CD103+T細(xì)胞在銀屑病皮損中的表達(dá)

郝志敏　欒　超　胡　煜　楊永紅　劉　毅　陳　敏　崔盤根

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·論著·

CD103+T細(xì)胞在銀屑病皮損中的表達(dá)

郝志敏欒超胡煜楊永紅劉毅陳敏崔盤根

目的：明確銀屑病患者皮膚CD103+T細(xì)胞的表達(dá)及其與銀屑病嚴(yán)重程度的關(guān)系。方法：免疫組化檢測(cè)29例銀屑病患者皮損和非皮損及6名健康對(duì)照皮膚中表皮及真皮CD103+T細(xì)胞的表達(dá)。結(jié)果：CD103+T細(xì)胞主要在真皮表達(dá)。銀屑病患者皮損和非皮損真皮中每個(gè)高倍視野CD103+T細(xì)胞百分率分別為(26.06±11.72)%和(12.82±4.50)%(P<0.05)；健康人對(duì)照皮膚真皮內(nèi)CD103+T細(xì)胞百分率為(7.47±1.30)%，明顯低于銀屑病非皮損區(qū)(P<0.05)。銀屑病患者皮損中，CD103+T的表達(dá)與PASI值正相關(guān)(P<0.05)。 結(jié)論：真皮中CD103+T細(xì)胞可能與銀屑病的發(fā)病及嚴(yán)重程度有關(guān)。

銀屑病；CD103+T細(xì)胞；免疫組化

銀屑病是一種T細(xì)胞介導(dǎo)的慢性炎癥性皮膚病[1]。有研究認(rèn)為：黏附分子，包括整合素，調(diào)節(jié)皮膚中T細(xì)胞的功能，從而影響銀屑病的發(fā)生和發(fā)展[2,3]。CD103是整合素αEb7的αE亞基，具有獨(dú)特的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)。它只表達(dá)于特定的免疫細(xì)胞，如上皮內(nèi)T細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞、肥大細(xì)胞、T調(diào)節(jié)細(xì)胞。并通過氨基酸148～337域，綁定到E-鈣黏素上[4]。其主要作用有：控制效應(yīng)T細(xì)胞和記憶T細(xì)胞、介導(dǎo)移植物抗宿主反應(yīng)、對(duì)抗腫瘤發(fā)生、控制T調(diào)節(jié)細(xì)胞(Treg)和樹突狀細(xì)胞的定位和作用[5]。有證據(jù)顯示，T細(xì)胞表達(dá)CD103不局限于經(jīng)典的黏膜部位，而且在不同種類的上皮細(xì)胞中也表達(dá)，如肺和皮膚。近來有報(bào)道顯示在感染性皮膚病和皮膚腫瘤中CD103也起作用[6,7]。關(guān)于CD103在銀屑病發(fā)病機(jī)制中的作用，研究甚少，目前還未見文獻(xiàn)報(bào)道銀屑病真皮中CD103+T細(xì)胞的情況。我們通過免疫組化技術(shù)檢測(cè)銀屑病患者皮損、非皮損中CD103的表達(dá)，分析其與銀屑病皮損嚴(yán)重程度關(guān)系及臨床意義。

1　病例和方法

1.1病例資料臨床或組織病理學(xué)診斷為進(jìn)行期尋常型銀屑病(斑塊狀)患者29例，男19例、女10例，年齡19～59歲，平均(39.2±10.0)歲，病程1周～20年，PASI評(píng)分5.2～46，平均17.1±10.6。患者近4周內(nèi)未應(yīng)用糖皮質(zhì)激素或免疫抑制劑等系統(tǒng)治療，未合并其他皮膚病及自身免疫性疾病和腫瘤等病史。經(jīng)本院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)并征得患者知情同意，皮膚鉆孔法活檢取材，除皮損外同時(shí)切取皮損臨近2 cm處正常皮膚作為非皮損組織(均取自背部)。健康人對(duì)照皮膚6名，取自我院外科整形手術(shù)多余的正常皮膚(取自背部)，其中男5例、女1例，年齡19～46歲，平均(32.2±8.6)歲。患者和健康對(duì)照組在性別和年齡上比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

1.2試劑兔抗人CD103單克隆抗體均產(chǎn)自英國Abcam公司。磷酸鹽緩沖液(PBS)由美國Gibco公司生產(chǎn)。枸櫞酸抗原修復(fù)緩沖液、內(nèi)源性過氧化氫酶抑制劑、非免疫動(dòng)物血清(羊)、辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記抗兔IgG、蘇木素和中性樹膠均產(chǎn)自福州邁新生物技術(shù)有限公司。

