老年腮腺病變性質(zhì)鑒別診斷及COX-2、cyclinD1的表達(dá)

王　斌

(海口市第三人民醫(yī)院放射影像科，海南　海口　570208)

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老年腮腺病變性質(zhì)鑒別診斷及COX-2、cyclinD1的表達(dá)

王斌

(海口市第三人民醫(yī)院放射影像科，海南海口570208)

目的采用MR敏感加權(quán)成像(SWI)鑒別診斷老年腮腺良、惡性病變，分析COX-2、cyclinD1在腮腺惡性病變腫瘤組織中的表達(dá)情況。方法首診未接受任何治療和病理檢查的腮腺疾病老年患者行MR-SWI掃描，比較良、惡性病變各MR-SWI掃描觀察指標(biāo)；以病理為診斷金標(biāo)準(zhǔn)，受試者工作特征(ROC)曲線分析MR-SWI鑒別診斷老年腮腺病變性的效能。采用免疫組化S-P法檢測(cè)腮腺惡性病變腫瘤組織、預(yù)留的正常腮腺組織(源于腮腺外傷老年患者)中環(huán)氧合酶(COX)-2、細(xì)胞周期蛋白(cyclin)D1表達(dá)情況。結(jié)果老年腮腺良性病變以周邊分布為主，占89.47%(17/19)，惡性病變以靜脈中央分布為主，占84.62%(11/13)，兩者差異顯著(χ2=19.771，P<0.01)；將靜脈中央分布為診斷惡性病變標(biāo)準(zhǔn)，診斷惡性病變的敏感性為84.61%，特異度89.47%，準(zhǔn)確度87.50%。最大靜脈直徑(dmax)診斷惡性病變的敏感性為84.61%，特異度94.74%，準(zhǔn)確度90.63%；磁敏感信號(hào)強(qiáng)度(ITSS)分級(jí)診斷惡性病變的敏感性為84.61%，特異度84.21%，準(zhǔn)確度84.38%。腺泡細(xì)胞癌中COX-2、cyclinD1陽(yáng)性表達(dá)率分別為54.55%、63.64%；低分化鱗癌中COX-2、cyclinD1陽(yáng)性表達(dá)率分別為62.50%、50.00%；多形性腺瘤中COX-2、cyclinD1陽(yáng)性表達(dá)率均為71.43%；COX-2、cyclinD1在腮腺惡性病變組織中陽(yáng)性表達(dá)率均明顯高于腮腺正常組織(P<0.01)。結(jié)論MR-SWI提供的腫瘤內(nèi)組織靜脈分布、dmax、ITSS分級(jí)可用于老年腮腺良惡性病變的鑒別診斷，其中dmax的應(yīng)用價(jià)值最高；COX-2、cyclinD1在老年腮腺惡性病變組織中高表達(dá)，與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展可能有關(guān)。

敏感加權(quán)成像；環(huán)氧合酶-2；細(xì)胞周期蛋白1

目前，僅憑MRI動(dòng)態(tài)增強(qiáng)和多層CT(MSCT)掃描在鑒別診斷腮腺腫瘤方面仍存在較大難度〔1〕。MR敏感加權(quán)成像(SWI)對(duì)腫瘤組織內(nèi)的靜脈血管結(jié)構(gòu)和血液代謝物有較強(qiáng)的敏感性，有利于腫瘤性質(zhì)的鑒別診斷。環(huán)氧合酶(COX)-2是一種誘導(dǎo)酶，可促進(jìn)腫瘤血管生成和細(xì)胞增殖，在腫瘤形成、侵襲、轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要作用。細(xì)胞周期蛋白(cyclin)D1是一種細(xì)胞周期調(diào)控蛋白，在細(xì)胞周期G1～S期轉(zhuǎn)變中發(fā)揮關(guān)鍵作用，cyclinD1表達(dá)異常多出現(xiàn)在腫瘤細(xì)胞中，可促進(jìn)細(xì)胞增殖〔2〕。本研究分析腮腺惡性病變患者腫瘤組織中COX-2、cyclinD1表達(dá)情況，為老年腮腺疾病的臨床診治提供參考。

