納米包裝材料對金針菇木質化及相關酶活性的影響

方東路，常詩潔，趙立艷，安辛欣，胡秋輝，楊文建,

（1.南京農業大學食品科技學院，江蘇 南京 210095；2.南京財經大學食品科學與工程學院，江蘇省現代糧食流通與安全協同創新中心，江蘇 南京 210023）

納米包裝材料對金針菇木質化及相關酶活性的影響

方東路1，常詩潔1，趙立艷1，安辛欣1，胡秋輝2，楊文建2,*

（1.南京農業大學食品科技學院，江蘇 南京 210095；2.南京財經大學食品科學與工程學院，江蘇省現代糧食流通與安全協同創新中心，江蘇 南京 210023）

添加納米銀、納米二氧化鈦、凹凸棒土和納米二氧化硅等材料制備一種納米聚乙烯包裝袋。跟蹤檢測4 ℃、相對濕度90%～95%貯藏過程中金針菇的菌柄最大剪切力、質量損失率、可溶性蛋白含量、木質素含量、苯丙氨酸解氨酶活性、肉桂醇脫氫酶活性、過氧化物酶活性和細胞微觀結構的變化，分析納米材料和普通聚乙烯材料包裝對金針菇木質化劣變的影響。貯藏14 d后，納米包裝袋內金針菇菌柄最大剪切力、質量損失率和苯丙氨酸解氨酶、肉桂醇脫氫酶、過氧化物酶活性分別為1.191 kg、0.51%和20.72、41.23、10.09 U/mg，顯著低于普通PE包裝組（P＜0.05）；另一方面，納米包裝金針菇樣品中的木質素含量相比最初僅增加4.7%，而普通PE包裝組木質素含量則增加了14.2%。納米包裝袋能夠有效抑制貯藏期間金針菇木質素的積累及相關酶活性的上升，很好地保持金針菇貯藏品質，延長貯藏時間。

金針菇；納米材料；保鮮；木質化；貨架期

金針菇（Flammulina velutipes （Fr.） Sing.），又名構菇、樸菇、毛柄金錢菌等，是我國六大食用菌類之一，2012年我國金針菇產量已達240.1萬 t［1］。新鮮的金針菇呈淡黃色或白色，柄脆、菌蓋滑嫩、味美適口、營養豐富，具有多種食療保健功能，深受消費者的喜愛。但由于金針菇子實體含水量高、質地脆嫩，采后呼吸和新陳代謝旺盛，使得金針菇子實體非常容易出現菇失水、柄木質化、開傘、萎蔫、褐變、甚至腐爛等品質劣變現象，常溫條件下僅能保存2～3 d，4 ℃貯藏保質期也僅保存7 d左右［2］。金針菇的貯藏特性成為制約金針菇產業發展的一個重要問題。因此，針對以上問題，研發一種既有利于金針菇等食用菌貯藏且使用便捷的保鮮技術手段，對延長金針菇貨架期、減少企業生產銷售環節的損失具有十分重要的研究意義和應用前景。

目前來看，食用菌的保鮮方法主要集中在涂膜保鮮［3］、氣調保鮮［4］、臭氧保鮮［5］、輻照處理［6］等。不同保藏方法具有不同的優勢和限制，在實際企業的生產銷售過程中應用較多的是冷藏結合自發性氣調的方式。納米級的包裝材料由于其特殊的組成和結構，具備了傳統包裝材料所不具備的獨特性能［7］，由于納米材料良好的抗菌性、乙烯消除特性、阻濕性等［8-9］，它更適合鮮活農產品的貯藏保鮮，近年來越來越受到國內外研究的關注［10-11］。Zhao Liyan等［12］利用納米材料保藏綠茶，發現納米包材可以減少綠茶保藏過程中的氨基酸、茶多酚、葉綠素和維生素的流失。Hu Qiuhui等［13］的研究發現納米包材可以顯著提高獼猴桃冷藏中的營養品質和抗氧化酶的活性，并將貯藏期延長至42 d。類似的實驗結果在草莓貯藏保鮮中也得到了驗證［14］。另一方面，有研究表明食用菌的木質化與其硬度、成熟度與褐變度等多種品質變化密切相關［15］。但國內外木質化劣變的研究主要集中在枇杷果、竹筍、蘆筍、菜心、胡蘿卜、番荔枝等幾個品種上［16-19］，目前關于金針菇采后的木質化劣變的研究鮮見報道。在前期納米保鮮實驗的基礎上，進一步改良納米材料配方工藝，提高其阻隔性和機械強度等功能特性，并通過研究納米材料對苯丙烷類代謝途徑以及木質素積累的影響，進而分析納米材料對金針菇保鮮作用的原因，為納米保鮮技術的應用和推廣打下理論基礎。