1.3方法

1.3.1免疫組化在軀干皮損處按常規(guī)鉆孔取直徑約5 mm皮膚標(biāo)本，經(jīng)甲醛固定，將組織制成蠟塊后連續(xù)切成5 μm，免疫組化染色按照染色試劑盒操作說明進(jìn)行，所有切片均在同一質(zhì)控條件下進(jìn)行，設(shè)陽性和陰性對(duì)照。染色為AEC染色，陽性為棕黃色。

1.3.2結(jié)果判定CD103陽性表達(dá)定位于細(xì)胞膜和胞質(zhì)，結(jié)果為棕黃色顆粒。隨機(jī)選取真皮中5個(gè)顯微鏡高倍視野(×200)，計(jì)算陽性表達(dá)T細(xì)胞的平均百分比。

2　結(jié)果

29例銀屑病患者皮損和非皮損、6名正常人對(duì)照皮膚中均可見表達(dá)CD103+T細(xì)胞。29例銀屑病患者皮損中CD103+T細(xì)胞分布廣泛，包括表皮和真皮淺深層，主要分布在真皮，其中26例表皮內(nèi)可見陽性細(xì)胞，數(shù)量少(未統(tǒng)計(jì))。非皮損中CD103+T細(xì)胞主要分布在真皮內(nèi)，16例表皮內(nèi)可見陽性細(xì)胞，數(shù)量極少。6名健康人對(duì)照皮膚中CD103+T細(xì)胞主要分布于真皮淺層，1例表皮內(nèi)可見陽性細(xì)胞(圖1)。

1a:皮損中，CD103+T細(xì)胞分布廣泛，包括表皮和真皮淺深層，主要分布在真皮(HE,×100)；1b:非皮損中， CD103+T細(xì)胞主要分布在真皮淺層(HE，×100)；1c:正常對(duì)照，皮膚中CD103+T細(xì)胞少量分布于真皮淺層(HE,×100)

圖1銀屑病皮損CD103連續(xù)切片染色結(jié)果表皮和真皮均有CD103+T細(xì)胞，見棕黃色顆粒

銀屑病患者皮損真皮每個(gè)顯微鏡高倍視野中CD103+T細(xì)胞平均百分率明顯高于非皮損，及健康人對(duì)照皮膚(表1)。銀屑病患者皮損中CD103+T細(xì)胞百分率與PASI評(píng)分呈正相關(guān)(r=0.43，P<0.05)(圖2)。

表1　銀屑病患者皮膚真皮CD103+T細(xì)胞百分率比較

注：a皮損組與非皮損組比較，t=7.19，P<0.05；b皮損組與健康對(duì)照組比較，t=2.84，P<0.05；c非皮損組與健康對(duì)照組比較，t=9.03，P<0.05

圖2　銀屑病患者皮損中CD103+T細(xì)胞百分率

3　討論

目前普遍認(rèn)同，T細(xì)胞在銀屑病的發(fā)病機(jī)制中起了關(guān)鍵性的作用。活化的T細(xì)胞先從外周血管和淋巴管進(jìn)入皮膚真皮，引起真皮炎癥，然后進(jìn)入表皮導(dǎo)致角質(zhì)形成細(xì)胞的增生[8]。有研究提示，CD103分子有助于T細(xì)胞與角質(zhì)形成細(xì)胞的黏附[9-11]。Teraki等[3]研究發(fā)現(xiàn)，銀屑病患者非皮損中不表達(dá)CD103+T細(xì)胞，皮損表皮中CD103+T細(xì)胞明顯高于真皮，表皮CD8+CD103+T細(xì)胞明顯高于CD4+CD103+T細(xì)胞；另有研究表明，正常皮膚中，20%～30%表皮CD8+T細(xì)胞表達(dá)CD103，而在活動(dòng)期銀屑病患者皮損表皮中，高達(dá)50% CD8+T細(xì)胞表達(dá)CD103[9]。以上研究主要闡述了銀屑病皮損表皮中CD103+T細(xì)胞的表達(dá)和功能，但目前對(duì)真皮中CD103+T細(xì)胞的研究尚不明確。在此項(xiàng)研究中，我們首次發(fā)現(xiàn)并指出，在銀屑病患者的皮損中，CD103不僅表達(dá)于表皮中T細(xì)胞，更重要的是也能在真皮活化的T細(xì)胞上大量表達(dá)。本段開頭我們已經(jīng)討論過，活化的T細(xì)胞是由真皮進(jìn)入表皮，引起表皮增生。我們研究發(fā)現(xiàn)，銀屑病患者皮損和非皮損真皮中CD103+T細(xì)胞的表達(dá)明顯高于正常對(duì)照，提示CD103+T細(xì)胞在銀屑病發(fā)病機(jī)制中起到重要作用。

