蒸發(fā)光散射測(cè)定浙貝母中貝母素甲、貝母素乙的含量探究

黃長(zhǎng)煌

蒸發(fā)光散射測(cè)定浙貝母中貝母素甲、貝母素乙的含量探究

黃長(zhǎng)煌

目的 探究蒸發(fā)光散射（ELSD）測(cè)定浙貝母中貝母素甲、貝母素乙含量的可行性。方法 色譜柱：Agilent Hypersil BDS-C18（4.0 mm×250 mm，5 μm）；流動(dòng)相：乙腈-水-二乙胺（65：35：0.03），ELSD檢測(cè)器對(duì)浙貝母中貝母素甲、貝母素乙含量進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果來自金華磐安三批次樣品貝母素甲平均百分含量為（0.124±0.07）%、貝母素乙平均百分含量為（0.061±0.004）%。結(jié)論 ELSD測(cè)定浙貝母中貝母素甲和貝母素乙，方法準(zhǔn)確可靠，測(cè)定較為快捷。

蒸發(fā)光散射；貝母素甲；貝母素乙；生物堿

浙貝母為百合科貝母屬植物浙貝母的干燥鱗莖［1-2］，其主要有效成分為生物堿，其中以貝母素甲和貝母素乙為其主要活性成分［3-4］。由于浙貝母中生物堿為甾體生物堿，紫外吸收較弱，故其含量測(cè)定多以的薄層色譜掃描、柱前衍生化HPLC、氣相等方法進(jìn)行測(cè)定，但方法較復(fù)雜，耗時(shí)較長(zhǎng)，不利于本品的快速鑒定［5-6］。本文由此出發(fā)，考察ELSD方法測(cè)定浙貝母中貝母素甲、貝母素乙的可行性。

1　儀器與試藥

島津LC-20A型高效液相色譜儀；Alltech ELSD 3300蒸發(fā)光散射檢測(cè)器；對(duì)照品貝母素甲、貝母素乙購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢驗(yàn)研究所；甲醇、乙腈為色譜醇；浙貝母飲片購(gòu)自金華磐安。

2　方法

2.1色譜條件

結(jié)合文獻(xiàn)［7］及早期預(yù)實(shí)驗(yàn)，選擇色譜柱：Agilent Hypersil BDS-C18（4.0 mm×250 mm，5 μm）；流動(dòng)相：乙腈-水-二乙胺（65：35：0.03），再以以信噪比（S/N）為參考，對(duì)ELSD載氣流速及漂移管溫度進(jìn)行優(yōu)選，最終確定漂移管溫度為60℃，載氣流速為2.0 L/min時(shí)信噪比最佳。此條件下，貝母素甲、貝母素乙理論塔板數(shù)均大于2 000，且兩成分分離度大于1.5。

2.2溶液的制備

2.2.1供試品溶液的制備 浙貝母樣品粉碎后，過四號(hào)篩，精密稱取粉末2 g，加4 ml試液浸潤(rùn)1 h，精密加入4：1混合的三氯甲烷-甲醇溶液，稱重后80℃ 水浴回流2 h，放冷置室溫后，稱重，補(bǔ)足失重，濾過，取10 ml續(xù)濾液，蒸發(fā)皿中揮干液體后，加甲醇溶解殘?jiān)⑥D(zhuǎn)移至2 ml容量瓶中，甲醇加至刻度，搖勻后離心，取上清液即為供試品。

2.2.2對(duì)照品溶液的制備 采用十萬分位天平稱取貝母素甲10.23 mg、貝母素乙10.49 mg于10 ml容量瓶中，加甲醇溶解至澄清后，稀釋至刻度，搖勻即得混批對(duì)照品溶液。

2.3方法學(xué)考察

取對(duì)照品溶液，按照藥典方法學(xué)考察部分，分別進(jìn)行精密度、穩(wěn)定性考察，結(jié)果顯示：精密度：貝母素甲R(shí)SD=1.6%，貝母素乙RSD=1.8%；穩(wěn)定性：對(duì)照品在24 h內(nèi)，貝母素甲R(shí)SD=1.3%，貝母素乙RSD=1.2%；選擇浙貝母樣品6份，精密稱定后，根據(jù)供試品“2.2.1”項(xiàng)操作制備溶液，結(jié)合藥典方法學(xué)考察步驟，進(jìn)行重復(fù)性、回收率考察，重復(fù)性（n=6）結(jié)果顯示：貝母素甲含量為0.124%，RSD=1.4%，貝母素乙含量為0.056%，RSD=1.7%，回收率：貝母素甲平均回收率為100.46%，RSD 1.43%，貝母素乙平均回收率為101.02%，RSD 1.72%，結(jié)果顯示本法準(zhǔn)確可靠，能用于兩成分含量測(cè)定。

2.4線性關(guān)系考察

對(duì)照品溶液按照不同濃度稀釋得到系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，進(jìn)樣10 μl，建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到貝母素甲濃度在0.020 5 mg/ml～0.511 5 mg/ml，貝母素乙濃度在0.021 0 mg/ml～0.524 5 mg/ml范圍內(nèi)與峰面積存在良好的線性關(guān)系。

2.5樣品中貝母素甲、貝母素乙含量測(cè)定

取浙貝母樣品，按照“2.2.1”項(xiàng)操作制備溶液，過0.2 μm濾膜后精密吸取10 μl注入液相色譜中，在“2.1項(xiàng)”色譜條件下進(jìn)行樣品測(cè)定，并結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算濃度。

3　結(jié)果

來自金華磐安三批次樣品貝母素甲平均百分含量為（0.124± 0.07）%、貝母素乙平均百分含量為（0.061±0.004）%，見表1。

表1　浙貝母中貝母素甲、貝母素乙百分含量（%）

4　討論

貝母素甲、貝母素乙均為浙貝母主要有效成分，但由于兩者本身不具有生色基團(tuán)，以至常規(guī)的紫外檢測(cè)方式不能很好的測(cè)定兩者含量，蒸發(fā)光散射檢測(cè)器是通過將進(jìn)樣溶液霧化后，蒸發(fā)掉溶劑，然后利用不揮發(fā)性溶質(zhì)顆粒的光散射作用進(jìn)行測(cè)定的方法［8］，適用性較廣。本組研究結(jié)果顯示，在ELSD條件下，貝母素甲、貝母素乙分離度良好，且檢測(cè)精密度、準(zhǔn)確性、重復(fù)性均較高。

綜上所述，采用ELSD方式測(cè)定浙貝母中貝母素甲、貝母素乙方法準(zhǔn)確、可靠，可以考慮作為浙貝母的質(zhì)量控制方法。

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Determination of the Contents of Peimine A and Peimine B in Fritillaria Thunbergii by ELSD

HUANG Changhuang Department of Pharmacy，Minqing Prevention Psychiatric Hospital，F(xiàn)uzhou Fujian 350800，China

Objective To explore a feasibility method for determination of peimine A and peimine B. Methods HPLC were carried out with conditions：column：agilent hypersil BDS-C18（4.0 mm×250 mm，5μm），mobile phase：acetonitrile-water-diethylamine（65：35：0.03），ELSD to determinate of peimine，peiminine. Results The average percentages of peimine A from three batches of Jinhua were （0.124 ± 0.07）% and peiminine B were（0.061 ± 0.004）%. Conclusion ELSD for determination of peimine，peiminine is a accurate and reliable and rapid method.

ELSD，Peimine A，Peimine B，Alkaloids

R284

A

1674-9316（2016）18-0139-03

10.3969/j.issn.1674-9316.2016.18.092

福建省閩清精神病防治院藥劑科，福建 福州 350800