

使用實時熒光定量RT-PCR檢測二組大鼠乳鼠心房肌細胞的Kir 3.1、Kir 3.4 mRNA的轉錄水平。具體方法如下：

按不同組份配制PCR反應液，分別為5×PrimeSTAR? Buffer（Mg2+plus）10 μl，PCR Primer 1（10 μM）1 μl ，PCR Primer 2（10 μM）1 μl，dNTP Mixture（各2.5 mM）4 μl，RT反應液（cDNA溶液）2.0 μl PrimeSTAR? HS，DNA Polymerase（2.5 U/μl）0.5 μl，d H2O滅菌蒸餾水8.5 μl等。

然后進行Real Time PCR反應，PCR擴增程序，第一步是預變性，在95℃ 2 min，55℃ 1 min，72℃ 2 min中進行第一個循環，第二步是PCR反應，在95℃ 45 s，60℃ 30 s，70℃ 1 min中進行第二個循環，共40個。第三步取出4℃ 5 min后-20℃保存或電泳。

反應結束后確認Real Time PCR的擴增曲線和熔解曲線，制作標準曲線等。

1.3 統計學方法

采用SPSS 16.0統計軟件進行統計學分析。計數資料應用χ2檢驗，計量資料采用t檢驗，檢驗水準α=0.05，P＜0.05為差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組乳鼠心房肌細胞鉀離子通道上的因子表達

通過檢測發現，去甲腎上腺素組的Kir 3.1、Kir 3.4 mRNA表達水平均低于空白組，其中Kir 3.1、Kir 3.4、Cab 2、CaB 3 mRNA與空白組相比，差異有統計學意義（P＜0.05），見表1。

表1 兩組Kir 3.1、Kir 3.4 mRNA表達水平

2.2 兩者相關性分析

數據發現ANS活性和乳鼠心房肌細胞KAch通道上Kir3.1、Kir3.4mRNA表達水平之間存在著相關性。見圖1。

圖1 ANS活性和乳鼠心房肌細胞Kach通道相關性

3 討論

KAch是參與心房肌細胞動作電位復極末期主要鉀離子通道之一，促進K+外流，對動作電位末期的復極、靜息電位水平有重要影響［3-4］；針對發生心房重構的過程，刺激交感神經增加房顫誘發率，刺激迷走神經無增加；而在心房正常情況下，刺激迷走神經增加房顫誘發率，刺激交感神經無增加。經消融心外脂肪墊去神經能夠抑制犬心房快速起搏誘導的心房電重構、使房顫誘發更為困難［5-8］。本研究選擇選60只實驗用大鼠，分為去甲腎上腺素組和對照組，去甲腎上腺素組利用去腎上腺素干預，對照組僅應用生理鹽水；使用實時熒光定量RT-PCR檢測二組大鼠乳鼠心房肌細胞的Kir 3.1、Kir 3.4 mRNA的轉錄水平。本次研究結果顯示，ANS活性和乳鼠心房肌細胞KAch通道上Kir 3.1、Kir 3.4 mRNA表達水平之間存在著相關性。提示ANS活性影響乳鼠心房肌細胞KAch通道上很多因子的表達水平。以上臨床和基礎研究結果顯示交感神經和副交感神經在房顫的發生和維持機制中的作用復雜，而自主神經效應相關基質的改變作為心房重構的主要機制之一參與房顫的發生和維持。

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［3］ 蘇昕，徐健． 房顫中心房鉀離子通道重構機制及相關藥物的研究進展［J］． 中華臨床醫師雜志（電子版），2014，8（1）：145-149．

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［7］ 王琪瑤，唐惠芳． 心臟鉀離子通道基因多態性與房顫的研究進展［J］． 社區醫學雜志，2013，11（24）：64-66．

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Role of ANS Activity in the Expression of KAch Channel in Rat Atrial Myocytes

TIAN Yin YANG Long XIA Guiling DENG Na Department of Cardiology，Guizhou Provincial People's Hospital，Guiyang Guizhou 550000，China

Objective To investigate the effect of ANS activity on the expression of KAch channel in rat atrial myocytes． Methods From September 2015 to September 2016，60 experimental rats were divided into norepinephrine group and control group，norepinephrine group using norepinephrine intervention，the control group used normal saline，the transcription level detection of atrial myocytes of neonatal rats in the two groups of Kir 3．1 and Kir 3．4 mRNA using real-time fluorescence quantitative RT-PCR． Results There was a correlation between ANS activity and the expression level of Kir 3．1 and Kir 3．4 mRNA in the rat atrial myocytes of KAch． Conclusion ANS activity affects the expression levels of many factors in the KAch channel of rat atrial myocytes．

ANS activity，Neonatal rat atrial myocytes，KAch pathway，Expression

R-33

A

1674-9316（2016）19-0168-03

10．3969/j．issn．1674-9316．2016．19．113

貴州省人民醫院心血管內科，貴州 貴陽 550000 通訊作者：楊龍，E-mail：yanglong1001@163．com