1　材料與方法

1.1材料與試劑

實驗用金針菇（品種F3-46） 江蘇天豐生物科技有限公司。實驗于2016年5月3到18日在南京農業大學食品科技學院實驗室進行。

納米銀、納米二氧化鈦、納米二氧化硅、凹凸棒土南京海泰納米材料有限公司；牛血清蛋白、考馬斯亮藍G-250、巰基乙醇、聚乙二醇 國藥集團化學試劑有限公司；其他試劑均為分析純。

1.2儀器與設備

ELX800酶標儀 美國Bio-Tek公司；SF-200型塑料封接機 江蘇連云港微波電器廠；TA. XT2i質構儀 英國Stable Micro Systems公司；Allegra 64R冷凍離心機 美國Beckman公司；TSY-T1透濕性測試儀、BTY-B1透氣性測試儀 上海華巖儀器設備有限公司；HH-6數顯恒溫水浴鍋 國華電器有限公司；H-7650透射電鏡 日本Hitachi公司。

1.3方法

1.3.1包裝袋制備

納米包裝膜（厚度為40 μm）的制備參考李志嘯等［20］的加工工藝。納米原料按照納米銀-納米二氧化鈦-納米二氧化硅-凹凸棒土質量比6∶7∶2∶5進行混合制粒得到納米復合粉體，然后按照納米混合粉體15%、聚乙烯塑料粒子68%、偶聯劑2%、分散劑10%、潤滑劑5%進行混勻制粒得到納米母粒，最后將納米母粒7.5%、復合塑料粒子84.5%和防霧劑母粒7.5%混勻吹制得到納米包裝膜，之后剪裁為25 cm×25 cm大小的包裝袋，應用于后面的實驗。按照同樣的工藝制備不含納米粒子相同厚度和規格的普通PE塑料薄膜包裝袋作為對照。

1.3.2樣品處理

金針菇在工廠采后用泡沫盒包裝保溫完畢，1 h內運至實驗室冷庫，在4 ℃條件下預冷24 h，之后挑選出金針菇子實體完整、無褐變、未開傘、無病蟲害、無機械傷、菌柄長度在10～15 cm的金針菇。接著進行普通PE包裝袋和納米包裝袋2 種包裝處理。每袋裝金針菇250 g，兩種包裝組各24 袋，置4 ℃相對濕度90%～95%冷藏14 d，每隔2 d拆袋取樣按照要求進行各項指標的測定。

1.3.3納米包裝袋物理性能測定

物理性能有拉伸強度、斷裂標稱應變、直角撕裂強度、透光率、透氧率、透二氧化碳率和透濕率，測定方法分別依據GB/T 1038—2000《塑料薄膜和薄片氣體透過性試驗方法：壓差法》、GB/T 21529—2008《塑料薄膜和薄片水蒸氣透過率的測定：電解傳感器法》和GB/T 1040.3—2006《塑料：拉伸性能的測定》。

1.3.4菌柄剪切力測定

參考黃艷等［21］的方法，使用TA. XT2i質構儀，選擇HDP/BSK探頭，對每個金針菇樣品菌柄中間部位分別進行切斷測定。探頭下行速率2.0 mm/s，下行距離30 mm，觸發壓力20 g。重復測定10 次，取平均值。

1.3.5質量損失率測定

采用稱質量法測定質量損失率，計算如式（1）所示：

1.3.6可溶性蛋白含量測定

采用考馬斯亮藍G-250（Bradford）法［22］，稱取4 g金針菇樣品，液氮研磨后加入36 mL磷酸緩沖液，混勻后4 000 r/min離心取上清液進行測定，計算如式（2）所示：

