次黃嘌呤對營養(yǎng)性肥胖小鼠的抗肥胖作用

顧效瑜，李 哲，鄭毅男，劉玉敏*，王全凱，*

（1.吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)中藥材學(xué)院，吉林 長春 130118；2.長春科技學(xué)院，吉林 長春 130118）

次黃嘌呤對營養(yǎng)性肥胖小鼠的抗肥胖作用

顧效瑜1，李 哲1，鄭毅男1，劉玉敏2，*，王全凱1，*

（1.吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)中藥材學(xué)院，吉林 長春 130118；2.長春科技學(xué)院，吉林 長春 130118）

目的：研究次黃嘌呤（hypoxanthine，Hx）對營養(yǎng)性肥胖小鼠抗肥胖作用的影響。方法：將ICR（Institute of Cancer Research）小鼠隨機(jī)分成6 組：空白組、模型組、陽性對照組（左旋肉堿100 mg/kg）和Hx干預(yù)組（30、60、90 mg/kg），采用高脂飼料飼喂建立肥胖小鼠模型?？诜o藥4 周后，處死小鼠，收集血液，離心。檢測各組小鼠血清甘油三酯、總膽固醇、瘦素和脂聯(lián)素的含量。制作脂肪組織石蠟切片，經(jīng)蘇木精-伊紅（HE）染色顏色觀察脂肪細(xì)胞的變化。取附睪脂肪經(jīng)實(shí)時熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（real-time quantitative polymerase chain reaction，qRT-PCR），觀察小鼠體內(nèi)肥胖基因（瘦素和脂聯(lián)素基因）mRNA表達(dá)變化。結(jié)果：Hx干預(yù)組小鼠的脂肪質(zhì)量顯著低于模型組（P＜0.05）；總膽固醇含量水平均顯著低于模型組（P＜0.05、P＜0.01）；Hx中、低劑量組和對照組的瘦素和脂聯(lián)素mRNA表達(dá)量顯著低于模型組（P＜0.05）。結(jié)論：Hx中、低劑量組有較好的抗肥胖作用，其中低劑量組的抗肥胖效果最好。小鼠脂肪細(xì)胞切片中脂肪組織形態(tài)學(xué)為小鼠肥胖造模提供進(jìn)一步的研究依據(jù)。

肥胖；次黃嘌呤；切片；實(shí)時熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（qRT-PCR）

顧效瑜， 李哲， 鄭毅男， 等. 次黃嘌呤對營養(yǎng)性肥胖小鼠的抗肥胖作用［J］. 食品科學(xué)， 2016， 37（15）: 253-258.

GU Xiaoyu， LI Zhe， ZHENG Yinan， et al. Anti-obesity effect of hypoxanthine on nutritionally obese mice［J］. Food Science， 2016，37（15）: 253-258. （in Chinese with English abstract） DOI:10.7506/spkx1002-6630-201615043. http://www.spkx.net.cn

隨著生活方式及膳食結(jié)構(gòu)的改變，肥胖已成為一個主要的健康問題。有研究顯示，肥胖可以改變藥物的藥物代謝動力學(xué)性質(zhì)［1］，成為引發(fā)心血管功能障礙［2-4］、II型糖尿病、心臟代謝紊亂［5］、血栓栓塞［6］和健康性營養(yǎng)代謝綜合征［7］相關(guān)的因素。嘌呤類物質(zhì)是新陳代謝過程中的一種代謝產(chǎn)物，在能量供應(yīng)和代謝調(diào)節(jié)等方面有著非常重要的作用。次黃嘌呤（hypoxanthine，Hx）是核苷的代謝產(chǎn)物，是一種重要的生物堿嘌呤，參與調(diào)節(jié)人體的一些生理機(jī)能［8-9］。本實(shí)驗(yàn)主要研究Hx對由高脂飲食引起肥胖的小鼠的減肥作用，為進(jìn)一步研究其抗肥胖的分子機(jī)制及預(yù)防和治療由肥胖引起的代謝綜合征提供理論依據(jù)。

1　材料與方法

1.1動物、材料與試劑

ICR（美國癌癥研究所，Institute of Cancer Research）種雄性小鼠無特定病原體（specific pathogen free，SPF）級，體質(zhì)量18～22 g，購自于長春市億斯實(shí)驗(yàn)動物技術(shù)有限責(zé)任公司，許可證號SCXK（吉）-2011-0004。

