HPLC 法測定鹽酸法舒地爾注射液與葡萄糖注射液配伍液中的5-羥甲基糠醛

程永科，李銳，陳祖利

（河南中帥醫藥科技股份有限公司，河南鄭州451000）

HPLC 法測定鹽酸法舒地爾注射液與葡萄糖注射液配伍液中的5-羥甲基糠醛

程永科，李銳，陳祖利

（河南中帥醫藥科技股份有限公司，河南鄭州451000）

目的測定鹽酸法舒地爾注射液與葡萄糖注射液配伍液中的5-羥甲基糠醛（5-HMF）。方法采用高效液相色譜法（HPLC），色譜柱：Wetch C18柱（150.0 mm×4.6 mm×5.0 μm），流動相：0.05 mol/L磷酸二氫銨溶液-乙腈（89∶11），流速：1.0 mL/min，檢測波長：284 nm，柱溫：25℃，進樣量：20 μL。結果5-HMF在1.45～2.61 μg/mL內線性關系良好（r= 0.9998）；平均回收率為97.4%（RSD=1.1%）。結論采用HPLC測定鹽酸法舒地爾注射液與葡萄糖注射液配伍液中的5-HMF方法簡便，準確可靠。

色譜法，高壓液相；鹽酸；葡萄糖；注射劑；藥物配伍禁忌；糠醛/類似物和衍生物

鹽酸法舒地爾作為一種新型、高效的血管擴張藥，是全球唯一一個Rho激酶抑制劑，也是新型細胞內鈣離子拮抗劑，主要適應證為腦血管疾病。鹽酸法舒地爾注射液用于改善和預防蛛網膜下腔出血術后的腦血管痙攣及引起的腦缺血癥狀［1］。根據使用說明書，本品使用時需用葡萄糖注射液稀釋，而5-羥甲基糠醛（5-hydroxymethyl furfural，5-HMF）是含糖溶液中主要控制的雜質，其對人體橫紋肌及內臟有損害，具有神經毒性，能與人體蛋白質結合產生蓄積中毒［2］。因此，《中國藥典》從1985年版開始對葡萄糖注射液中5-HMF含量作了限量規定。朱大勝等［3］已對鹽酸法舒地爾注射液和葡萄糖注射液的配伍進行了研究，但是沒有考察5-HMF；也有眾多學者對5-HMF進行了研究［4-13］。鹽酸法舒地爾注射液與葡萄糖注射液混合后是否產生5-HMF對用藥安全至關重要。本文建立了測定配伍液中5-HMF含量的方法，旨在為臨床安全用藥提供參考。

1　材料與方法

1.1材料

1.1.1一般材料鹽酸法舒地爾注射液（自制，批號：20151012、20151013、20151014，規格：2 mL∶30 mg）；葡萄糖注射液（四川科倫藥業股份有限公司，批號：B15040601，規格：500 mL∶50 g）。

1.1.2儀器與試劑

1.1.2.1儀器日本島津LC-10ATVP高效液相色譜儀；BP211D電子天平（德國賽多利斯集團）；Phs-3C pH計（上海精密科學儀器有限公司）；日本島津UV-1800紫外分光光度儀。

1.1.2.2試劑5-HMF對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：111626-200402）；甲醇（色譜純，天津市四友精細化學品有限公司）；其余試劑均為分析純。

1.2方法

1.2.1色譜條件與系統適用性色譜柱：Wetch C18柱（150.0 mm×4.6 mm×5.0 μm），流動相：0.05 mol/L磷酸二氫銨溶液-乙腈（89∶11），流速：1.0 mL/min，檢測波長：284 nm，柱溫：25℃，進樣量：20 μL。

1.2.2供試品溶液的配制取鹽酸法舒地爾注射液1支，與100 mL 5%葡萄糖溶液配伍，加水稀釋5倍，制成每毫升含鹽酸法舒地爾0.06 mg、含葡萄糖10 mg的溶液，作為配伍供試品溶液。

