427例乙型肝炎患者的血清標志物檢測結果分析

蔡麗娜 尚偉

摘 要： 乙肝嚴重危害著人類的生命與健康，尋找更為敏感準確的檢測指標對乙肝患者的診斷和預后具有十分重要的意義。本文抽取427例病毒性肝炎患者的血清標本，分別采用ELISA和RT-PCR兩種方法檢測對乙型肝炎病毒血清標志物HBV-M、HBV-DNA、Pre-S1進行檢測，結果顯示HBV-DNA（83.1%）、Pre-S1（73%）有較高的陽性檢出率，可以作為更敏感的血清標志物，與傳統的“乙肝兩對半”進行聯合應用，以更好的進行乙肝患者的早期診斷和預后治療。

關鍵詞：乙型肝炎 HBV-DNA Pre-S1 HBV-M RT-PCR

中圖分類號：R446.6 文獻標識碼：A 文章編號：1003-9082（2016）08-0245-01

乙型肝炎是我國常見的傳染病之一，嚴重危害著人類的生命與健康，乙型肝炎病毒是引起乙肝的主要原因，因此乙型肝炎病毒復制和活動情況的判斷對乙肝患者的診斷和預后具有十分重要的意義[1]。目前，臨床上對乙型肝炎病毒血清免疫學標志物（HBV-M）和乙型肝炎病毒前Sl抗原（Pre-S1）進行測定主要采用酶聯免疫吸附法（ELSIA），以此作為乙肝病毒復制和活動情況的判斷，但此種方法有其局限性，無法達到較高的陽性檢出率；隨著分子生物學和生物化學技術的不斷發展，采用實時熒光定量聚合酶鏈式反應（RT-PCR）技術檢測乙型肝炎病毒基因組（HBV-DNA）被越來越多的應用到醫學檢驗和臨床診斷乙型肝炎，其檢測結果可以達到更高的陽性率[2-3]。

本文抽取427例病毒性肝炎患者的血清標本，分別采用ELISA和RT-PCR兩種方法針對乙型肝炎病毒標志物水平進行檢測，主要包括HBV-DNA、Pre-S1和HBV-M，并對檢測結果進行分析比較，判斷更敏感的乙型肝炎病毒標志物，用于更好的指導臨床診斷及治療。

一、臨床資料

1.一般資料

427例病毒性肝炎患者，選自2014年1月至2015年7月來我院門診及感染科治療的病毒性肝炎患者，所有的患者均經臨床確診。其中，男性患者有279例，女性患者有148例，年齡24-66歲，平均年齡為37.8±1.1歲。上述患者都已經排除嚴重的全身性疾病如心、腎功能不全以及血液性疾病等情況。

2. 統計學處理

所有數據統計分析運用SPSS17.0統計軟件處理和數據分析，以α=0.05為檢驗水準，P<0.05為存在差異，并有統計學意義。

二、實驗方法

1.檢測方法及儀器設備

427例病毒性肝炎患者在空腹條件下抽取6mL的靜脈血，然后立即在室溫條件下以1500g離心15min分離出血清，將血清于適當的條件下保存，在規定時間內完成HBV-DNA、pre-S1和HBV-M三種指標的測定。采用ELISA檢測Pre-S1和HBV-M，其中HBv-M即乙肝五項，包括乙型肝炎表面抗原（HBsAg）、乙型肝炎表面抗體（抗-HBs）、乙型肝炎核心抗體（抗-HBc）、乙型肝炎e抗原（HBeAg）、乙型肝炎e抗體（抗-HBe），檢測試劑盒購自中山生物公司，操作步驟按照說明書進行。另外，采用實時熒光定量聚合酶鏈反應（RT-PCR）法檢測HBV-DNA，從血清中提取DNA加入反應管，放入擴增儀進行擴增，反應結束后由電腦自動分析結果；PCR擴增儀購自美國MJ公司，熒光定量HBV-DNA試劑盒購自上海科華生物技術有限公司，反應結束后電腦自動分析結果。