基礎(chǔ)飼料和高脂飼料由吉林白求恩醫(yī)學(xué)院動物實(shí)驗(yàn)中心提供，配方見表1。

表1　小鼠飼料組分Table 1 Compositions of animal feeds

Hx（純度≥99.0%） 楷洋生物科技有限公司；左旋肉堿（L-carnitine） 北京中生瑞泰科技有限公司；總膽固醇（total cholesterol，TC）、總甘油三酯（triglycerid，TG）、高密度脂蛋白膽固醇（high density lipoprotein cholesterol，HDL-C）、丙二醛（malondialdehyde，MDA）、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）測定試劑盒 南京建成生物工程研究所；瘦素（leptin，LEP）、脂聯(lián)素（adiponectin，ADP）酶聯(lián)免疫吸附測定（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）試劑盒 美國R&D公司；RNAiso Plus試劑盒、SYBR Premix EXTaqTMⅡ試劑盒、Primescript RT reagent Kit With gDNA Erase試劑盒大連寶生物工程有限公司。

1.2儀器與設(shè)備

BSA124S-CW電子天平 德國Sartorius公司；MK-78HW-1恒溫磁力攪拌器 金壇市華城敏科實(shí)驗(yàn)儀器廠；5424R離心機(jī)、Mastercycler ep realplex熒光定量PCR儀 德國Eppendorf有限公司；MD SPECTRAMAX PLUS384酶標(biāo)儀 美國分子儀器公司；TD-202A切片機(jī)、YD-A生物組織攤片機(jī)、YD-B生物組織烤片機(jī) 浙江省金華市益迪醫(yī)療設(shè)備廠；PH-030A干燥箱 上海一恒科學(xué)儀器有限公司。

1.3方法

1.3.1模型建立

取雄性小鼠120只，在相對濕度（55±1）%，溫度（23±1） ℃的條件下，自由飲水并采食普通飼料，適應(yīng)飼養(yǎng)1 周［10］。從中隨機(jī)挑出10 只作為空白組（normal control group，ND）喂食普通飼料直至實(shí)驗(yàn)結(jié)束。其他小鼠喂食普通飼料1 周后，飼喂高脂飼料配搭普通飼料1周，之后繼續(xù)全高脂飼料喂養(yǎng)至實(shí)驗(yàn)結(jié)束，4 周后隨機(jī)選取高脂飼料組小鼠測定TC、TG。確定造模成功后，將肥胖模型小鼠隨機(jī)分為5 組，分別為模型組（HFD）、陽性對照組（左旋肉堿100 mg/kg，L-C）、Hx低劑量組（Hx 30 mg/kg，LHx）、Hx中劑量組（Hx 60 mg/kg，MHx）、Hx高劑量組（Hx 90 mg/kg，HHx）。模型組和正常組每天灌胃生理鹽水。各組每天給藥1 次，以0.1mL/10 g（以體質(zhì)量計(jì)）灌胃給藥，連續(xù)給藥4 周。

1.3.2樣本采集及檢測

在實(shí)驗(yàn)結(jié)束時，將小鼠禁食12 h，眼球取血，收集血清后小鼠脫臼處死。4 ℃、3 500 r/min離心10 min，分離血清，將上清液貯存于-80 ℃?zhèn)溆谩＝馄屎?，快速摘取小鼠的肝臟、脂肪（腹部脂肪、附睪脂肪）并稱質(zhì)量。肝臟取0.5 g左右，按體積比1∶9的比例加入4 ℃生理鹽水，勻漿，以4 200 r/min反復(fù)離心，取上清液。按照相應(yīng)試劑盒說明書分別檢測血清中TG、TC、HDL-C、LEP和APD含量及肝臟中MDA含量和SOD活性。用小鼠的體質(zhì)量、體長和脂肪濕質(zhì)量測量小鼠的Lee’s指數(shù)和脂肪系數(shù)，作為評價小鼠肥胖程度的指標(biāo)。

1.3.3脂肪組織切片制作

解剖后將小鼠的腹部脂肪存入體積分?jǐn)?shù)為4%甲醛中固定保存，溶液浸泡1 d后，石蠟包埋。所有組織切割厚度10 μm，并用蘇木精和伊紅染色。脂肪細(xì)胞染色后，染色切片在光鏡下進(jìn)行觀察和圖像分析，觀察小鼠的脂肪組織變化情況。