銀屑病作為一種慢性炎癥性皮膚病，病程長，易反復(fù)，但其機(jī)制目前尚不清楚。炎癥階段高TGF-β(由成纖維細(xì)胞、肥大細(xì)胞、角質(zhì)細(xì)胞分泌)或維A酸誘導(dǎo)下，T細(xì)胞與抗原相互作用，表達(dá)CD103[3，12]。CD103+T細(xì)胞在慢性炎癥狀態(tài)組織內(nèi)高表達(dá)(如腫瘤、感染及一些自身免疫性疾病)，其主要功能可能是作為抵御腫瘤和炎癥的第一線[6,13,14]。本研究發(fā)現(xiàn)銀屑病皮損真皮中CD103+T細(xì)胞百分比明顯高于非皮損，再次證實(shí)了CD103+T細(xì)胞的數(shù)量與銀屑病皮損的形成有關(guān)。有趣的是，在我們另一篇已發(fā)表的相關(guān)研究中，我們發(fā)現(xiàn)在銀屑病患者皮損處，皮損消退前后CD103+CD69+T細(xì)胞數(shù)量無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異[15]，提示CD103可能與銀屑病的反復(fù)發(fā)作相關(guān)。

Eysteinsdottir等[11]曾研究發(fā)現(xiàn)銀屑病患者外周血中CD103+T細(xì)胞數(shù)目與PASI評(píng)分密切相關(guān)，但他們未研究皮損中CD103+T細(xì)胞的情況。在銀屑病活動(dòng)期，大量表達(dá)IL-17A和IL-22的CD103+T細(xì)胞(包括CD4+T，CD8+T)遷移入皮損真皮和表皮。IL-17A具有募集炎癥細(xì)胞作用，而IL-22參與角質(zhì)細(xì)胞激活以及棘細(xì)胞層增厚[9]。我們研究發(fā)現(xiàn)銀屑病皮損真皮中CD103+T細(xì)胞與PASI相關(guān)，和病情嚴(yán)重程度一致。進(jìn)一步證實(shí)了CD103+T細(xì)胞參與銀屑病病情發(fā)展。并提示CD103+T細(xì)胞可以作為評(píng)估銀屑病病情嚴(yán)重程度的實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)。

綜上所述，銀屑病患者皮損真皮中CD103+T細(xì)胞表達(dá)明顯高于非皮損及健康皮膚，并與銀屑病病情嚴(yán)重程度相關(guān)，真皮中的CD103+T細(xì)胞在銀屑病發(fā)病機(jī)制中起一定作用。由于免疫組化法同時(shí)檢測(cè)3種表面標(biāo)記存在困難，我們尚未區(qū)別CD103+T細(xì)胞屬于CD4+T細(xì)胞還是CD8+T細(xì)胞亞群。在Pauls等[10]研究中，CD8+CD103+T細(xì)胞主要表達(dá)于銀屑病皮損表皮中，CD4+CD103+T細(xì)胞主要表達(dá)于真皮中。而CD4+CD103+T細(xì)胞屬于記憶T調(diào)節(jié)細(xì)胞，而且他們的調(diào)節(jié)能力與CD103 T細(xì)胞表達(dá)水平相關(guān)[16]，有文獻(xiàn)支持這一細(xì)胞與某些炎癥疾病慢性化有關(guān)[17]。推測(cè)真皮中CD103+T細(xì)胞主要為CD4+T細(xì)胞。但其功能、活化機(jī)制以及調(diào)節(jié)機(jī)制還有待進(jìn)一步研究。

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(收稿：2015-04-26修回：2015-10-29)

Expression of CD103+T cells in psoriatic lesions

HAOZhimin,LUANChao,HUYu,YANGYonghong,LIUYi,CHENMin,CUIPangen.

ChineseAcademyofMedicalSciencesandPekingUnionMedicalCollege,Nanjing210042,China

CHENMin,E-mail:drchenmin@126.comCUIPangenE-mail:pangencui@126.com

Objective: To detect the level of CD103+T lymphocytes in psoriatic lesions and to determine the relationship with the severity of psoriasis. Methods: CD103+T lymphocytes in dermis and epidermis of the lesions and non-lesional skin from 29 patients with psoriasis and skin from 6 healthy controls were detected by immunohistochemical staining. Results: CD103+T lymphocytes mainly distributed in dermis. The mean percentage of CD103+T lymphocytes in lesions, non-lesional skin and normal skin was (26.06±11.72)%, (12.82±4.50)% and (7.47±1.30)% and there were significant differences among the groups (P<0.05). There was a positive correlation between the level of CD103+T lymphocytes and the PASI score (P<0.05). Conclusion: CD103+T lymphocytes in the dermis may associate with the occurrence and severity of psoriasis.

psoriasis; CD103+T lymphocytes; immunohistochemical staining

衛(wèi)生公益性行業(yè)科研專項(xiàng)經(jīng)費(fèi)項(xiàng)目(編號(hào)：201002016)

中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院皮膚病醫(yī)院，江蘇省皮膚病與性病分子生物學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，南京，210042

陳敏，E-mail:drchenmin@126.com

崔盤根，E-mail:pangencui@126.com