式中：C為標準蛋白當量/μg；VT為樣品稀釋總體積/mL；MF為樣品鮮質量/g；VS為測定時樣品加樣量/mL。

1.3.7木質素含量測定

參照Bruce等［23］的方法進行木質素含量測定。稱取l g金針菇樣品，加入5 mL 95%乙醇溶液進行研磨，經3 000×g離心7 min后，沉淀物用95%乙醇溶液沖洗3 次，再用乙醇-正己烷（l∶2，V/V）沖洗3 次，收集沉淀物并干燥，干燥物溶于25%溴乙酰冰醋酸溶液中，在70 ℃恒溫水浴中加塞保溫30 min，然后加入0.9 mL 2 mol/L NaOH溶液終止反應，再加入5 mL冰醋酸和0.l mL 7.5 mol/L的羥胺鹽酸，并用冰醋酸定容至10 mL，之后再1 000×g離心7 min，上清液在280 nm波長處測定吸光度，以每克鮮質量在280 nm波長處的吸光度表示木質素含量，測定3 次重復。

1.3.8苯丙氨酸解氨酶（phenylalnine ammonia-lyase，PAL）活性測定

PAL活性測定采用南京建成生物工程研究的試劑盒。在30 ℃條件下，每毫克組織蛋白在反應體系中每分鐘吸光度變化0.1為1 個酶活力單位（U/mg）。

1.3.9肉桂醇脫氫酶（cinnamyl alcohol dehydrogenase，CAD）活性測定

參照Goffner等［24］方法，將樣品進行液氮研磨，迅速稱取液氮研磨后粉末1 g加入到1.5 mL離心管中，加入1 mL事先預冷的0.1 mmol/L pH 6.25的磷酸鹽緩沖液（phosphate buffered saline，PBS），PBS內含15 mmol/L巰基乙醇、2%聚乙二醇和0.1 g PVP。在4 ℃條件下18 000 r/min離心20 min，取上清液200 μL加入到800 μL含10 mmol/L NADP和5 mmol/L反式肉桂酸的反應液中，之后在37℃水浴鍋中反應30 min，最后用1 mmol/L HCl溶液中止反應后，測定340 nm波長處的吸光度，以200 μL PBS加800 μL反應液為對照，實驗測定3 次重復。1.3.10 過氧化物酶（peroxidase，POD）活性測定

采用南京建成生物工程研究所生產的相應試劑盒進行POD活性測定。每毫克組織蛋白1 min催化產生1 μg的底物的酶量定義為1 個POD活力單位（U/mg）。

1.3.11透射電鏡觀察

分別切取金針菇樣品組織（2 mm×1 mm）于3.5%戊二醛中固定，0.1 mol/L pH 7.2的PBS沖洗，用1%鋨二酸固定，0.1 mol/L PBS沖洗。用35%、45%、60%、70%、85%、95%和100%的乙醇溶液梯度洗脫，接著用環氧丙烷過渡，Spurr樹脂浸透包埋，20 ℃聚合8 h后取出，修塊，在超薄切片機上切片，用醋酸雙氧鈾-檸檬酸鉛雙染色，使用透射電鏡進行觀察拍照。

1.4數據處理

數據處理利用SAS 8.2軟件進行方差分析和鄧肯多重比較差異顯著性檢驗。

2　結果與分析

2.1不同包裝物理性能分析

表1　不同包裝袋物理性能比較Table1　Physical properties of normal and nanocomposite-based packaging materials

從表1機械性能的比較可以看出，納米膜的縱向拉伸強度、縱橫向斷裂標稱應變和縱橫向直角撕裂強度較普通保鮮膜均有所增強。另外，納米膜的透二氧化碳率、透氧率和透濕率分別為13 064 cm3/（m2·d·0.1 MPa）、3 017.5 cm3/（m2·d·0.1 MPa）和6.34 g/（m2·d），均低于普通膜的各項指標。實驗表明，添加納米粒子的包裝袋具有良好的機械性能以及對氣體和水的阻隔性。

2.2納米包裝袋對金針菇菌柄最大剪切力的影響

圖1　不同包裝袋對金針菇菌柄最大剪切力的影響Fig.1　Effect of different packaging materials on maximum shearing force of Flammulina velutipes

如圖1所示，在貯藏前6 d，納米包裝和普通PE包裝的金針菇菌柄最大剪切力都隨時間推移而增長，隨后出現波動，并于第14天達到最高值。普通PE包裝金針菇菌柄剪切力在第14天為1.306 kg，顯著高于納米組處理（1.191 kg）（P＜0.05）。實驗表明普通PE包裝金針菇在貯藏末期菌柄失水、纖維化現象較為嚴重，而納米包材則較好地保持了菌柄質地和嫩度。