1.3.4實(shí)時熒光定量PCR檢測

按照試劑盒說明書進(jìn)行操作，用Trizol試劑從附睪脂肪組織中提取總RNA后用試劑盒中的DNaseⅠ酶解去除染色體DNA。以甘油醛-3-磷酸脫氫酶（glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase，GAPDH）基因作為內(nèi)參基因，所有引物均委托大連寶生物工程有限公司設(shè)計(jì)合成，引物序列見表2。以所提取的脂肪組織中的總RNA的mRNA為模板，按照反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（reverse transcription-PCR， RT-PCR）專用試劑盒說明書進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，合成相應(yīng)的cDNA第一鏈。采用SYBR@Premix Ex Taq II試劑盒進(jìn)行實(shí)時熒光定量PCR，反應(yīng)體系總體積為25 μL。所有實(shí)驗(yàn)重復(fù)3 次。實(shí)時熒光定量PCR反應(yīng)條件：95 ℃預(yù)變性5 min，95 ℃變性5 s，60 ℃退火30 s，95 ℃延伸15 s，40 個循環(huán)。

表2　熒光定量引物序列信息Table 2 Primer sequences used in qPCR analysis

1.4數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

2　結(jié)果與分析

2.1Hx對肥胖小鼠體質(zhì)量、Lee’s指數(shù)和脂肪系數(shù)的影響

圖1　Hx對小鼠體質(zhì)量的影響Fig. 1 Effect of hypoxanthine on body weights of mice

由圖1可知，灌胃前各肥胖組小鼠與空白組小鼠的體質(zhì)量相比較有顯著性差異。灌胃4 周后，陽性對照組和Hx給藥組小鼠的體質(zhì)量與模型組相比顯著降低（P＜0.05，P＜0.01）。由表3可知，陽性對照組和Hx低、中、高劑量組的Lee’s指數(shù)與模型組相比顯著降低（P＜0.05，P＜0.01）；中、低劑量組的脂肪系數(shù)與模型組相比有顯著降低（P＜0.05，P＜0.01）。

表3　Hx對肥胖小鼠Lee s指數(shù)和脂肪系數(shù)的影響Table 3 Effect of hypoxanthine on mouse Lee s index and fat coefficients

2.2Hx對肥胖小鼠內(nèi)臟的影響

表4　Hx對小鼠內(nèi)臟器官質(zhì)量的影響Table 4 Effect of hypoxanthine on visceral weights of mice

由表4可知，小鼠的胸腺質(zhì)量約為（0.04±0.01）g/只；肝質(zhì)量約為（1.75±0.04）g /只；與空白組相比模型組總脂肪質(zhì)量顯著增長（P＜0.05）。中、低劑量組的總脂肪質(zhì)量均低于模型組小鼠，差異顯著（P＜0.05）。其中低劑量組小鼠總脂肪質(zhì)量最低。陽性對照組脂肪質(zhì)量也有一定程度的下降趨勢，但沒有顯著性差異。陽性對照組和Hx低、中劑量組總脂肪質(zhì)量分別降低了23.0%、60.0%、35.6%。

2.3Hx對肥胖小鼠血清脂質(zhì)水平的影響

喂食高脂飲食的肥胖小鼠經(jīng)Hx給藥4 周后小鼠的血清脂質(zhì)水平的影響如表5所示。高脂飲食小鼠的TG濃度明顯高于空白組小鼠。經(jīng)給藥后，與模型組相比，Hx對給藥組小鼠體內(nèi)的TG濃度具有顯著性的抑制作用（P＜0.05，P＜0.01）。陽性對照組、Hx低劑量組與模型組小鼠體內(nèi)的TC濃度相比具有顯著性的抑制作用（P＜0.05）。

表5　Hx對肥胖小鼠體內(nèi)血清TC、TG濃度的影響Table 5 Effect of hypoxanthine on serum TC and TG levels of obese mice mmol/L

表6　Hx對肥胖小鼠ADP、LEP、HDL-C水平的影響Table 6 Effect of hypoxanthine on blood lipid levels of obese mice

