水飛薊素對腎間質纖維化大鼠AngⅡ、NF-κB表達的影響

王　鵬　韓子明（.信陽市中心醫院兒科信陽464000；.新鄉醫學院第一附屬醫院兒科新鄉45300）

水飛薊素對腎間質纖維化大鼠AngⅡ、NF-κB表達的影響

王鵬1韓子明2（1.信陽市中心醫院兒科信陽464000；2.新鄉醫學院第一附屬醫院兒科新鄉453100）

目的：探討水飛薊素對腎小管間質纖維化大鼠AngⅡ、NF-κB表達的影響。方法：隨機將13周齡SD大鼠56只分為假手術組8只、梗阻組24只和水飛薊素治療組24只。采用左側輸尿管結扎術造成腎間質纖維化模型，分為梗阻組和治療組，分別于實驗d7、d14、d21對梗阻組和治療組各處死大鼠8只，假手術組于d21處死全部大鼠，觀察術側腎組織病理變化并應用免疫組織化學方法檢測腎組織AngⅡ及NF-κBp65的表達。結果：腎小管間質評分顯示水飛薊素在各觀察時間點能顯著改善腎組織纖維化，降低腎間質評分；免疫組化提示水飛薊素顯著下調AngⅡ及NF-κBp65各時間點的表達。結論：水飛薊素可能是通過下調AngⅡ、NF-κBp65的表達從而起到對腎臟的保護作用。

水飛薊素 腎間質纖維化 AngⅡNF-κB

腎小管間質纖維化（TIF）是各種病因導致的腎臟疾病進展至終末期腎病的共同病理途徑及最終結局[1]。在腎間質纖維化的進程中，主要有炎性細胞浸潤（主要為巨噬細胞）、肌成纖維細胞增殖、腎小管細胞凋亡、腎小管上皮-間充質細胞轉分化以及細胞外基質（ECM）過度積聚等不斷呈現出來[2]。水飛薊素作為一種有效防治肝臟纖維化的傳統藥物，根據中醫異病同治理論，我們建立了大鼠腎間質纖維化模型，觀察水飛薊素抗腎纖維化作用及其對AngⅡ、NF-κB表達的影響。

1　材料與方法

1.1腎小管間質損傷評定：光鏡下（×200）采用雙盲法對每張HE染色的組織切片行腎小管間質損傷并評分：隨機選取10個不重疊視野，采用IDA-2000高清晰度數碼顯微圖像分析系統測定小管間質纖維化面積與同視野小管間質總面積的百分比，腎間質纖維化病理過程主要表現為①程度不同的炎癥細胞浸潤；②腎小管腫脹或萎縮；③間質纖維組織形成3個變量判定，每個變量為0～3分，每張組織切片腎間質損傷評分為0～9分。（0分為正常，病變無；1分為輕微損傷，病變范圍<25％；2分為中度損傷，25％≤病變范圍<50％；3分為重度損傷，病變范圍≥50％）。

1.2統計學方法：采用SPSS11.5軟件，組間差異采用單因素方差分析（one-way ANOVA），組間兩兩比較用LSD檢驗法，計量資料用均數±標準差（±s）表示，差異有統計學意義（P<0.05）。

2　結果

光鏡下假手術組大鼠腎組織無明顯變化，腎小球、近端小管、遠端小管的大小形態與正常腎組織一樣，間質無炎癥細胞浸潤、小管腫脹及纖維組織形成。梗阻組與治療組術后d7，可見少量巨噬細胞等炎性細胞浸潤、小管上皮細胞之間連接疏松、細胞變性、水腫，腎小管間質出現成纖維細胞增生聚集，腎小管管腔輕度擴張及部分呈現萎縮，腎間質面積稍增大。術后14d腎小管間質呈現大量巨噬細胞、淋巴細胞浸潤，成纖維細胞增生明顯，大量上皮細胞出現腫脹及空泡變性，部分腎小管因嚴重破壞而消失，部分腎小管及集合管擴張成囊腔狀，小管間質增寬明顯。術后21d，炎性細胞浸潤較前稍減少，小管上皮細胞變性進一步加重，幾乎全部小管上皮細胞出現萎縮、壞死脫落，殘余的腎小管也在被逐漸破壞，腎小管間質面積增寬顯著，皮髓質均變薄、失去功能。同一觀察點，腎間質損傷評分治療組明顯低于梗阻組（P＜0.05），梗阻組隨著造模時間延長，與假手術組相比，腎間質損傷評分逐漸加重（P＜0.01）；見表1。

表1　腎小管間質損傷評分各組之間比較（±s）

表1　腎小管間質損傷評分各組之間比較（±s）

★P＜0.01與假手術組比較；◆P＜0.05治療組與梗阻組比較；▲P＜0.05梗阻組與治療組后一時間點與前一時間點比較。

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3　討論

本試驗結果顯示NF-κBp65的表達與腎間質纖維化損傷評分呈正相關，梗阻組腎小管上皮細胞及間質細胞NF-κBp65表達無論染色強度還是染色面積均較假手術組增強，支持NF-κBp65參與腎纖維化的發生過程。NF-κBp65的表達治療組與梗阻組相比，每一時間點均減少，差異顯著，推測可能是水飛薊素對腎組織NF-κB產生和活性的干預作用有關。單側輸尿管梗阻大鼠用血管緊張素轉化酶抑制劑處理后，發現腎皮質中激活的NF-κB活性有所下降，這可能與AngII生成的減少抑制了的NF-κB產生與活性有關。由此可以推測出AngII與NF-κB在腎間質纖維化的演變進程中扮演著重要的角色，且具有協同作用，阻斷一種物質的生成或共同阻斷都能起到一定的抗纖維化作用。水飛薊素系指從菊科植物水飛薊的種子中提取的一類二氫黃酮醇與苯丙素衍生物縮合而成的黃酮木脂素類成分，主要含有水飛薊寧、水飛薊賓。據最新研究[3]，清除自由基、抗炎、免疫調節和抗肝纖維化及保護肝細胞膜、促進損傷肝細胞合成結構蛋白等是這類藥物的基本藥理活性。本實驗觀察到了水飛薊素對腎間質纖維化大鼠腎組織的保護作用，據此推測可能是通過抑制腎組織AngⅡ、NF-κB的表達進而延緩TIF進展，這可能是水飛薊素“多途徑、多靶點”抗腎間質纖維化的作用之一。

[1]TherrienFJ，AgharaziiM，LebelM，et al.Neutralization of tumor necrosis factor-alpha reduces renal fibrosis and hypertension in rats with renal failure[J].Am J Nephrol，2012，36（2）：151-161.

[2]López-GuisaJM，RassaAC，CaiX，et al.Vitronectin accumulates in the interstitium but minimally impacts fibrogenesis in experimental chronic kidney disease[J].Am J Physiol Renal Physiol，2011，300（5）：1244-1254.

[3]馬星海.水飛薊化學成分和藥理作用研究進展[J].亞太傳統醫藥，2015，11（19）：62-65.

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1672-8351（2016）11-0129-01