1　資料與方法

1.1一般資料選取2013年10月至2015年10月本院收治的經(jīng)手術(shù)病理證實(shí)的腮腺疾病老年患者64例。入組條件：①首診為腮腺病，未接受過(guò)任何相關(guān)治療；②來(lái)本院就診前未接受穿刺活檢等病理檢查；③自愿參與本次研究并簽署知情同意書。術(shù)前均行CT和MRI常規(guī)序列掃描以及SWI序列掃描，其中男17例，女15例；年齡60～87〔平均(72.15±12.08)〕歲。

1.2影像學(xué)檢查采用德國(guó)西門子NOVUS 1.5T 超導(dǎo)MRI儀，行腮腺區(qū)和上頸部橫斷面T1WI、T2WI平掃及T1W動(dòng)態(tài)增強(qiáng)、SWI掃描。對(duì)各序列圖像進(jìn)行分析，內(nèi)容包括：病灶內(nèi)靜脈分布情況，最大靜脈直徑(dmax)，靜脈數(shù)量，腫瘤磁敏感信號(hào)強(qiáng)度(ITSS)；本次研究依據(jù)Kim等標(biāo)準(zhǔn)將ITSS分為四級(jí)：0級(jí)：瘤體組織內(nèi)無(wú)低信號(hào)；1級(jí)：1～5個(gè)點(diǎn)狀樣或細(xì)線樣低信號(hào)；2級(jí)：6～10個(gè)點(diǎn)狀樣、細(xì)線樣低信號(hào)；3級(jí)：11個(gè)及以上點(diǎn)狀樣或細(xì)線樣低信號(hào)。SWI圖：瘤內(nèi)靜脈表現(xiàn)為粗細(xì)不均，直線或迂曲走行的管狀結(jié)構(gòu)，或連續(xù)層面能夠追蹤的低信號(hào)點(diǎn)，邊界清晰。

1.3病理檢查入選患者均手術(shù)切除患側(cè)腮腺病灶腫物，10%甲醛溶液固定過(guò)夜，常規(guī)行石蠟包埋，0.4 μm連續(xù)切片，蘇木素-伊紅(HE)染色，光學(xué)顯微鏡下觀察病變組織中血管大小、分布和形態(tài)。

1.4COX-2、cyclinD1水平檢測(cè)采用免疫組化染色(S-P法)檢測(cè)，取腮腺惡性病變患者病灶組織石蠟切片和預(yù)留的20個(gè)正常腮腺組織石蠟切片(源于腮腺外傷老年患者)，常規(guī)脫蠟、水化，高壓熱修復(fù)抗原，3%小牛血清封閉，滴加兔抗人COX-2多克隆抗體(1∶200)、兔抗人cyclinD1單克隆抗體(1∶200)，滴加辣根過(guò)氧化物酶(HRP)標(biāo)記的鏈霉卵白素，SP復(fù)合物、二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色、復(fù)染，磷酸鹽緩沖液(PBS)代替一抗作陰性對(duì)照，已知腮腺惡性病變組織切片為陽(yáng)性對(duì)照。染色結(jié)果采用Image Pro Plus 6.0軟件分析。每張切片200倍放大下觀察5個(gè)視野，計(jì)算陽(yáng)性細(xì)胞占總細(xì)胞數(shù)的比值，分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)：陰性為<10%，弱陽(yáng)性為≥10%、陽(yáng)性為≥30%、強(qiáng)陽(yáng)性為≥50%。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法應(yīng)用SPSS15.0軟件，計(jì)量資料行兩組間的t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料進(jìn)行χ2檢驗(yàn)；MR-SWI鑒別診斷的效能采用受試者工作特征(ROC)曲線分析。