高脂飲食小鼠血清中LEP、ADP、HDL-C水平的影響如表6所示。與模型組相比，陽性對照組和Hx給藥組LEP含量受到了明顯抑制（P＜0.01）。由表6還可知，雖然模型組和Hx高劑量組中血清ADP含量無顯著性差異（P＜0.05），但是L-C、LHx、MHx組的ADP含量與模型組相比有極顯著的增加（P＜0.01），分別為124.2%、229.7%和119.2%。Hx給藥組和空白組相比，HDL-C濃度均顯著增加（P＜0.05），與模型組相比，差異不顯著。2.4 Hx對營養(yǎng)性肥胖小鼠肝臟參數(shù)的影響

表7　Hx對肥胖小鼠肝組織MDA、SOD和GSH水平的影響Table 7 Effect of hypoxanthine on MDA， SOD and GSH levels in liver of mice ice

營養(yǎng)性肥胖小鼠肝功能相關(guān)酶活性會受到一定程度的影響（表7），模型組小鼠的SOD活力明顯低于空白組小鼠28.5%。MDA的水平明顯高于空白組、陽性對照組和Hx給藥組（P＜0.01）。Hx使肥胖小鼠肝組織中MDA含量明顯下降，SOD活性明顯上升（P＜0.05）。模型組小鼠GSH水平明顯高于空白組小鼠96.8%。左旋肉堿治療和Hx可顯著降低肥胖小鼠肝組織中GSH活力（P＜0.01）。

2.5脂肪組織切片分析

圖2　小鼠的脂肪組織切片圖 （× 400）Fig. 2 Histological images of mouse adipose tissues （×400）

由圖2可知，正常小鼠脂肪組織脂肪細(xì)胞體積較小，大小均一，飽滿。模型組小鼠的腹腔脂肪組織脂肪細(xì)胞呈大空泡狀，體積較大，細(xì)胞形狀不規(guī)則，且細(xì)胞膜不完全清晰，細(xì)胞相交處見融合現(xiàn)象。給藥組小鼠腹腔脂肪組織細(xì)胞的體積出現(xiàn)了不同程度的恢復(fù)狀態(tài)，其中Hx高劑量組細(xì)胞的形狀仍不規(guī)則，其他給藥組細(xì)胞的形態(tài)基本上較規(guī)則且飽滿。Hx低劑量組和中劑量組脂滴較模型組明顯縮小。

2.6小鼠脂質(zhì)代謝相關(guān)基因的表達(dá)

通過實(shí)時熒光定量PCR研究Hx對關(guān)于脂質(zhì)代謝及脂肪生成的各種基因的mRNA表達(dá)情況的影響（圖3）。Hx給藥組與模型組比較，瘦素和脂聯(lián)素基因的mRNA表達(dá)量具有顯著差異（P＜0.05）。其中Hx低劑量組的mRNA表達(dá)量變化最顯著。

圖3　小鼠瘦素（A）和脂聯(lián)素（B）基因表達(dá)Fig. 3 Gene expression levels of leptin （A） and adiponectin （B） in mice

3　討 論

肥胖及相關(guān)疾病現(xiàn)已成為影響全世界各個國家的主要健康問題之一［11］。同時肥胖引起的健康問題在兒童和青少年中也越演越烈［12-13］。肥胖是多種因素引起的由脂肪組織堆積而形成的慢性疾病，會增加腎功能衰竭的機(jī)率［14-16］，且與心臟和心血管疾?。?7］、營養(yǎng)代謝綜合征［18］和血栓疾?。?9］相關(guān)聯(lián)。

肥胖癥人常出現(xiàn)高脂血癥，因此血脂指標(biāo)通常作為考察肥胖的主要因素之一。本研究發(fā)現(xiàn)Hx能促進(jìn)小鼠的脂肪分解，起到降低體內(nèi)脂肪質(zhì)量的作用。Hx對營養(yǎng)性肥胖小鼠的抗肥胖研究結(jié)果顯示：給藥4 周后，Hx給藥組可以有效的降低肥胖小鼠體質(zhì)量、總脂肪質(zhì)量、Lee’s指數(shù)和脂肪系數(shù)，其中Hx低劑量組與模型組差異最明顯。血清方面，與模型組相比較，Hx中、低劑量組能降低小鼠血清中的TC、TG含量，增加脂聯(lián)素含量，瘦素水平明顯受到了抑制，其中Hx低劑量組對治療小鼠的高脂血癥作用最為明顯。小鼠的肥胖情況與肝臟中SOD活性和MDA含量均有密切聯(lián)系，與模型組相比較，Hx具有抑制SOD、MDA活性的作用，且Hx低劑量組差異性最為明顯。Hx通過調(diào)節(jié)SOD、MDA的活性，能有改善實(shí)驗(yàn)小鼠肝組織情況，減少體內(nèi)脂肪分解吸收，達(dá)到減肥作用。綜上判斷Hx對實(shí)驗(yàn)小鼠具有減重降脂功能，其中低劑量組的效果最顯著。

