湖南永州地區家養犬弓形蟲病的血清學調查

廖光宇　劉成　肖建華　陳名?！±铌栍瘛￡惷h

（1.湖南永州市藍山縣畜牧水產局動物衛生監督所425800；2.湖南永州職業技術學院生物科學技術系劉成425000；3.湖南永州市藍山縣楠市鎮動物防疫站425800）

湖南永州地區家養犬弓形蟲病的血清學調查

廖光宇1劉成2肖建華3陳名海1李陽玉1陳名鋒1

（1.湖南永州市藍山縣畜牧水產局動物衛生監督所425800；2.湖南永州職業技術學院生物科學技術系劉成425000；3.湖南永州市藍山縣楠市鎮動物防疫站425800）

為初步調查湖南永州地區家養犬弓形蟲感染情況，筆者于2015年5月至2016年4月用酶聯免疫吸附試驗（ELISA）方法檢測采集的家養犬血清樣本998份，其中，家養犬血清樣本896份，流浪犬血清樣本102份。檢測發現，家養犬弓形蟲IgG抗體陽性率23.6%，流浪犬弓形蟲IgG抗體陽性率28.43%，平均感染率為24.15%。家養犬弓形蟲血清抗體陽性率不同季節間差異顯著（P＜0.05），夏季最高，為31.29%；不同性別家養犬弓形蟲血清抗體陽性率無顯著差異（P＞0.05）。隨著年齡增長，家養犬弓形蟲抗體陽性率均有明顯增長，其中大于5歲的家養犬弓形蟲血清抗體陽性率達到了26.16%。本次檢測發現，湖南永州地區犬感染弓形蟲較普遍，需要進一步提高自身對犬弓形蟲病的認識并做好日常防護工作。

弓形蟲；血清；檢測；犬

弓形蟲病是由剛地弓形蟲引起的重要人畜共患寄生蟲病，以發熱、流產、死胎、畸形胎為主要特征，重癥者可引起死亡。此外，弓形蟲感染與艾滋?。ˋIDS）有密切的關系。剛地弓形蟲是一種呈世界范圍分布的能夠感染多種動物的寄生性原蟲，在我國，1978年崔君兆首次在國內進行流行病學研究，采用統一的正向間接血凝試驗（IHA）方法檢測全國81963人血清平均感染率為5.17%。與人類關系密切的犬弓形蟲感染率也非常普遍，據統計，1985～2006年期間，我國犬弓形蟲感染率在0.66%～62.3%之間不等。隨著寵物品種和數量的急劇增加，人類與動物接觸的日益頻繁，通過動物將寵物源人畜共患病傳播給人類的風險日益加大，給人類健康和正常生活帶來了威脅。因此，無論是就動物本身的健康而言，還是考慮到公眾健康，充分了解犬的弓形蟲發病及感染情況都具有重要現實意義。為此，筆者于2015年5月至2016年4月運用酶聯免疫吸附試驗（ELISA）方法（以下簡稱ELISA法）對湖南永州地區896只家養犬的弓形蟲感染情況進行了調查。

1　材料與方法

1.1.1主要儀器及器材酶標儀（MULTISKAN MK3），購自Thermo公司；臺式高速冷凍離心機（5810R），購自德國Eppendorf公司。洗滌器，50ul、100ul精確微量移液器，一次性移液器吸頭，稀釋樣品的U型96孔稀釋板等。

1.1.2主要試劑犬弓形蟲抗體檢測試劑盒，購自廣州健侖生物科技有限公司，批號為20141208。試劑盒中包含抗原預包被微孔板條96T、酶結合物（1號液）、洗滌液（2號液）、底物（3號液）、顯色液（4號液）、樣本稀釋液（5號液）、終止液（6號液）、陽性對照血清和陰性對照血清。

1.1.3待檢血清采集犬998（1.5ml～2ml/只）只靜脈血，3000r/min離心5min，分離血清，置-20℃保存待檢。

1.2.1樣本稀釋用樣本稀釋液（5號液）將待檢血清按1：100稀釋。陰、陽對照血清不用稀釋，直接加樣。

1.2.2加樣反應樣本檢測孔每孔分別加已稀釋待檢血清100ul。同時設陰性、陽性及空白對照各1孔，取陰性、陽性對照各100ul分別加入反應孔內，空白對照孔僅加入100ul樣本稀釋液（5號液）。37℃避光反應30min后甩去孔內液體，每孔加洗滌液（2號液）1滴，立即用蒸餾水注滿，靜置30s后甩去，再直接用蒸餾水洗滌四次，每次均需靜置30s，最后一次甩去，拍干。

