子宮內膜癌組織中Smac、Bcl—2、Survivin 和 Bax表達的臨床意義

馮海利+侯亮

[摘要] 目的 通過免疫組織化學SP法檢測子宮內膜癌細胞中Smac、Bcl-2、Survivin 和 Bax的表達情況，尋找子宮內膜癌新的有效的檢測分子，為子宮內膜癌的早期發現和診斷、監測復發和轉移、判斷療效和預后提供指標。 方法 選取2011年2月～2013年9月來我院接受手術治療的子宮內膜癌患者80例，同時選取52例正常子宮內膜組織和39例子宮內膜不典型增生組織。 結果 Smac、Bcl-2、Survivin和Bax在三種組織中陽性表達差異顯著（P<0.05）。Smac與Bcl-2、Survivin在子宮內膜癌組織中陽性表達均呈負相關（rBcl-2=-0.398、rSurvivin=-0.335，P<0.05），而與Bax呈正相關（rBax=0.458，P<0.05）；而Bcl-2與Survivin陽性表達呈正相關（rSurvivin=0.581，P<0.05），而與Bax呈負相關（rBax=-0.477，P<0.05）；Bax與Survivin陽性表達呈負相關（r=-0.511，P<0.05）。 結論 對疑似子宮內膜癌患者進行Smac、Bcl-2、Survivin 和 Bax表達的檢測以進行進一步確診，提高臨床確診率，為今后的臨床治療方案提供新的治療靶點和思路。

[關鍵詞] 子宮內膜癌； 第二線粒體源性激活半胱天冬酶； B淋巴細胞瘤-2基因； 凋亡抑制基因； 促凋亡因子

[中圖分類號] R737.33 [文獻標識碼] A [文章編號] 1673-9701（2016）23-0001-03

[Abstract] Objective To explore the expression of Smac， Bcl-2， Survivin in endometrial cancer cells by immunohistochemical SP method in patients with endometrial cancer， and to provide new indicators for early detection and diagnosis， monitoring of recurrence and metastasis， and determination of efficacy and prognosis of endometrial cancer. Methods 80 patients with endometrial cancer surgically treated in our hospital from February 2011 to September 2013 were selected， and another 52 cases of normal endometrial tissue， and 39 cases of atypical endometrial hyperplasia were also selected. Results There were significant differences in expression of Smac， Bcl-2， Survivin， and Bax in these three kinds of tissues（P<0.05）. The positive expression of Smac had a negative relation with Bcl-2 and Survivin in endometrial cancer tissue（rBcl-2= -0.398， rSurvivin=-0.335， P<0.05）， and had a positive relation with Bax （rBax=0.458， P<0.05）. The positive expression of Bcl-2 had a positive relation with Survivin （rSurvivin=0.581， P<0.05）， and had a negative relation with Bax（rBax=-0.477， P<0.05）. The positive expression of Bax had a negative relation with Survivin（r=-0.511， P<0.05）. Conclusion Detection of Smac， Bcl-2， Survivin， and Bax expression in patients suspected with endometrial cancer can further conform the diagnosis， improve the rate of definite diagnosis， and provide new treatment target and approach for future therapy.

[Key words] Endometrial cancer； Smac； Bcl-2； Survivin； Bax

近年來，子宮內膜癌的發病率和死亡率均呈上升趨勢，且有年輕化的趨向。在我國，子宮內膜癌的發病率僅次于宮頸癌，在婦科惡性腫瘤中居第2位[1-3]。近年來研究發現[4-6]，子宮內膜癌的發生、發展可能與腫瘤細胞的凋亡受阻關系密切，第二線粒體源性激活半胱天冬酶（Second Mitochondria-derived Activator of Caspases，Smac）、B淋巴細胞瘤-2基因（B-cell lymphoma-2，Bcl-2）、凋亡抑制基因（Survivin）和促凋亡因子（Bax）可能通過不同機制參與了腫瘤細胞的凋亡過程。因此，本文旨在通過對子宮內膜癌患者手術后切除標本行免疫組織化學SP法檢測以確定子宮內膜癌腫瘤細胞中Smac、Bcl-2、Survivin 和 Bax表達的臨床價值，進一步分析它們之間的相互關系及其與臨床病理指標之間的關系，以尋找子宮內膜癌新的有效的檢測分子，為子宮內膜癌的早期發現和診斷、監測復發和轉移、判斷療效和預后提供指標。

1 資料與方法

1.1一般資料

選取2011年2月～2013年9月來我院接受手術治療的子宮內膜癌患者80例，年齡29～68歲，平均（52.5±10.2）歲，病程（1.3±0.2）年；同時選取52例接受病理活檢的健康人正常子宮內膜組織，年齡27～69歲，平均（53.8±11.0）歲；另選取39例由于不正常陰道出血而入院的子宮內膜不典型增生組織，年齡27～72歲，平均（52.7±10.9）歲，病程（1.2±0.3）年。所有入選研究對象依據為活體病理檢查確認后進行分組，排除其他系統重大疾病者及類似病癥者、精神疾病者。三組入選研究對象在年齡、病程及相應基線資料方面差異無統計學意義（P>0.05）。