2.3納米包裝袋對金針菇質量損失率的影響

圖2　不同包裝袋對金針菇質量損失率的影響Fig.2　Effect of different packaging materials on weight loss of Flammulina velutipes

食用菌由于缺乏類似果皮的外保護組織結構，因此在貯藏期間除了新陳代謝消耗少量的物質外，質量損失率主要是由于水分散失而引起的品質劣變現象。從圖2可以看出，納米包裝與普通包裝的金針菇在4℃貯藏期間，其質量損失率均隨著時間的延長而逐漸增大。但是從第4天以后，納米包裝組的金針菇質量損失率顯著低于對照組（P＜0.05），貯藏14 d后納米包裝組質量損失率為0.51%。這種差異性的表現是由于不同包裝材料其透濕性能不一致（表1），納米包裝材料具有相對較小的水分透過率，有效維持了包裝袋內較高的濕度水平，進而抑制了金針菇子實體水分的進一步蒸發。

2.4納米包裝袋對金針菇可溶性蛋白含量的影響

圖3　不同包裝材料對金針菇可溶性蛋白含量的影響Fig.3　Effect of different packaging materials on soluble protein content of Flammulina velutipes

從表3可以看出，經過14 d的貯藏后，納米包裝組和普通PE包裝組金針菇可溶性蛋白含量為6.327 mg/g和5.501 mg/g，分別比貯藏初期7.712 mg/g下降了17.9%和28.7%，達到顯著水平（P＜0.05）。納米包裝材料在整個貯藏過程中對蛋白的保留效果都優于普通PE包裝。

2.5納米包裝袋對金針菇木質素含量的影響

如圖4所示，納米包裝處理可以抑制菇體內木質素的積累。對于納米包裝和普通PE包裝兩種處理，木質素的積累在第8天達到最大值。結果表明，納米包裝袋能夠延緩木質素的積累，減小木質化劣變對金針菇品質的影響。

圖4　不同包裝材料對金針菇木質素含量的影響Fig.4　Effect of different packaging materials on lignin content of Flammulina velutipes

2.6納米包裝袋對金針菇PAL活性的影響

圖5　不同包裝材料對金針菇PAL活性的影響Fig.5　Effect of different packaging materials on PAL activity of Flammulina velutipes

從圖5可以看出，普通PE包裝的金針菇PAL活性一直高于納米包裝。納米包裝組和普通PE包裝組PAL活性先升高后緩慢降低，并且均在貯藏第6天達到活性高峰，分別為23.467 U/mg和27.703 U/mg，貯藏14 d后納米包裝組PAL活性為20.72 U/mg。納米包裝可以顯著降低貯藏期間金針菇PAL活性，延緩金針菇苯丙氨酸代謝的速率，進而調控木質素的合成途徑。

2.7納米包裝袋對金針菇CAD活性的影響

圖6　不同包裝材料對金針菇CAD活性的影響Fig.6　Effect of different packaging materials on CAD activity of Flammulina velutipes

由圖6可看出，兩種包裝處理組金針菇冷藏期間CAD活性變化趨勢呈現同樣的規律，即在貯藏前4 d CAD活性呈緩慢上升趨勢，貯藏4 d后CAD活性急劇上升，并在第6天形成一個酶活的高峰，其值分別為90.23 U/mg（普通PE包裝組）和70.14 U/mg（納米包裝組）。隨后CAD活性呈下降趨勢，貯藏14 d后納米包裝組CAD活性為41.23 U/mg。實驗結果顯示，納米包裝可以顯著延緩冷藏金針菇CAD活性的上升。

2.8納米包裝袋對金針菇POD活性的影響

圖7　不同包裝材料對金針菇過POD活性的影響Fig.7　Effects of different packaging materials on POD activity of Flammulina velutipes

如圖7所示，采后金針菇POD活性迅速上升，貯藏第2天達到高峰，普通包裝組的樣品POD活性達到44.78 U/mg，顯著高于納米包裝組的26.39 U/mg（P＜0.05）。第4天后，兩組的POD活性逐漸下降，兩種包裝間的POD活性差異不大，貯藏14 d后納米包裝組POD活性為10.09 U/mg。整個貯藏過程，納米包裝處理金針菇POD活性始終低于普通PE包裝，并在前期阻止了POD活性高峰的出現，說明納米包裝可以抑制金針菇貯藏期POD活性的上升。