2　結(jié)　果

2.1MR-SWI與病理檢查情況32例患者經(jīng)病理證實(shí)良性病變38例，其中多形性腺瘤26例、腺淋巴瘤6例，結(jié)核、肉芽腫性炎、木村病各2例。其中比例最高的多形性腺瘤SWI圖像，可見(jiàn)低信號(hào)走行于瘤體周圍，與小動(dòng)脈伴行。病理圖片可觀察到腫瘤細(xì)胞呈條索狀排列，周邊肌上皮細(xì)胞呈梭形，排列成一層，可見(jiàn)小靜脈，腫瘤中央無(wú)粗大脈管。經(jīng)病理證實(shí)惡性病變26例，其中腺泡細(xì)胞癌11例、低分化鱗癌8例、多形性腺瘤7例。其中腺泡細(xì)胞癌SWI圖像可見(jiàn)瘤體中央?yún)^(qū)域有低信號(hào)靜脈，直徑約為3.8 mm；病理圖片可見(jiàn)導(dǎo)管樣排列的腫瘤細(xì)胞，細(xì)胞質(zhì)偏酸性，瘤體中央?yún)^(qū)域存在大小不一的靜脈和最大靜脈。低分化鱗癌SWI圖像可見(jiàn)瘤體中央?yún)^(qū)域有低信號(hào)靜脈；病理圖片中癌細(xì)胞成團(tuán)排列，可見(jiàn)癌珠、細(xì)胞間橋，瘤體中央有較大靜脈。多形性腺瘤SWI圖像可見(jiàn)瘤體邊緣有低信號(hào)靜脈走行，直徑約1.0 mm；病理圖片中腫瘤細(xì)胞排列成管狀或腺樣，可見(jiàn)其周圍有肌上皮細(xì)胞圍繞，瘤體邊緣有較大靜脈，為多形性腺瘤改變。

2.2腮腺良惡性病變影像學(xué)指標(biāo)比較腮腺惡性病變靜脈直徑明顯大于良性靜脈直徑(P<0.01)；腮腺惡性病變ITSS分級(jí)多為2～3級(jí)，良性病變ITSS分級(jí)多為1級(jí)，良惡性病變ITSS分級(jí)之間差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；良、惡性病變單位面積內(nèi)靜脈數(shù)量之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表1。

表1　腮腺良惡性病變影像學(xué)指標(biāo)比較±s)

2.3MR-SWI鑒別診斷腮腺良惡性病變效能腮腺良性病變中，靜脈中央分布4例，周邊分布34例；惡性病變中，靜脈中央分布22例，周邊分布4例；兩者有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(χ2=19.771，P<0.01)；將腮腺病灶靜脈中央分布為診斷惡性病變標(biāo)準(zhǔn)，診斷惡性病變的敏感性為84.61%(22/26)，特異度為89.47%(34/38)，準(zhǔn)確度為87.50%(56/64)。

以病理為診斷金標(biāo)準(zhǔn)，繪制dmax、ITSS分級(jí)的ROC曲線，見(jiàn)圖1，得到dmax、ITSS的最佳臨界值為1.75 mm、1.5級(jí)，鑒別診斷效能見(jiàn)表2。以約登指數(shù)最大作為標(biāo)準(zhǔn)，其鑒別診斷腮腺病變性質(zhì)的ROC曲線下面積(AUC)值分別為0.935、0.867。

圖1　腮腺惡性病變最大靜脈內(nèi)徑、ITSS鑒別診斷的ROC曲線分析

檢測(cè)指標(biāo)靈敏度特異性準(zhǔn)確度dmax84.61%(22/26)94.74%(36/38)90.63%(58/64)ITSS分級(jí)84.61%(22/26)84.21%(32/38)84.38%(54/64)

2.4COX-2在腮腺惡性病變組織中的表達(dá)情況見(jiàn)圖2。COX-2陽(yáng)性切片中，可見(jiàn)呈棕黃色的陽(yáng)性顆粒，多分布于胞質(zhì)。10例正常腮腺組織標(biāo)本中僅1例(10.00%)存在部分上皮細(xì)胞胞質(zhì)中COX-2陽(yáng)性表達(dá)。腺泡細(xì)胞癌中COX-2陽(yáng)性表達(dá)率54.55%(6/11)，低分化鱗癌中COX-2陽(yáng)性表達(dá)率62.50%(5/8)，多形性腺瘤中COX-2陽(yáng)性表達(dá)率71.43%(5/7)。COX-2在腮腺惡性病變組織中陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于腮腺正常組織(P<0.01)。

A.正常腮腺組織陰性表達(dá)；B.腺泡細(xì)胞癌中陽(yáng)性表達(dá)；C.低分化鱗癌中陽(yáng)性表達(dá)；D.多形性腺瘤中陽(yáng)性表達(dá)；下圖同圖2　COX-2在正常腮腺組織及惡性病變組織中表達(dá)(DAB，×400)

