梔子褐斑病抑菌藥劑篩選△

羅光明，董艷凱，朱玉野，胡燕珍，龔雨虹，王曉云

(江西中醫(yī)藥大學 藥學院，江西 南昌 330004)

梔子褐斑病抑菌藥劑篩選△

羅光明，董艷凱，朱玉野，胡燕珍，龔雨虹，王曉云*

(江西中醫(yī)藥大學 藥學院，江西 南昌 330004)

目的對引起梔子褐斑病的病原菌葡萄座腔菌Botryosphaeriadothidea抑菌藥劑進行室內(nèi)篩選試驗，研究常用殺菌劑對病原菌菌絲生長的抑制作用。方法選用常見的17種殺菌劑，通過菌絲生長抑制方法，分別對病原菌進行抑菌效果測定，并建立藥劑濃度和抑制率的毒力回歸方程，通過方程計算EC50，篩選出有效的抑菌藥劑，為防治該病的發(fā)生提供理論依據(jù)。結果除了氯霉素、鹽酸四環(huán)素、鏈霉素、寡糖鏈蛋白之外，其他藥劑均對葡萄座腔菌有不同程度的抑制作用，其中以多菌靈的殺菌效果最好，回歸方程為Y=1.10X+5.88(r=0.990，EC50=0.31 μg·mL-1)，其次為五硝多菌靈、百菌清、甲基硫菌靈、咪鮮三環(huán)唑，回歸方程分別為Y=1.26X+5.14(r=0.995，EC50=1.34 μg·mL-1)、Y=1.12X+3.66(r=0.956，EC50=6.65 μg·mL-1)、Y=1.27X+3.94(r=0.984，EC50=9.89 μg·mL-1)、Y=2.04X+3.41(r=0.913，EC50=9.95 μg·mL-1)。結論篩選出了抑制褐斑病病原菌的有效藥劑。

梔子；褐斑病；藥劑篩選

梔子來源于茜草科(Rubiaceae)植物梔子GardeniajasminoidesEllis的干燥成熟果實，其性寒味苦，歸心肺三焦經(jīng)，具有泄火除煩，清熱利尿，涼血解毒之功效，用于黃疸尿赤，血淋澀痛，尿血崩漏等[1]，梔子原產(chǎn)中國中部，分布于長江以南各省，現(xiàn)在世界各地廣泛栽培，主要含環(huán)烯醚萜類、西紅花苷類、黃酮類等成分，是衛(wèi)生部頒布的第1批藥食兩用資源。梔子還有很多其他用途，梔子是古代應用廣泛的黃色染料，現(xiàn)代還用于提取工業(yè)染料和食用色素。國內(nèi)外對于梔子的需求量很大，且不斷上升，具有很好的市場前景[2]。

目前國內(nèi)外對梔子的需求量日益增加，具有廣闊的市場前景，栽培面積不斷擴大[3]。褐斑病為梔子栽培中的主要病害之一，病害全年都可能發(fā)生，嚴重時植株落葉、落果或枯死，直接影響藥材的產(chǎn)量和質量，造成巨大的經(jīng)濟損失。防治手段也僅限于病害發(fā)生初期或發(fā)生期施用多菌靈、退菌特等。病害控制應在明確病原的前提下針對性的進行，才能取得最優(yōu)的防治效果。本研究通過在實驗室培養(yǎng)梔子褐斑病病原菌，用不同的殺菌劑對病菌進行處理，篩選防治梔子褐斑病最有效的藥劑，為梔子褐斑病的防治提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗概況

梔子褐斑病病原菌為病變組織經(jīng)常規(guī)組織分離法[4]分離培養(yǎng)得到，確定為葡萄座腔菌Botryosphaeriadothidea。

1.2 供試藥劑及濃度

供試藥劑見表1。每種藥劑設置5個濃度梯度，每個濃度重復3次，以無菌水為對照。

表1 供試藥劑

1.3 病原菌的室內(nèi)藥劑毒力測定

殺菌劑對病原菌菌絲生長的抑制作用采用菌絲生長速率法來測定。將選用的藥劑用無菌水配制成一定濃度的母液，使用時稀釋成不同的濃度梯度，按照倍數(shù)稀釋法用移液槍吸取1 mL藥液加入到100 mL已滅菌的PDA培養(yǎng)基中，使培養(yǎng)基中藥劑的濃度達到所需的倍數(shù)。取6 mm直徑的菌餅接種于含藥的PDA平板中央，菌絲面朝下，每皿1個菌絲塊。以接種加1 mL無菌水的培養(yǎng)基為空白對照，每個處理設置3次重復。置于30 ℃培養(yǎng)箱中恒溫黑暗培養(yǎng)，72 h后采用十字交叉法對菌落直徑進行測量，計算殺菌劑對菌絲生長的抑制率，求建立抑制率和藥劑濃度的毒力回歸方程，并比較幾種供試藥劑的毒力大小。抑菌率=(對照菌落凈直徑-處理菌落凈直徑)/(對照菌落凈直徑-0.6)×100%。取藥劑濃度的對數(shù)值為X，菌絲生長相對抑制率的機率值為Y，采用spss 19.0計算毒力回歸方程，相關系數(shù)(r)及EC50值。

2 結果與分析

2.1 病害癥狀調查結果

褐斑病為真菌性病害，全年都可發(fā)生，但以高溫高濕的多雨炎熱夏季為害最重。主要發(fā)生在植株的中、下部葉片，發(fā)病從下部葉片開始，多從葉尖和葉緣處發(fā)生，病斑呈現(xiàn)不規(guī)則形[5]，內(nèi)部淡褐色而周邊略呈角型濃淡有差別的同心輪紋病斑。病重時病斑直徑可達2～3 cm。以后病斑變成黑褐色，嚴重時植株落葉、落果或枯死。一般種植密度大、土壤粘重、環(huán)境潮濕條件下病害發(fā)生更為嚴重。

