不同ELISA試劑盒檢測豬瘟病毒抗體的比較分析

周美君/重慶市涪陵區李渡街道畜牧獸醫站

不同ELISA試劑盒檢測豬瘟病毒抗體的比較分析

周美君/重慶市涪陵區李渡街道畜牧獸醫站

豬瘟（Classical swine fever，CSF）是 由 豬 瘟 病 毒（Classical swine fever virus，CSFV）引起的嚴重威脅養豬業的病毒性疾病。世界動物衛生組織（OIE）將其列為A類動物傳染病，我國也將此病列為一類動物疫病，2005年發布的新版《陸生動物衛生法典》將豬瘟列入OIE規定必須通報疾病名錄，是我國發生最多、危害最大、流行最廣的動物傳染病之一。然而就目前的研究來說，還沒找到一種方法完全把豬瘟完全根除?，F在世界范圍內對該病的防制主要是采用強制免疫、禁運、撲殺、消毒、封鎖等措施，而免疫接種是最主要的也是最經濟的防控措施。近年來，由于我國采取了豬瘟強制免疫的預防措施，我國豬瘟的流行和發病特點發生了很大的變化，逐步轉變為隱性感染和亞病毒感染，在臨床上表現也更加復雜，大規模的暴發流行基本停止，出現了所謂“非典型豬瘟”，“溫和型豬瘟”，“帶毒母豬綜合征”以及“新生仔豬的免疫耐受”等病例，在病理剖檢上也出現了不同于典型豬瘟的病理變化，這些改變就導致了獸醫工作者在臨床上根據臨床表現和病理變化很難對豬瘟做出確診，針對豬瘟流行的新特點，對豬瘟的實驗室診斷技術要求也越來越高，準確的實驗室診斷方法對于預防和控制豬瘟都有重要意義。

隨著疫苗免疫的廣泛應用，疫苗的免疫效果評價就顯得十分重要。目前，常見的豬瘟診斷方法分為血清學診斷和分子生物學診斷，其中血清學診斷方法包括瓊脂擴散試驗（AGP）、熒光抗體試驗（FAT）、間接血凝試驗（IHA）、中和試驗、酶聯免疫吸附試驗（ELISA）和免疫膠體金技術（IGSS）；分子生物學方法包括RT-PCR技術和核酸探針技術。而血清學診斷方法以其使用方便、一次性檢測量大、血清容易采集保存等優點被廣泛應用，特別是酶聯免疫吸附試驗在豬瘟流行狀態的監測和流行病學調查等方面有著重要的作用，同時也是免疫豬群抗體水平監測的主要方法，對疫苗免疫效果評價及免疫程序的制定均具有重要意義。但由于每種試劑盒的特異性和敏感性不同，用不同的試劑盒檢測時其抗體的阻斷率會出現差異。

本研究采用市面上常見的兩種豬瘟抗體檢測ELISA試劑盒對重慶市涪陵區農村散養生豬豬瘟抗體進行檢測，以明確不同試劑盒之間的敏感性和特異性，從而為以后針對性的選擇使用試劑盒提供依據。

一、材料與方法

（一）材料

1.試驗試劑盒。進口阻斷ELISA試劑盒，美國IDEXX公司生產；豬瘟病毒間接ELISA抗體檢測試劑盒，中國獸醫藥品監察所產品。

2.血清來源。4 000份血清均為2014年采自重慶市涪陵區各鄉鎮農村散養戶（一是疫苗相同，均是政府統一采購疫苗由鄉鎮畜牧獸醫站免疫；二是免疫程序一致，均是商品豬28日齡首免，58日齡二免，種豬春秋防集中免疫）。

（二）方法

1.重復性試驗。在4 000份血清樣品中隨機抽取一份，分別采用兩種抗體檢測試劑盒對其進行豬瘟抗體檢測，同時設置5個平行試驗孔以檢測其重復性。操作方法嚴格按照操作說明書進行。

2.兩種試劑盒檢測豬瘟抗體陽性率對比試驗。隨機抽取2 000份血清用美國IDEXX公司生產的試劑盒進行豬瘟抗體檢測，另外2 000份血清用中國獸醫藥品監察所生產的試劑盒進行豬瘟抗體檢測，

3.操作方法。均嚴格按照ELISA試驗診斷試劑盒中操作說明書進行，最終判斷去陰陽性。

二、結果與分析

（一）重復性試驗結果

采用兩種試劑盒檢測同一份血清抗體結果見表1。結果顯示，用兩種不同的試劑盒對豬瘟抗體進行重復檢測時，同一個試劑盒的檢測結果均一致，數據具有極高的重復性，但是兩個不同試劑盒之間的結果具有顯著性差異。

表1　兩種試劑盒檢測豬瘟抗體重復性試驗結果

表2　豬瘟抗體檢測陽性率結果

（二）兩種試劑盒檢測豬瘟抗體陽性率對比試驗結果

利用兩種不同試劑盒對豬瘟抗體進行檢測結果見表2。從表中可看出，采用中監所試劑盒檢測豬瘟抗體的平均陽性率明顯高于采用IDEXX試劑盒的檢測結果，二者之間具有顯著性差異。

三、討論

本試驗通過對4 000份生豬血清豬瘟抗體進行檢測，結果發現中監所的試劑盒的檢測結果陽性率明顯高于美國IDEXX的試劑盒，在本試驗中，由于樣本選擇量大，所檢測的血清均是采用的政府統一采購疫苗，經鄉鎮畜牧獸醫站統一免疫后的生豬血清，未注射過其他廠家的豬瘟疫苗，且所有免疫程序均一致，受到其他疫苗的干擾作用也一致。分析原因主要有以下幾點：

1.美國IDEXX公司生產的ELISA豬瘟病毒抗體檢測試劑盒為單克隆抗體阻斷ELISA方法，它所用的抗原是通過基因工程的方法生產的，純度高，所用的單抗針對 E2蛋白，檢測E2抗體。但它只能識別豬瘟兩個位點中的一個，它所檢測的是豬瘟病毒特異性抗體，且抗原為原核表達產物，檢測特異性高，檢測敏感性受到單抗檢測范圍限制，影響檢測敏感性，因此檢測結果可能會出現假陰性，特別是對免疫逃逸豬瘟病毒株的抗體檢測存在缺陷，不適合抗體的動態監測和免疫效果評價，但該種試劑盒可以區分牛病毒性腹瀉性病毒和邊界病，可以在引種監測和個體淘汰中廣泛應用。

2.中監所生產的ELISA豬瘟病毒抗體檢測試劑盒為間接ELISA檢測方法，是以表達的E2蛋白作為ELISA包被抗原建立的間接ELISA方法檢測豬瘟抗體，敏感性較高，可作為豬群抗體檢測評價的首選檢測方法，但操作時需要避免假陽性的出現。

3.美國IDEXX公司的試劑盒成本高，而中監所的試劑盒相對而言價格實惠，因此在具體選擇試劑盒時應根據實際情況加以靈活應用，特別是對基層來說，這不僅能夠保證免疫監測工作的完成，且能夠為防制豬瘟的暴發提供可靠的依據，還可以解決實際供應緊張等問題。但是一個地區在進行疫病的免疫監測時，為了更好的掌握疫苗免疫效果最好不要經常變換檢測方法和檢測試劑盒，相對穩定的檢測方法有利于該地區的豬場和散養農戶建立檔案資料，為指導生產提供理論依據。所以我們要合理的選用試劑盒，更好的為生產服務。

（略）