2.5cyclinD1在腮腺惡性病變組織中的表達(dá)情況cyclinD1陽(yáng)性切片中可見(jiàn)呈棕褐色的陽(yáng)性顆粒，主要分布于胞核中，少數(shù)分布于胞質(zhì)中。正常腮腺組織中基本無(wú)cyclinD1表達(dá)，腺泡細(xì)胞癌中cyclinD1陽(yáng)性表達(dá)率63.64%(7/11)，低分化鱗癌中cyclinD1陽(yáng)性表達(dá)率50.00%(4/8)，多形性腺瘤中cyclinD1陽(yáng)性表達(dá)率71.43%(5/7)。cyclinD1腮腺惡性病變組織中陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于腮腺正常組織(P<0.01)。見(jiàn)圖3。

圖3　cyclinD1在正常腮腺組織及惡性病變組織中表達(dá)(DAB，×400)

3　討　論

SWI與傳統(tǒng)MRI成像不同，主要運(yùn)用分別收集強(qiáng)度和相位數(shù)據(jù)的方式，通過(guò)后期處理將相位信息與強(qiáng)度信息相互疊加，可更加突出病灶組織間的磁敏感性差異。因此，SWI能夠較好地反映出腫瘤組織中的引流靜脈、微血管生成、并發(fā)微出血等情況，有助于對(duì)瘤體性質(zhì)的鑒別診斷〔3〕。COX-2是一種可誘導(dǎo)型酶，體內(nèi)多數(shù)組織在正常生理情況下檢測(cè)不到其存在，在細(xì)胞外多種刺激因子作用下才可誘發(fā)表達(dá)。相關(guān)研究顯示，多種癌前病變和惡性腫瘤中存在COX-2高表達(dá)，而COX-2可促進(jìn)腫瘤組織內(nèi)血管生存，刺激腫瘤細(xì)胞增殖，抑制凋亡，提升腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)〔4〕。cyclinD1在具有增殖活性的正常細(xì)胞中呈周期性表達(dá)，而其過(guò)度表達(dá)會(huì)引發(fā)多種細(xì)胞周期相關(guān)因子表達(dá)紊亂，誘導(dǎo)細(xì)胞過(guò)度增殖產(chǎn)生腫瘤〔5〕。

本次研究顯示，老年腮腺良性病變的靜脈分布以周邊為主，惡性病變以中央為主，且SWI檢查與病理結(jié)果一致。主要與腫瘤生長(zhǎng)、增殖方式有關(guān)，良性腫瘤生長(zhǎng)緩慢且病程長(zhǎng)，以膨脹性方式生長(zhǎng)，病灶對(duì)周圍組織表現(xiàn)為推壓、移位，因此靜脈可隨機(jī)分布在腫瘤組織邊緣；惡性腫瘤多為浸潤(rùn)性生長(zhǎng)，增殖速度快，對(duì)周圍組織和血管多表現(xiàn)為包埋、破壞，因此靜脈多分布于腫瘤中央〔6〕。本次研究中SWI檢查顯示，老年腮腺良性病變的dmax明顯小于惡性病變，與病理表現(xiàn)一致。ITSS能夠較為直觀地反映出瘤體中靜脈或微出血，本次研究中老年腮腺良惡性病變的ITSS分級(jí)之間有明顯差異，良性病變的ITSS分級(jí)以1級(jí)為主，惡性病變以2～3級(jí)為主。ITSS分級(jí)直接反映出瘤體內(nèi)靜脈和微血管病灶的分布數(shù)量。

在鑒別診斷老年腮腺良惡性病變效能方面，ITSS分級(jí)鑒別診斷敏感性、特異性和準(zhǔn)確度與病理診斷基本相當(dāng)，而dmax指標(biāo)在鑒別診斷效能要優(yōu)于靜脈分布和ITSS分級(jí)。因此MR-SWI提供的腫瘤內(nèi)組織靜脈分布、dmax、ITSS分級(jí)可用于老年腮腺良惡性病變的鑒別診斷，其中以dmax的應(yīng)用價(jià)值最高。

本次研究中COX-2與cyclinD1表達(dá)率總體上呈正相關(guān)，惡性腫瘤組織中COX-2表達(dá)率上升時(shí)，cyclinD1表達(dá)率也跟著增加，提示COX-2可能誘導(dǎo)cyclinD的協(xié)同表達(dá)，進(jìn)而促進(jìn)腮腺組織細(xì)胞異常增殖、分化、癌變，但其機(jī)制仍需要深入研究。

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〔2015-12-17修回〕

(編輯袁左鳴)

王斌(1975-)，男，主治醫(yī)師，主要從事放射影像方面研究。

R455

A

1005-9202(2016)18-4564-03；doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2016.18.081