本實(shí)驗(yàn)采用3～4周齡的小鼠，經(jīng)10 周實(shí)驗(yàn)處于成年?duì)顟B(tài)。肥胖在細(xì)胞水平的解釋是脂肪細(xì)胞數(shù)目的增加和體積的增大。高脂飲食會導(dǎo)致成年小鼠的脂肪細(xì)胞體積增大［20］，從而增加了肥胖發(fā)生的機(jī)率。脂肪組織蘇木精-伊紅染色切片的研究結(jié)果表明模型組脂肪細(xì)胞體積明顯增大，Hx低劑量組脂肪組織的細(xì)胞體積恢復(fù)狀態(tài)最好且脂滴明顯縮小，為減肥藥物的開發(fā)利用提供參考。

瘦素抑制嚙齒類動物胰島β細(xì)胞分泌胰島素，進(jìn)而影響胰島素原mRNA 的表達(dá)和胰島素的釋放。瘦素是通過直接作用于下丘腦弓狀核和室旁核的受體而發(fā)揮這一作用的［21-22］。瘦素的干預(yù)可以引起體質(zhì)量和脂肪含量的變化，肥胖模型組小鼠脂肪組織中瘦素 mRNA表達(dá)量顯著高于對照組，Hx低劑量組可以顯著降低肥胖小鼠脂肪組織中ob基因的表達(dá)以及血清中瘦素的含量。目前提出瘦素調(diào)節(jié)能量代謝與體質(zhì)量的基本框架，主要由兩部分構(gòu)成，即NPY遞質(zhì)系統(tǒng)和黑素皮質(zhì)素受體-4（melanocortin-4，MC4）受體系統(tǒng)，分別在低和高瘦素含量時發(fā)揮作用［23-25］。瘦素的生物學(xué)功能是瘦素受體介導(dǎo)的，瘦素的含量上升影響下丘腦MC4受體增加使攝食量減少、能量消耗增加、交感活動增加，具有廣泛的生物學(xué)功能［26］。

減肥藥物種類越來越多，減肥過程中導(dǎo)致不同程度的毒副作用，因此尋找能代替藥物的天然健康產(chǎn)品的需求在全球不斷的增長［27］。本研究旨在應(yīng)用天然藥物生產(chǎn)無毒副作用的減肥產(chǎn)品，達(dá)到讓人們輕松減肥，健康瘦身的目的，同時為進(jìn)一步研究其抗肥胖的機(jī)制及預(yù)防提供理論依據(jù)。

［1］ RICHARD A A， KIM S， MOFFETT B S， et al. Comparison of anti-Xa levels in obese and non-obese pediatric patients receiving treatment doses of enoxaparin［J］. Journal of Pediatrics， 2013， 162（2）: 293-296. DOI:10.1016/j.jpeds.2012.07.047.

［2］ LI Hua， LI Honglian， BAO Yige， et al. Free fatty acids induce endothelial dysfunction and activate protein kinase C and nuclear factor-κB pathway in rat aorta［J］. International Journal of Cardiology，2010， 152 （2）: 218-224. DOI:10.1016/j.ijcard.2010.07.019.

［3］ BERG A H， SCHERER P E. Adipose tissue， inflammation， and cardiovascular disease［J］. Circulation Research， 2005， 96（9）: 939-949. DOI:10.1161/01.RES.0000163635.62927.34.

［4］ BURKE G L， BERTONI A G， SHEA S， et al. The impact of obesity on cardiovascular disease risk factors and subclinical vascular disease: the Multi-Ethnic Study of Atherosclerosis［J］. Archives of Internal Medicine， 2008， 168（8）: 928-935. DOI:10.1001/archinte.168.9.928.

［5］ BARTON M. Obesity and aging: determinants of endothelial cell dysfunction and atherosclerosis ［J］. Pflügers Archiv-European Journal of Physiology， 2010， 460（5）: 825-837. DOI:10.1007/s00424-010-0860-y.