2.9透射電鏡觀察結果

圖8　不同包裝袋對金針菇細胞微觀結構的影響Fig.8　Effects of different packaging materials on microscopic structure of Flammulina velutipes

如圖8所示，貯藏14 d后，納米包裝金針菇細胞結構較為飽滿，胞壁結構完整。而普通PE包裝組金針菇在貯藏末期可以發現細胞形狀變形嚴重，部分細胞出現裂解破裂，內溶物溶出。

3　討 論

金針菇在采后貯運過程中，易發生失水、開傘、木質化劣變等現象，從而造成金針菇菌柄質地變硬而粗糙，嚴重降低其食用品質和經濟價值［25］。研究表明，苯丙烷類代謝途徑與果蔬采后貯藏過程中的木質化劣變密切相關［26］。苯丙烷類代謝途徑首先通過PAL等關鍵酶將苯丙氨酸合成香豆素、黃酮醇等木質素單體化合物，進一步通過CAD和POD將木質素單體的氧化聚合成木質素大分子，從而促進木質素的合成和積累［27］。

根據前人研究報道，在貯運銷售過程中，適當的包裝處理可以為食用菌提供一個適宜的貯藏環境，進而可以實現減少機械損傷、減緩子實體的生理代謝活動、提高貯藏品質的效果［28-29］。本實驗納米包裝袋中的金針菇維持著較低的最大剪切力值和質量損失率，說明納米包裝的環境適宜，金針菇失水、木質化等劣變現象不嚴重。金針菇在貯藏期間其硬度變化與其可溶性蛋白含量的變化呈正相關［30］，納米包裝處理的金針菇在貯藏末期保持了較高的可溶性蛋白含量，此結果與貯藏照片中反映出的納米包裝金針菇較好的質地相互佐證，這與單楠等［2］的研究結果一致，納米材料結合自發性氣調，可以顯著保持貯藏產品的營養品質。同時，木質素合成過程中關鍵酶PAL、CAD和POD的活性，在納米包裝處理組中得到了明顯的抑制，進而導致木質素在納米處理金針菇中積累緩慢。所以相比于普通PE包裝，納米包裝更有利于保持金針菇的質地。李志嘯等［20］的研究結果同樣發現，納米包裝處理可以減緩雙孢菇中菇體細胞壁木質素和纖維素含量的增加，抑制雙孢菇的褐變現象，提高其貯藏品質。

納米材料因為其粒子具有較大的比表面積，所以該材料可以體現出一般尺度粒子所不具備的特殊性質，并開始在食品包裝上逐漸推廣應用［31］。有研究已經證明，材料中添加的納米粒子可以氧化貯藏環境中的乙烯［32］，并抑制內源乙烯的產生［33］，從而延緩果實的成熟衰老。另外，納米材料有很好的抑菌效果，楊燕婷等［34］研究發現添加納米銀、納米二氧化鈦等原料制備成的納米材料可以顯著降低黑曲霉孢子的發芽率。納米材料的抑菌效果在Echegoyen等［35］的實驗中也被證明。納米二氧化硅由于其比表面積大、耐熱性好，被廣泛運用于包裝材料中，在母粒制備過程中，納米二氧化硅也可以作為納米銀粒子的吸附載體之一，納米二氧化硅的添加還可以增強包材的形態學與機械性能［36］。納米包裝袋的縱向拉伸強度、直角撕裂強度和斷裂標稱應變3 個指標均優于普通PE包裝袋。另一方面，納米材料的低滲透性可以調節袋內濕度和氣體成分，使氧氣和二氧化碳的濃度達到適當比例，既維持了金針菇較低的呼吸強度，又避免了高濃度二氧化碳的傷害，同時也抑制了金針菇的蒸騰和呼吸作用，進而減緩木質化劣變相關的生理生化活動，在貯藏末期較好地保存了營養成分，保持了金針菇良好的質地和對病害病菌的抵抗力，從而達到延緩品質劣變和衰老的作用。