1.2.3對照品溶液的配制取5-HMF對照品適量，精密稱定，加水制成每毫升約含2.0 μg/mL的溶液，作為對照品溶液。

1.2.4空白溶液的配制取鹽酸法舒地爾注射液1支，加水制成每毫升含鹽酸法舒地爾0.06 mg溶液，作為空白溶液。

1.2.5配伍溶液配置取本品1支，與100mL 5%葡萄糖溶液配伍，加水稀釋5倍，制成每毫升含鹽酸法舒地爾0.06 mg，含葡萄糖10 mg的溶液，于室溫下放置。

1.2.6限度范圍的確定根據《中國藥典2015年版二部》鹽酸法舒地爾注射液項下5-HMF的規定，10 mg/mL的葡萄糖溶液，按照紫外-可見分光光度法《中國藥典2015年版二部附錄ⅣA》，在284 nm波長處的吸光度不得大于0.32。

精密稱取5-HMF 5.8 mg，置于10 mL量瓶中加甲醇溶解并稀釋至刻度，作為5-HMF儲備液（500 μg/mL）。精密量取5-HMF儲備液1 mL，置100 mL量瓶中加水稀釋至刻度，搖勻，精密量取2、3、4、5、6 mL置于10 mL量瓶中，按照紫外-可見分光光度法，分別在284 nm波長處測定吸光度。

1.2.7定量限與檢測限取5-HMF儲備液適量，加水依次稀釋制成每毫升約含0.020、0.010、0.005 μg的溶液，取樣20μL注入液相色譜儀，當濃度為0.020μg/mL時，信噪比（S/N）約為10，計算得定量限；濃度為0.010 μg/mL時，色譜圖S/N約為3∶1，計算得檢測限。

1.2.8線性試驗精密稱取5-HMF5.8mg，置于10 mL量瓶中加甲醇溶解并稀釋至刻度，再精密量取1 mL，置于100 mL量瓶中加水稀釋至刻度，搖勻，精密量取2.5、3.0、3.5、4.0、4.5 mL置于10 mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液，分別精密量取20 μL，注入液相色譜儀，以濃度對峰面積進行線性回歸。

1.2.9溶液重復性試驗取5-HMF儲備液適量，加水制成每毫升約含2.0 μg/mL的溶液，精密量取20 μL注入液相色譜儀，連續進樣6次，記錄色譜圖。

1.2.10回收率試驗取定量限濃度，限度濃度和150%限度濃度樣品進行準確度試驗，即供試品濃度分別為0.02、2.00、3.00 μg/mL，取各供試品溶液和對照品溶液，照高效液相色譜法，精密量取20 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標法以峰面積計算回收率。見表4。

1.2.11溶液穩定性試驗取5-HMF儲備液適量，加水制成每毫升約含2.0 μg/mL的溶液，作為對照品溶液；于室溫下放置8 h，分別于第0、1、2、4、6、8小時，精密量取20 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖，考察5-HMF的主峰面積，比較不同時間峰面積的變化。

1.2.12配伍液中5-HMF的變化按照1.2.1的色譜條件，精密量取供試品溶液及對照品溶液各20 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖，供試品溶液的色譜圖中如顯5-HMF峰，其面積不得大于對照品溶液中主峰的面積（0.020%）。

2　結果

2.1色譜條件和系統適用性對照品溶液色譜峰的理論板數大于3 000，空白溶液不干擾，供試品溶液未檢出。

2.2限度范圍的確定以吸光度A對濃度C進行線性回歸，得線性回歸方程：y=0.158 8x+0.001 4，相關系數（r）=0.999 8。見表1。5-HMF在1.16～3.48 μg/mL內線性良好，經計算吸光度為0.32時濃度應為2.006 297 μg/mL，即限度應為0.020%，參考《中國藥典2010版二部》，將5-HMF控制在0.020%（按葡萄糖含量計算）左右，葡萄糖溶液濃度為10 mg/mL時，5-HMF對照品溶液濃度應為2.0 μg/mL。