1.2.3加酶反應除空白對照孔外其余每孔加酶結合物（1號液）2滴，37℃避光反應30min后甩去孔內液體，按1.2.2洗滌步驟進行，拍干。

1.2.4顯色反應每孔加底物（3號液）和顯色劑（4號液）各1滴，混勻，37℃下避光顯色10min，然后加終止液（6號液）1滴，混勻，終止反應（加終止液后藍色會變為黃色）。

1.3結果判定及統計分析陰性對照接近無色，陽性對照呈明顯黃色，表示實驗有效。待檢孔接近無色表示該標本為陰性，待檢孔呈明顯黃色表示該標本為陽性。以空白對照調零，用酶標儀（MULTISKAN MK3）于450nm（620nm作參比波長）測定OD450nm值。待檢孔OD450nm值大于陰性對照2.1倍者為陽性。當陰性對照OD450nm值低于0.07時按0.07計算。應用SPSS統計分析軟件進行統計分析。

2　結果

2015年5月至2016年4月期間，共采集到998份血清樣本，其中，家養犬血清樣本896份，流浪犬102份，采用ELISA法對犬血清進行了弓形蟲IgG抗體的檢測，檢測結果見表2—1。結果顯示，家養犬弓形蟲IgG抗體陽性樣本212份，陽性率為24.2%，流浪犬弓形蟲IgG抗體陽性樣本29份陽性率為28.43%，平均感染率為24.15%。

表2—1　永州地區犬弓形蟲IgG抗體檢測結果

2.2.1不同季節家養犬弓形蟲血清抗體陽性率在896份家養犬血清中，不同季節采集的家養犬血清弓形蟲抗體陽性率變化較大，檢測結果見表2—2。結果顯示，夏季弓形蟲陽性率最高為31.29%，與陽性率最低的春季15.83%。用配對資料卡方檢驗分析，二者差異顯著（P＜0.05）。

2.2.2不同性別家養犬弓形蟲血清抗體陽性率對已知性別的670只家養犬和未知性別的226只家養犬檢測結果見表2—3。結果顯示，雌性犬血清弓形蟲抗體陽性率為25.82%，雄性犬血清弓形蟲抗體陽性率為20.53%。用配對資料卡方檢驗分析，二者差異不顯著（P＞0.05）。

表2—2　家養犬血清弓形蟲IgG抗體檢測結果季節分布

表2—3　不同性別家養犬弓形蟲血清抗體陽性率

2.2.3不同年齡段家養犬弓形蟲血清抗體陽性率對已知年齡的1474只家養犬的檢測結果見表2—4。結果顯示，隨著犬年齡增長，弓形蟲血清抗體陽性率呈逐漸上升趨勢。8月齡以內犬弓形蟲血清抗體陽性率僅為17.5%，而大于5歲的犬弓形蟲血清抗體陽性率達到了26.16%。用配對資料卡方檢驗分析，兩個年齡段之間，犬弓形蟲血清抗體陽性率差異顯著（P＜0.05）。

表2—4　各個年齡階段家養犬弓形蟲血清抗體陽檢測結果

3　小結與討論

3.1目前弓形蟲病免疫預防仍處于實驗研究階段，尚無安全有效、保護力強、持續時間長和易于保存的弓形蟲疫苗使用，因此，家養犬的抗體陽性率可以反映出永州地區弓形蟲正在感染或曾經感染的狀況，具有重要的流行病學意義。本次檢測發現，湖南永州地區犬感染弓形蟲較普遍，平均感染率為24.15%，這一調查結果應引起寵物主人的高度重視，需要進一步提高自身對弓形蟲病的認識并做好日常防護工作。

3.2不同生活習慣犬的弓形蟲血清抗體陽性率不同，流浪犬陽性率最高，為28.43%，家養犬為23.6%，可能與犬的飲食有關，流浪犬接觸感染源的機會較多，而作為寵物的家養犬，有些是長期生活在室內，飼喂商品犬糧，不接觸生肉類，所以感染源的機會較低。另外，家養犬一般都有外出遛的習慣，也可能增加了家養犬感染弓形蟲的機會［5］。犬弓形蟲病分布于世界各地，感染范圍很大，可呈先天性感染或獲得性感染。許多學者認為經腸道感染可能是犬天然弓形蟲病的主要感染形成。因此，犬主人在攜犬外出時，應用引導繩牽引，避免犬在外撿食，同時在家飼喂熟食或成品犬糧，避免犬感染弓形蟲病。

3.2檢測發現，家養犬弓形蟲血清抗體陽性率不同季節間差異顯著（P＜0.05），夏季最高，為31.29%；不同性別家養犬弓形蟲血清抗體陽性率無顯著差異（P＞0.05）；隨著年齡增長，家養犬弓形蟲抗體陽性率均有明顯增長，其中大于5歲的家養犬弓形蟲血清抗體陽性率達到了26.16%。建議家養犬外出遛時應避開炎熱高溫時節。

（略）