2.患者分組及HBV-DNA陽性指標界定

按照HBV-M的ELISA檢測結果將所有患者分成5組，Ⅰ組（“大三陽”組）為HBsAg、HBeAg、抗-HBc陽性，Ⅱ組（“小三陽”組）為HBsAg、抗-HBe、抗-HBc陽性，Ⅲ組為抗-HBs、抗HBe、抗-HBc陽性，Ⅳ組為HBsAg、抗-HBc陽性；Ⅴ組為抗-HBs陽性；未提及者即為陰性。HBV-DNA ≤500copy/mL為陰性，>500copy/mL為陽性，陽性檢測結果分為3個水平，分別是500-104、104-106、>106。

3.結果

3.1HBV血清標志物ELISA檢測結果

在427例乙型肝炎病毒標志物檢測結果中，HBV-M檢測分為五種感染模式，其結果分別為：Ⅰ組所占百分率為29%（124人），Ⅱ組占有率較高，可達42.4%（181人）；Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ組百分率分別為16.2%（69人）、10.5%（45人）和1.9%（8人），t檢驗比較組間差異，p<0.05，差異有統計學意義。Pre-S1的陽性檢出率為73%（312人），其中Ⅰ、Ⅱ組陽性檢出率較高，分別是89%、66.4%，與其余組比較，差異顯著，有統計學意義。

3.2HBV-DNA實時熒光定量PCR檢測結果

HBV-DNA的陽性率為83.1%（355人），其中大三陽組HBV-DNA陽性檢出率高達94%，而小三陽組HBV-DNA陽性檢出率為72.9%，與其余陽性檢出率較低三組比較，p<0.05，差異顯著，有統計學意義，而陽性檢出率較低的三組之間比較，差異不顯著，無統計學意義。

三、討論

我國是乙型肝炎病毒的高發流行區域，由于肝炎病毒的入侵，急慢性肝炎患者的肝細胞受到嚴重的損害。由于HBV感染早期的臨床表現不典型，大量乙型肝炎患者就診時已出現并發癥，這給乙型肝炎的臨床治療帶來了很大的困難，極大地影響患者預后。因此，選擇準確和具有特異性的檢測指標對臨床上提高乙型肝炎的排查率非常關鍵。乙型肝炎血清標志物HBV-M檢測是目前診斷乙肝最常用的指標，其結果顯示出乙肝病毒在人體內的復制情況及人體對乙肝病毒的免疫反應狀態以及相應的病程轉化過程。Pre-S1是HBV前S1基因表達的產物，與病毒的復制有著高度的一致性，現在也被用作乙型肝炎的血清標志物檢測而應用到臨床實踐中。HBV-DNA檢測常用于觀察 HBV的復制情況及乙肝病人抗病毒治療的效果和傳染性強弱[3]。本研究針對427例在我院治療的病毒性肝炎患者，分別采用ELISA方法檢測其乙肝血清標志物HBV-M、Pre-S1以及采用實時熒光定量PCR檢測患者血清中的HBV-DNA，通過比較不同組別的陽性檢出率，尋找較敏感準確的乙肝早期診斷指標。

研究結果顯示，Ⅰ組（大三陽組）124人（29%）中乙型肝炎病毒前Sl抗原89%為陽性，乙型肝炎病毒基因組陽性率為94%；Ⅱ組（小三陽組）181人（42.4%）中，乙型肝炎病毒前Sl抗原66.4%為陽性，乙型肝炎病毒基因組陽性率為72.9%；其余三組感染模式Pre-S1及HBV-DNA陽性檢出率均較低，組間并無顯著差異，無統計學意義。在臨床上應聯合應用HBV-M和Pre-S1、HBV-DNA等多種檢測手段來共同確診，以提高乙肝陽性檢出率，為更好的治療和控制慢性乙肝患者的病情，降低發生肝硬化甚至轉化為肝癌的風險提供了更有利的理論依據。

參考文獻

[1]鄒繼紅.86例乙型肝炎病毒標志物檢測結果的分析[J]中國醫藥指南，2014，12（19）：171-172.

[2]連楚楠，林若玲，林振，等.1128例HBV-DNA定量和乙肝血清學標志物定量結果之間的相關性研究[J].中國衛生檢驗，2013，23（2）：351-354.

[3]羅瀾.HBV-DNA檢測在乙型肝炎診斷中的價值分析[J].檢驗醫學與臨床2015，12（6）：827-829.