1.2方法

采用SP免疫組化染色，整個過程按試劑盒說明進行操作。現用現配3%透明質酸（Hyaluronan，HA），密封20 min，蒸餾水洗2次，每次5 min；再用磷酸緩沖鹽溶液（Phosphate Buffer Saline，PBS）洗滌2次，持續5 min；山羊血清密封1 h；取出切片，繼續用PBS緩沖液進行3次洗滌，共16 min；滴加即用型快捷免疫組化即用型快捷免疫組化（MaxVision）試劑，規格：18 mL（360片），濕盒中室溫靜置15 min；PBS洗滌3次，每次5 min；將其置于DAB中維持2～8 min，實時鏡下觀察。將石蠟融化后并除去雜質，并在石蠟中以1∶1加入鄰二甲苯制成軟蠟A和軟蠟B，同時制備硬蠟A和硬蠟B（含有軟蠟B），透明好的組織分別在軟蠟A和軟蠟B中浸泡30～40 min，在硬蠟A和硬蠟B中浸泡30 min。對待測樣品用石蠟包埋，將樣品與石蠟結合待凝固后應用石蠟切片機將待測組織切成4 μm厚度芯片，將組織芯片置于65℃恒溫中5 h待測。

1.3觀察指標

采用免疫組織化學技術（SP法）檢測80例子宮內膜癌組織、39例子宮內膜不典型增生組織和52例正常子宮內膜組織中Smac、Bcl-2、Survivin 和 Bax的表達情況。Smac、Bcl-2、Survivin和Bax的陽性染色標準評定采用半定量法。

1.4統計學方法

采用SPSS 21.0統計學軟件進行統計分析，其中相關性分析采用Spearman相關分析，計數資料采用χ2檢驗，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 Smac、Bcl-2、Survivin 和 Bax在不同組織中的陽性表達

經統計學分析可知，Smac、Bcl-2、Survivin和Bax在不同組織中的陽性表達差異顯著（P<0.05）。其中Smac和Bax在正常子宮組織中陽性表達率最高，Bcl-2以及Survivin在子宮內膜癌組織中陽性表達率最高。

2.2 Smac、Bcl-2、Survivin 和 Bax在子宮內膜癌組織中陽性表達的關聯性分析

經統計學分析可知，Smac與Bcl-2、Survivin在子宮內膜癌組織中陽性表達均呈負相關（rBcl-2=-0.398、rSurvivin=-0.335，P<0.05），而與Bax呈正相關（rBax=0.458，P<0.05）；而Bcl-2與Survivin在子宮內膜癌組織中陽性表達呈正相關（rSurvivin=0.581，P<0.05），而與Bax呈負相關（rBax=-0.477，P<0.05）；Bax與Survivin在子宮內膜癌組織中陽性表達呈負相關（r=-0.511，P<0.05）。

3 討論

近年來研究發現[7-16]，子宮內膜癌的發生、發展可能與腫瘤細胞的凋亡受阻關系密切，隨著分子生物學的不斷發展，從細胞凋亡的角度深入探討子宮內膜癌的發生發展已備受人們的關注。其中Smac、Bcl-2、Survivin 和 Bax可能通過不同的機制參與了腫瘤細胞的凋亡過程。

Smac是存在于線粒體內的能夠調節細胞凋亡的一類蛋白質，本文中Smac在子宮內膜癌組織中陽性表達率低于子宮內膜不典型增生組織中的陽性表達，說明Smac在腫瘤組織中表達較低，可能是由于其他相關因子對Smac產生的拮抗作用，從而抑制Smac產生并發揮作用，導致腫瘤細胞無法正常凋亡實現無限增殖，Bax與Smac呈正相關，說明二者屬于同一類因子。Smac高表達可以使讓腫瘤細胞更敏感地接受凋亡刺激，促進腫瘤細胞的凋亡，提高腫瘤細胞對化療藥物的敏感程度，而Smac的低表達則有可能阻止腫瘤細胞的凋亡。Smac通過逆轉凋亡抑制蛋白（IAPs），特別是X連鎖凋亡抑制蛋白（XIAP）而實現促進凋亡，其與IAPs結合，使其丟失能夠抑制半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶的能力，從而促進凋亡。許多因素誘導腫瘤細胞凋亡的同時伴有Bax表達升高，說明Bax高表達與腫瘤細胞凋亡密切相關，轉染Bax到腫瘤細胞中能促進許多腫瘤細胞的凋亡。Bax與Bcl-2屬于同源性蛋白，Bax能夠通過過表達而抑制Bcl-2的作用，促進細胞凋亡。相反Bcl-2能夠抵抗凋亡，其能夠增強DNA的抵抗損傷能力，抑制DNA損傷分子傳感器（p53），從而抑制凋亡。研究表明[17-19]，Bcl-2在乳腺癌、結腸癌、肝癌中的表達情況，發現Bcl-2的水平增高，Bcl-2在神經母細胞瘤、鼻咽癌、前列腺癌、膀胱癌、肺癌、胃癌等許多腫瘤中的表達也增強，提示Bcl-2在腫瘤細胞中的高表達可能抑制細胞凋亡而延長細胞存活時間。本次研究中，子宮內膜癌組織中Bcl-2陽性表達水平最高，且與Smac呈負相關，且相關性較強，說明Bcl-2可能是抑制Smac表達的因素之一。有研究表明[20]，Survivin幾乎在所有被檢測過的腫瘤組織中，如胃癌、結腸癌、胰腺癌、肺癌、前列腺癌等均有不同程度的表達，陽性率為30%～100%，且Survivin的表達與多種腫瘤的生物學特性和（或）疾病分期有關。本研究發現，Survivin在子宮內膜癌組織中也呈高表達，且與Bcl-2呈正相關，與Smac呈負相關，因此筆者推測，Survivin也可能是抑制Smac表達的一類因子。

綜上所述，對疑似子宮內膜癌患者進行Smac、Bcl-2、Survivin 和 Bax表達的檢測以進行進一步確診，從而提高臨床確診率，為今后的臨床治療方案提供新的治療靶點和思路。

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（收稿日期：2016-04-21）