2.2 不同殺菌劑對葡萄座腔菌的抑制效果

通過測定供試的17種殺菌劑對病原菌的室內(nèi)毒力可以看出不同藥劑的抑制效果差異明顯(表2)。其中以多菌靈的抑菌效果最好，EC50為0.31 μg·mL-1，其次為五硝多菌靈、百菌清、甲基硫菌靈、咪鮮三環(huán)唑，EC50分別為1.34、6.65、9.89、9.95 μg·mL-1。氯霉素、鹽酸四環(huán)素、鏈霉素、寡糖鏈蛋白無明顯的抑菌效果，抑制率與殺菌劑濃度之間未達到顯著水平。其余藥劑在設置的不同濃度下對病原菌的生長都有一定的抑制作用，供試殺菌劑的相關系數(shù)均達到顯著或極顯著差異，即毒力回歸方程成立。具體結果見表2。殺菌劑的毒力回歸方程斜率值越大表明病原菌對該殺菌劑敏感性越強。由表2的回歸方程可知，每種藥劑的毒力回歸方程斜率與藥劑毒力成正比。此次試驗只測定殺菌劑對病原菌的室內(nèi)毒力，大田防效還有待進一步試驗研究[6]。

表2 不同殺菌劑對葡萄座腔菌的毒力比較

續(xù)表2

注：*表示存在顯著性差異

3 討論

褐斑病各地普遍發(fā)生。發(fā)病后期病斑穿孔或完整，降低梔子的觀賞性[7]。褐斑病病害癥狀隨著植物種屬和病原菌株系等不同而表現(xiàn)不同。作者在基地調查時發(fā)現(xiàn)光照充足、栽培密度低、通風性好、環(huán)境濕度低的基地中褐斑病發(fā)病率普遍較低，建議在生產(chǎn)中加大植株個體間的距離，從而改善梔子在發(fā)病季節(jié)的整體表現(xiàn)，提高植株的綜合抗病或耐病能力，減輕病害的蔓延趨勢，盡可能地避免或減少病害發(fā)生所造成的危害。

藥劑防治是植物病害防治的關鍵。而在藥劑的選擇時，最重要的是要考慮藥劑對病原菌的殺滅能力，而通過測定殺菌劑的室內(nèi)毒力可以更清楚地了解殺菌劑對褐斑病病原菌的作用大小[6]。本試驗結果反映了不同類型殺菌劑對病菌的抑制效果，篩選出了5種最為有效的殺菌劑，多菌靈的抑菌效果最為明顯。抑菌藥劑篩選結果表明，不同的化學殺菌劑處理病原菌抑制作用的差異具有統(tǒng)計學意義。本研究為梔子褐斑病的防治提供了理論依據(jù)。

[1] 倪慧艷，張朝暉，傅海珍.中藥梔子的研究與開發(fā)概述[J].中國中藥雜志，2006，31(7)：538-541.

[2] 羅光明，董艷凱，朱玉野，等.不同產(chǎn)地梔子種子同工酶比較[J].江蘇農(nóng)業(yè)科學，2015，43(8)：244-247.

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[4] 孫廣宇，宗兆鋒.植物病理學實驗技術[M].北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2002：94.

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[6] 趙金梅，高貴田，谷留杰，等.中華獼猴桃褐斑病病原鑒定及抑菌藥劑篩選.中國農(nóng)業(yè)科學[J].2013，46(23)：4916-4925.

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GardeniaLeafSpotScreeningAntibioticsAgents

LUOGuangming，DONGYankai，ZHUYuye，HUYanzhen，GONGYuhong，WANGXiaoyun*

(JiangxiuniversityoftraditionalChinesemedicinecollegeofpharmacy，Nanchang330004，China)

Objective：Common fungicides were screened indoor to study their inhibitory effect to mycelial growth of Botryosphaeria，which proved the pathogenic fungus of brown blotch in gardenia.MethodsChose 17 common fungicides，determined their inhibitory effect by mycelial growth inhibition method and established toxicity regression equation of agent concentration and inhibition ratio.The EC50 was calculated by the equation and effective fungicides were screened out accordingly，meanwhile，theoretical basis was provided for controlling the disease.ResultsExcept chloramphenicol、tetracycline hydrochloride、streptomycin and oligosaccharide chain protein，all the other agents were showed different inhibition to Botryosphaeria，of which the carbendazim had the best sterilizing effect with the regression equation was Y=1.10X+5.88(r=0.990，EC50=0.31 μg·mL-1).The next were five nitrate carbendazim、chlorothalonil、thiophanate-methyl、prochloraztricyclazole，the regression equation were Y=1.26X+5.14(r=0.995，EC50=1.34 μg·mL-1)、Y=1.12X+3.66(r=0.956，EC50=6.65 μg·mL-1)、Y=1.27X+3.94(r=0.984，EC50=9.89 μg·mL-1)、Y=2.04X+3.41(r=0.913，EC50=9.95 μg·mL-1)respectively.Conclude Screened out the effective fungicide to inhibit pathogenic fungus of brown blotch.

Ggardenia;leaf spot;antibacterial agents

2015-10-13)

基于分子遺傳圖譜構建和重要性狀QTL定位的梔子種質資源創(chuàng)新(20151BBG70037)；國家公益性行業(yè)科研專項資助項目(201507002)

*

王曉云，副教授，研究方向：中藥種質資源與分子生藥學研究；Tel：(0791)87119061，E-mail：326322962@qq.com

10.13313/j.issn.1673-4890.2016.8.020