不同碳源對番茄早疫病菌絲生長的影響

邊亞麗

內蒙古赤峰市林西縣農業技術推廣服務中心

不同碳源對番茄早疫病菌絲生長的影響

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本研究通過對番茄早疫病病害組織的分生孢子的鑒定，可知該病由半知菌亞門真菌茄鏈格孢菌侵染所致形成的番茄早疫病。在病菌的碳源試驗中，番茄早疫病菌對不同碳源的選擇性比較敏感，如果采用液體培養選用的碳源以葡萄糖，乳糖和甘油為好，對其它形態的碳源的利用效率則較低。

番茄早疫病 病原鑒定 碳源試驗

一、材料與方法

1．材料

（1）材料的來源。大棚采集的番茄的受害的枝葉、果實。

（2）培養基。馬鈴薯的固體和液體培養基。

（3）供試碳源。單糖類∶葡萄糖；雙糖類∶蔗糖、乳糖；多糖類∶可溶性淀粉；醇類∶甘油。

（4）儀器設備。LRHS-250B恒溫恒濕培養箱HZS-H水浴振蕩器；101-2型電熱鼓風干燥箱；280—輕便手提式壓力蒸汽消毒器。

2．試驗方法

（1）病原的鑒定及分離純化。從新鮮、具典型癥狀病斑上挑取病組織壓片鏡檢，觀察其分生孢子、分生孢子梗形狀、色澤并測量其大小。同時將病斑在25℃下保濕48h后作同樣檢查.參照邵力平、沈瑞祥、張素軒的《真菌分類學》有關專著，進行描述和鑒定。在番茄早疫病的新鮮病葉上，選擇典型的單個病斑，用剪刀從病斑邊緣（病健交界處）剪取邊長4～5毫米病組織。將病組織進行常規組織分離純化。待菌落直徑長至5～6厘米時，方可用。

（2）不同碳源對菌絲的影響。

固體培養：以PA做基本培養基CK，各種碳源均以20克/升量分別加入，配成各種碳源培養基。病菌在PDA平板上（直徑9厘米）培養，3天后待菌落直徑長至5～6厘米，從邊緣打取（直徑0.6厘米）的菌片，分別移植于各種碳源培養基平板中央。每處理重復3次。每個過程都要在無菌實驗室操作，恒溫24℃培養。每天記錄菌落擴展情況，每隔1天測量菌落徑，調查菌落顏色。7天繪制菌絲生長速度曲線，進行比較。

液體培養：以馬鈴薯液作為基本培養基，分別加入20克/升的上述各種碳源，配制成不同碳源培養液。應用試管盛裝培養液培養，各培養基均加10毫升，滅菌待冷卻后在無菌超凈工作臺上分別移植1個已培養好的菌片（直徑0.6厘米）放入試管中，24℃下恒溫震蕩培養，每處理重復3次。80轉/分鐘震蕩培養7天后，過濾烘干測量菌絲干重。

二、結果與分析

1．病原的鑒定及分離純化

通過對番茄病害組織的分生孢子的鑒定，參照《真菌分類學》等著作，可知該病由半知菌亞門真菌茄鏈格孢菌侵染所致形成的番茄早疫病。

在馬鈴薯培養基上培養的番茄早疫病病菌，觀察其菌落形態和特征，從菌落顏色，菌落的生長速度等經過7天的培養均表現出明顯的差異性。

圖1 不同碳源培養基固體培養8天后所形成的病菌形態特征圖

圖2 不同碳源對病菌生長影響

2.不同碳源對菌絲的影響

（1）固體培養。由表1可以看出，病菌經過在不同碳源培養基7天的培養，可知對單糖中的葡萄糖利用較好。對二糖中的蔗糖也都能很好的利用，而對二糖中的乳糖利用相對較差。在醇類中，對甘油的利用也較好。但對多糖中的可溶性淀粉利用較為不好。從圖1可以看出，菌落的顏色在病菌較易擴展、菌落直徑較大時，菌落顏色較深；反之，則菌落顏色較淺。

表1 不同固體碳源培養基對菌絲生長的影響

從圖2生長趨勢曲線來看，在蔗糖、乳糖和可溶性淀粉的培養基上病菌前6天基本為勻速生長，而從第6天到第8天生長速度明顯下降，尤其是可溶性淀粉的培養基幾乎不在生長。在葡萄糖的培養基上前4天生長速度較快，第4天到第6天相對緩慢，后來較為平緩。在甘油上的培養基前6天呈加速上升趨勢，但第6天到第8天生長速度相對減慢。從整體來看，病菌對葡萄糖和蔗糖的利用最好，對可溶性淀粉的利用最差，菌落擴展最慢。

（2）液體培養。由表2可以看出，病菌對碳源的利用，以乳糖和葡萄糖為好，其次為甘油，對蔗糖的利用也較好；病菌對其它可溶性淀粉的利用則很差，菌絲體生長較慢，干重很低。在馬鈴薯汁中加入醇類碳源，病菌不但不能利用該碳源，而且限制了病菌的生長，其機理還有待于進一步研究。

表2 病菌在不同碳源培養液中的菌絲生長量

三、結論與討論

在病菌的碳源試驗中，番茄早疫病菌對各種碳源營養具有明顯的選擇作用。在固體培養中，病菌對碳源的利用以葡萄糖和蔗糖的培養基長勢為最好，其次為乳糖和甘油，可溶性淀粉的培養基長勢不如對照。在液體培養中，病菌對碳源的利用以乳糖為最好，其次為葡萄糖的培養基培養的病菌，而病菌對蔗糖和甘油的利用比其它碳源則利差，菌絲體長勢較慢，干重較低。

在試驗中，有一個值得注意的現象是病菌的直線生長速度同菌絲體干重生長速度并無正相關。Harry. Hudson1986指出，用線性生長測定菌落生長速度具有很大的局限性，在低營養的基質中，菌落直線生長可能很快，但由于菌落稀疏而實際生長量卻很小，相反在高營養基質中生長的菌落，其直線生長速率可能不快，但實際生長量卻較大。在這種情況下，我們認為應采用液體培養為主。本研究表明番茄早疫病菌對不同碳源的選擇性比較敏感，如果采用液體培養選用的碳源以葡萄糖，乳糖和甘油為好，對其它形態的碳源的利用效率則較低。本研究中病菌菌絲直線生長速度和干重生長速度所表現出的顯著差異，以及在固態培養中加入可溶性淀粉，菌絲生長速度還不及對照的現象，值得進一步研究探討。