表1　5-HMF線性試驗結果（紫外吸收）

2.3定量限與檢測限定量限約為0.4 ng，檢測限約為0.2 ng。

2.4線性試驗以濃度對峰面積進行線性回歸，得線性回歸方程：y=81358x-53.1，r=0.999 9，見表2。5-HMF在1.45～2.61 μg/mL內線性良好。

表2　5-HMF測定線性試驗結果（HPLC法）

2.5溶液重復性試驗RSD=0.27%，說明本品重復性良好。見表3。

表3　5-HMF重復性試驗測定結果

2.6回收率試驗RSD=1.1%，說明采用HPLC測定5-HMF含量回收率高，準確度良好。見表4。

表4　5-HMF含量測定回收率試驗結果（HPLC法）

2.7溶液穩定性試驗RSD=0.07%，說明對照品溶液在室溫下8 h內基本穩定。見表5。

表5　配伍溶液及5-HMF穩定性試驗測定結果

2.8配伍液中5-HMF的變化各批樣品配伍溶液中的5-HMF均小于限度0.02%。見表6。

表6　5-HMF測定結果

3　討論

3.1色譜條件的選擇。對照品溶液進行紫外掃描，最大吸光度值在284 nm，故選該波長進行檢測。采用了鹽酸法舒地爾含量的色譜條件，鹽酸法舒地爾和5-HMF可以同時檢測，相互不干擾。

3.2文獻［3］中關于鹽酸法舒地爾和葡萄糖注射液的配伍，在配伍8 h內外觀、pH、含量及液相色譜峰形無明顯變化，說明相互配伍未見化學反應及結構的改變，且不溶性微粒符合藥典規定。本研究結果表明，鹽酸法舒地爾注射液和葡萄糖注射液在配伍8 h內沒有產生5-HMF，說明配伍沒有問題，可以安全使用。

3.3HPLC用于檢測鹽酸法舒地爾注射液和葡萄糖注射液配伍中的5-HMF含量，結果滿意，可作為國內同類產品的借鑒，在研發藥品過程中，要考慮使用過程中產生的風險，尤其是對注射用藥品，要對配伍液進行考察。

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Determination of 5-HMF in compatibility solution of Fasudil Hydrochloride Injection and Glucose Injection by HPLC

ChengYongke，LiRui，ChenZuli
（ZhongshuaiPharmaceuticalScience&TechnologyCo.，Ltd.，Zhengzhou，Henan451000，China）

ObjectiveTo establish a HPLC method for determining the 5-HMF content in the compatibility solution of Fasudil Hydrochloride Injection and Glucose Injection by HPLC.MethodsThe HPLC method was adopted with the chromato graphic column of Wetch C18column（150 mm×4.6 mm，5 μm），the mobile phase was 0.05 mol/L ammonium dihydrogen phosphateacetonitrile（89∶11），the flow rate was 1.0 mL/min，the column temperature was maintained at 25℃，the detection wavelength was 284 nm，the injection volume was 20 μL.Results5-HMF had good linear relation in the range of 1.45-2.61 μg/mL（r=0.999 8）. The average recovery rate was 97.4%（RSD=1.1%）.ConclusionAdopting the HPLC method for detecting the 5-HMF content in the compatibility solution of Fasudil Hydrochloride Injection and Glucose Injection is simple，accurate and reliable.

Chromatography，high pressure liquid；Hydrochloric acid；Glucose；Injectio；Drug incompatibility；Furaldehyde/analogs&derivatives

10.3969/j.issn.1009-5519.2016.09.013

A

1009-5519（2016）09-1317-03

程永科（1981-），碩士研究生，工程師，主要從事化藥新藥的研發工作。

（2016-01-12）