蓽撥中胡椒堿的提取方法研究△

薄彧坤　趙國君　楊　丹（.包頭醫學院藥學院包頭04040；.包頭市第四醫院藥劑科包頭04030）

蓽撥中胡椒堿的提取方法研究△

薄彧坤1趙國君2楊丹1（1.包頭醫學院藥學院包頭014040；2.包頭市第四醫院藥劑科包頭014030）

目的：確定蓽撥中胡椒堿的最佳提取方法。方法：采用正交試驗方法，尋找最佳的提取方案。結果：通過正交試驗設計數據可知，最佳實驗條件為：乙醇濃度80％、提取次數2次，提取時間40min。結論：該條件可以準確、有效地提取胡椒堿。

蓽撥 胡椒堿 正交試驗

1　前言

蓽撥出自《開寶本草》,是多年生草質藤本植物。干燥近成熟的果穗為蓽撥的藥用部分，果實含胡椒堿、蓽撥寧、揮發油、芝麻脂素等化學成分。

隨著人們收入水平的提高，高血壓、心臟病、心腦血管疾病的發病率上升。這些疾病都嚴重影響生活質量。近些年藥理研究發現蓽撥有抗氧化、抗炎殺菌、抗腫瘤、鎮靜、抗焦慮、抗胃潰瘍、降血脂、抗動脈粥樣硬化等等藥理作用。蓽撥中提取的有效成分胡椒堿，不僅能夠增加人體對維生素B及β—胡蘿卜素的吸收，還具有降壓、降血脂、抗動脈粥樣硬化等等藥理作用，而且價格相對低廉、經濟實用，具有很好的開發前景。本實驗以胡椒堿為指標，對蓽撥的提取方法進行優化，提高蓽撥中胡椒堿的提取率，對以胡椒堿為原料的藥品生產工藝有重要意義。

2　正文

2.1儀器、試劑、材料、試藥、樣品

儀器：高效液相色譜儀（島津LC-20AT）；超聲儀（天津市恒奧科技發展有限公司HS6150D）；過濾裝置；電子天平（上海精科天美科學儀器有限公司FA1204B）；紫外分光光度儀（TU1810北京普析通）

材料：燒杯；容量瓶；移液管；膠頭滴管

試劑：甲醇（色譜純）；純凈水；無水乙醇（分析純）

試藥：胡椒堿對照品（包頭市雅新生物科技有限公司批號：MUST-13080202）

樣品：蓽撥藥材（亳州市中藥飲片廠批號：20130310）。

2.2方法和結果

2.2.1溶液的制備

對照品溶液的制備：精密稱取胡椒堿對照品4mg，置5mL棕色量瓶中，加無水乙醇制成每1mL含0.8mg的溶液。

蓽撥藥材供試品液的制備：取蓽撥粉末約1g，加無水乙醇5mL，超聲處理20min，濾過，取濾液備用。

2.2.2最大吸收波長的選擇：取胡椒堿標準品4mg用無水乙醇定容在5mL容量瓶中，用移液管取0.5mL定容在50mL容量瓶中，紫外分光光度儀測得最大吸收波長為343nm。

2.2.3方法學考察

2.2.3.1標準曲線的繪制：精密吸取對照品溶液1.25、2.5、5.0、 7.5mL、10.0mL置10mL棕色容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，在343nm處測得峰面積，以對照品濃度C（μg/mL）為橫坐標X，以峰面積為縱坐標Y繪制標準曲線，求得的標準曲線的回歸方程為Y=107826X+14048，R2=0.9997（其中Y表示峰面積；X表示對照品濃度）。結果表明，胡椒堿在5.1～40.8μg/mL濃度范圍內呈良好線性關系。結果見圖1。

2.2.3.2精密度試驗：精密吸取對照品溶液2.5mL至5.0mL棕色容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，在上述條件下重復測定5次。在上述條件下測定峰面積帶入標準曲線方程求的含量的RSD為0.78％（n=5）。結果表明精密度較好。

2.2.3.3重復性試驗：精密稱取同一批樣品1.0g，按“供試品溶液配制”項下操作，配置6份供試品，測的峰面積分別帶入標準曲線方程求的含量的RSD為1.6％（n=6）。結果表明本研究方法重現性好。

2.2.3.4加樣回收率試驗：精密稱取已知含量的同一批樣品0.1g三份，分別精密加入一定量的胡椒堿標準品，按“供試品溶液配制”項下操作，配置3份供試品，在上述條件下測定峰面積，計算胡椒堿的平均回收率為100.7％，結果表明該方法回收率良好。

2.2.3.5穩定性試驗取同一份樣品溶液在室溫下放置，分別在0，1，2，4，8，16，32，72h測定，RSD為0.91％（n=6）。結果表明胡椒堿在72h內穩定性良好。

2.2.4正交試驗方法與結果

2.2.4.1影響因素的選擇：根據胡椒堿成分提取相關文獻并結合實際，選擇乙醇濃度、提取次數、提取時間為影響因素，見表2，采用SPSS13.0的Conjoint模塊功能進行正交試驗與數據處理。

表2　因素水平表

2.2.4.2正交試驗供試品的制備與測定：分別取蓽撥粉末約1g置于九個燒杯中，按表2設計的實驗條件分別測定胡椒堿含量，結果見表3。

表3　實驗設計表

2.2.4.3正交試驗數據處理

表4　數據結果表

表5　方差分析表

2.2.5結果：根據正交試驗所得的數據可知，最佳提取條件為：乙醇濃度80％、提取次數為2次、提取時間為40min。

2.3討論

2.3.1最大波長：經紫外分光光度法確認可知，胡椒堿最大吸收波長為343nm。

2.3.2影響因素：在正交試驗過程中，通過表4中的主效應方差分析，按表4的數據可見因素主次順序為B>A>C，因此對蓽撥中胡椒堿提取影響因素最大的是提取次數。

2.3.3溶劑選擇：在實驗過程中對三種提取溶液的優缺點進行了分析，甲醇雖然價格相對較低，但提取的效果不理想；乙酸乙酯價格較高、提取效果不理想、揮發性較強，而且長期吸入會對人的身體健康造成很大危害；乙醇的提取率很高，而且安全，但相對甲醇成本較高。通過權衡利弊，本實驗采用乙醇作為溶劑對胡椒堿進行提取，結果顯示的最佳提取工藝對小規模生產有借鑒意義。

[1]侯文潔，張衛剛，薛文嬌.胡椒中胡椒堿的提取工藝研究[J].中國調味品，2008（5）：56-58.

[2]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典[S].第一部，中國醫藥科技出版社，2010：219.

[3]劉笑，侯順超，顧林.胡椒堿不同提取方法的比較研究[J].中國釀造，2015，34（2）：47-50.

Study on extraction method of piperine in piperlongumine△

Bo Yukun1Zhao Guojun2Yang Dan1（1.School of medicine,Baotou Medical College,Baotou 014040；2.Department of pharmacy,Baotou Fourth Hospital,Baotou 014030）

Objective∶Determination of piperine in extraction method Methods∶According to the orthogonal test method,find the best extraction scheme.Results∶.From the orthogonal experimental design data,the best experimental conditions were∶ethanol concentration 80％,extraction times 2 times,extraction time was 40min.Conclusion∶the conditions can be accurate,effective alkali extraction of pepper.

Piper Ba Piperine Orthogonal test

R 284.1

B

1672-8351（2016）11-0120-02

△內蒙古自治區教育廳課題，編號：NJZY14263