此外，由于防霧劑、分散劑等輔助劑的添加，造成納米袋在透明度上有所欠缺，可能會影響包裝產品的美觀度，這個問題在后續的研究中有待進一步改進。另一方面，對于聚合物基納米復合材料，其材料中添加的活性成分是否會遷移到包裝對象中以及因此產生的安全風險，還需要進一步實驗研究［37-38］。由于聚合物與納米粒子間的相互作用，并且納米粒子添加量很低，食品形態的多樣性等因素造成納米粒子與包裝食品接觸情況比較復雜，傳統的測定評價方法無法客觀、準確地反映食品包裝中納米粒子的安全性。綜上，如何全面、系統地評價食品包裝中納米粒子的安全性以及活性粒子的遷移狀況，是下一步實驗研究的重點。

3　結 論

本實驗在前期研制的基礎上，制備了一種添加納米銀、納米二氧化鈦、納米凹凸棒土、納米二氧化硅的復合包裝材料，并應用于金針菇貯藏，研究其對金針菇采后品質變化和木質化劣變的影響。實驗結果表明，相比于普通聚乙烯包裝，納米包裝袋能夠較好地保持金針菇的外觀和質地，同時抑制苯丙烷類代謝途徑關鍵酶的活性，延緩木質素的積累，從而有利于金針菇在貯藏銷售期間保持良好的感官品質和營養價值，延長貨架期。納米保鮮技術在食用菌的貯藏保鮮中具有廣泛的應用前景。

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Effect of Nano-Packing on Lignification and Related Enzyme Activities of Flammulina velutipes

FANG Donglu1, CHANG Shijie1, ZHAO Liyan1, AN Xinxin1, HU Qiuhui2, YANG Wenjian2,*
（1. College of Food Science and Technology, Nanjing Agricultural University, Nanjing 210095, China；2. Collaborative Innovation Center for Modern Grain Circulation and Safety, College of Food Science and Engineering, Nanjing University of Finance and Economics, Nanjing 210023, China）

A polyethylene （PE） packing material containing nano-Ag, nano-TiO2, attapulgite and nano-SiO2was prepared and applied in the preservation of Flammulina velutipes and its effects on sensory quality and lignification of F. velutipes were determined during 14-day storage at 4 ℃. The influence of nano-packing material on the lignification of F. velutipes was studied by tracking the changes in texture, weight loss, soluble protein contents, lignin contents, the activities of phenylalnine ammonialyase （PAL）, cinnamyl alcohol dehydrogenase （CAD）, and peroxidase （POD） as well as cell microstructure. The normal PE material was used as control. After 14 days of storage, the maximum shearing force, weight loss, PAL, CAD and POD activities of F. velutipes packed with nano-packing material were 1.191 kg, 0.51%, 20.72 U/mg, 41.23 U/mg, 10.09 U/mg, respectively, which were significantly lower than those of the control （P ＜ 0.05）. On the other hand, the lignin content in nano-packaging samples increased by 4.7% while that in the control increased by 14.2% compared with the initial level. Nano-packing material has the potential to maintain the preservation quality and extend the shelf life of F. velutipes by inhibiting the accumulation of lignin and increasing the related enzyme activities.

Flammulina velutipes； nano-packing； preservation； lignifi cation； shelf-life

10.7506/spkx1002-6630-201620044

TS206.4

A

1002-6630（2016）20-0261-07

方東路, 常詩潔, 趙立艷, 等. 納米包裝材料對金針菇木質化及相關酶活性的影響［J］. 食品科學, 2016, 37（20）： 261-267.

DOI：10.7506/spkx1002-6630-201620044. http：//www.spkx.net.cn

FANG Donglu, CHANG Shijie, ZHAO Liyan, et al. Effect of nano-packing on lignification and related enzyme activities of Flammulina velutipes［J］. Food Science, 2016, 37（20）： 261-267. （in Chinese with English abstract） DOI：10.7506/spkx1002-6630-201620044. http：//www.spkx.net.cn

2016-06-20

江蘇省自然科學基金項目（BK20141009）；國家自然科學基金青年科學基金項目（31401552）

方東路（1989—），男，博士研究生，研究方向為食用菌貯藏保鮮。E-mail：fangdonglu_@126.com

楊文建（1981—），男，副教授，博士，研究方向為食品加工與貯藏保鮮。E-mail：lingwentt@163.com