［6］ RAFFINI L， HUANG Y S， WITMER C， et al. Dramatic increase in venous thromboembolism in children’s hospitals in the United States from 2001 to 2007［J］. Pediatrics， 2009， 124（4）: 1001-1008. DOI:10.1542/peds.2009-0768.

［7］ BLUHER M. The distinction of metabolically ‘healthy’ from‘unhealthy’ obese individuals［J］. Current Opinion in Lipidology， 2010，21（1）: 38-43. DOI:10.1097/MOL.0b013e3283346ccc.

［8］ 馬曉琴， 辛華雯， 李亮， 等. HPLC法測定人紅細(xì)胞中次黃嘌呤鳥嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶活性［J］. 中國藥師， 2013， 16（2）: 196-199. DOI:10.3969/j.issn.1008-049X.2013.02.011.

［9］ 丁慧， 岳麗潔， 楊春蘭， 等. 次黃嘌呤鳥嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶研究進(jìn)展［J］. 遺傳， 2013， 35（8）: 948-954. DOI:10.3724/ SP.J.1005.2013.00948.

［10］ CHO A S， JEON S M， KIM M J. Chlorogenic acid exhibits antiobesity property and improves lipid metabolism in high-fat dietinduced-obese mice［J］. Food and Chemical Toxicology， 2010， 48（3）: 937-943. DOI:10.1016/j.fct.2010.01.003.

［11］ TCHERNOF A， DESORES J P. Pathophysiology of human visceral obesity: an update［J］. Physiological Reviews， 2013， 93（1）: 359-404. DOI:10.1152/physrev.00033.2011.

［12］ OGDEN C L， CARROLL M D， CURTIN L R， et al. Prevalence of high body mass index in US children and adolescents， 2007-2008［J］. The Journal of the American Medical Association， 2010， 303（3）: 242-249. DOI:10.1001/jama.2009.2012.

［13］ DENG G， LONG Y， YU Y R， et al. Adiponectin directly improves endothelial dysfunction in obese rats through the AMPK-eNOS Pathway［J］. International Journal of Obesity， 2010， 34（1）: 165-171. DOI:10.1038/ijo.2009.205.

［14］ DUPLAGA B A， RIVERS C W， NUTESCU E. Dosing and monitoring of low-molecular-weight heparins in special populations［J］. Pharmacotherapy， 2001， 21（2）: 218-234. DOI:10.1592/ phco.21.2.218.34112.

［15］ STOLIC R. Obesity in renal failure-Health or disease［J］. Medical Hypotheses， 2010， 75（6）: 497-500. DOI:10.1016/j.mehy.2010.07.004.

［16］ BURKE G L， BERTONI A G， TRACY R， et al. The impact of obesity on cardiovascular disease risk factors and subclinical vascular disease: the Multi-Ethnic Study of Atherosclerosis［J］. Archives Internal Medicine， 2008， 168（8）: 928-935. DOI:10.1001/archinte.168.9.928.

［17］ BONORA E， KIECHL S， WILLEIT J， et al. Prevalence of insulin resistance in metabolic disorders: the Bruneck Study［J］. Diabetes，1998， 47: 1643-1649. DOI:10.2337/diabetes.47.10.1643.

［18］ LIU W， WAHAFY T， CHENG M， et al. The influence of obesity on primary total hip arthroplasty outcomes: a meta-analysis of prospective cohort studies［J］. Orthopaedics & Traumatology: Surgery & Research，2015， 101（3）: 289-296. DOI:10.1016/j.otsr.2015.01.011.

［19］ FERRANNINI E， NATALI A， BELL P， et al. Insulin resistance and hypersecretion in obesity. European Group for the Study of Insulin Resistance （EGIR）［J］. Journal of Clinical Investigation， 1997， 100（5）: 1166-1173. DOI:10.1172/JCI119628.

［20］ DEMERDASH H M， SHARARA G， KATRI K. Differential effects of gastric bypass and banding on the cardiovascular risk profile in morbidly obese subjects: the correlation with plasma apolipoprotein A-IV concentration［J］. Alexandria Journal of Medicine， 2013， 49（1）: 17-23. DOI:10.1016/j.ajme.2012.07.002.

［21］ PELLEYMOUNTER M A， CULLEN M J， BAKER M B， et al. Effects of the obese gene product on body weight regulation in ob/ob mice［J］. Science， 1995， 269: 540-543. DOI:10.1126/science.7624776.

［22］ 黃之瑜， 孫志娟. 肥胖與神經(jīng)調(diào)節(jié)［J］. 生理科學(xué)進(jìn)展， 2001， 32 （1）: 45-51. DOI:10.3321/j.issn:0559-7765.2001.01.010.

［23］ FAN W， BOSTON B A， KESTERSON R A， et al. Role of melanocortinergic neurons in feeding and the agouti obesity syndrome［J］. Nature， 1997， 385:165-168. DOI:10.1038/385165a0.

［24］ HUSZAR D，LYNCH C， DUNMORE J， et al. Targeted disruption of the melanocortin-4 receptor result in obesity in mice［J］. Cell， 1997，88（1）: 131-141. DOI:10.1016/S0092-8674（00）81865-6.

［25］ ERIKSON J C， HOLLOPETER G， PALMITER R D. Attenuation of the obesity syndrome of ob/ob mice by the loss of neuropeptide Y［J］. Science， 1997， 274: 1704-1707. DOI:10.1126/science.274.5293.1704.

［26］ 劉華珍， 彭美克. leptin及其受體的研究進(jìn)展［J］. 華中農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2003， 22（1）: 90-94. DOI:10.3321/j.issn:1000-2421.2003.01.020.

［27］ HOSSEN N， KAJIMOTO K， AKITA H， et al. Vascular-targeted nanotherapy for obesity: unexpected passive targeting mechanism to obese fat for the enhancement of active drug delivery［J］. Journal of Controlled Release， 2012， 163 （2）: 101-110. DOI:10.1016/ j.jconrel.2012.09.002.

Anti-Obesity Effect of Hypoxanthine on Nutritionally Obese Mice

GU Xiaoyu1， LI Zhe1， ZHENG Yinan1， LIU Yumin2，*， WANG Quankai1，*
（1. College of Chinese Medicinal Materials， Jilin Agricultural University， Changchun 130118， China；2. Changchun University of Science and Techology， Changchun 130118， China）

Objective: To explore the anti-obesity effect of hypoxanthine （Hx） on nutritionally obese mice. Methods: An obese mouse model was established successfully by feeding high-fat diet. The ICR mice were randomly divided into six groups， namely， normal control， model control， positive control （L-carnitine， 100 mg/kg） and hypoxanthine treatment groups （30， 60， and 90 mg/kg）. After 4 weeks of oral administration， blood samples were collected and centrifuged and then the mice were sacrificed. The contents of triglyceride， total cholesterol， leptin and adiponectin in mouse serum were detected. The adipose tissues were made into paraffin section to observe the changes of adipose cells by HE staining. The gene expression levels of leptin and adiponectin in mouse epididymal adipose tissue were measured by real-time quantitative polymerase chain reaction （qRT-PCR）. Results: The body weight of the Hx treatment groups were significantly lower than that of the model group （P ＜ 0.05）； TC levels were significantly lower than those of the model group （P ＜ 0.05， P ＜ 0.01）. The gene expression levels of leptin and adiponectin in the middle- and low-dose Hx groups and normal control were significantly different from those of the model group（P ＜ 0.05）. Conclusion: The middle- and low-dose Hx groups had good anti-obesity effect， and the best effect was achieved at the low dose.

obesity； hypoxanthine； slice； real-time quantitative polymerase chain reaction （qRT-PCR）

10.7506/spkx1002-6630-201615043

R965

A

1002-6630（2016）15-0253-06

10.7506/spkx1002-6630-201615043. http://www.spkx.net.cn

2015-10-08

吉林省科技發(fā)展計(jì)劃項(xiàng)目（20120246）；吉林省教育廳“十二五”科學(xué)技術(shù)研究項(xiàng)目（2014628）

顧效瑜（1988—），女，碩士研究生，主要從事生藥學(xué)動物藥研究。E-mail：358574235@qq.com

劉玉敏（1986—），女，講師，主要從事獸醫(yī)藥理和生物化學(xué)研究。E-mail：598295941@qq.com王全凱（1958—），男，教授，主要從事鹿的研究與開發(fā)。E-mail：quankaiwang1@163.com

引文格式：