六味地黃口服液薄層色譜鑒別研究＊

劉金坤，王　琴，白殊同，高洪燕，喻曉雯，吳　斌

(重慶市中醫(yī)院，重慶400021)

六味地黃口服液薄層色譜鑒別研究＊

劉金坤，王琴，白殊同，高洪燕，喻曉雯，吳斌

(重慶市中醫(yī)院，重慶400021)

目的建立鑒別六味地黃口服液中中藥材的薄層色譜（TLC）法。方法采用TLC法對(duì)六味地黃口服液中牡丹皮、山茱萸、澤瀉、茯苓、山藥5味中藥進(jìn)行定性鑒別。結(jié)果薄層色譜分離度好，鑒別斑點(diǎn)清晰，特征斑點(diǎn)專屬性強(qiáng)，陰性對(duì)照品溶液無干擾。結(jié)論該法結(jié)果準(zhǔn)確、可靠、重復(fù)性好，可用于六味地黃口服液的質(zhì)量控制。

六味地黃口服液;薄層色譜法;牡丹皮;山茱萸;澤瀉;茯苓;山藥

六味地黃方具有滋補(bǔ)腎陰之功效，用于治療頭暈耳鳴、腰膝酸軟、遺精盜汗等。其傳統(tǒng)的劑型為大蜜丸，隨著制藥技術(shù)的發(fā)展，逐漸出現(xiàn)了水丸、水蜜丸、濃縮丸、片劑、膠囊劑、滴丸、口服液等不同的劑型［1-2］。六味地黃口服液是六味地黃丸的改進(jìn)劑型，由熟地、山茱萸、牡丹皮、澤瀉、山藥及茯苓6味中藥組方，具有口感好、服用方便、起效迅速、吸收快、生物利用度高等優(yōu)點(diǎn)。目前，口服液質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)采用薄層掃描法測(cè)定山茱萸中熊果酸的含量，以吸收系數(shù)法測(cè)定牡丹皮中丹皮酚的含量［3］。2010年版、2015年版《中國(guó)藥典（一部）》均無六味地黃口服液的薄層鑒別［4］。筆者采用薄層色譜（TLC）法鑒定其中的牡丹皮、山茱萸、澤瀉、茯苓、山藥5味中藥材，作為檢測(cè)該制劑的指標(biāo)，以期為改進(jìn)該制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供參考。

1　儀器與試藥

1.1儀器

BT25S型電子天平(德國(guó)賽多利斯集團(tuán)公司); Q-250DB型超聲波清洗器（昆山市超聲波儀器有限公司）;HH-S11-2型恒溫水浴鍋（上海躍進(jìn)醫(yī)療器械廠），薄層層析硅膠G板、GF254板（青島海洋化工集團(tuán)公司，10 cm×20 cm）;UV-1型三用紫外分析儀（上海顧村電光儀器廠）;ThermoPico17離心機(jī)(美國(guó)Thermo Fisher Scientific公司);TGL-16G型高速離心機(jī)（上海醫(yī)用分析儀器廠）;Thermo ScientificTMBarnsteadTMPacificTMTIIⅡ級(jí)純水儀(美國(guó)Thermo Fisher Scientific公司)。

1.2試藥

牡丹皮對(duì)照藥材（批號(hào)為121490-201102）、山茱萸對(duì)照藥材（批號(hào)為121495-200702）、澤瀉對(duì)照藥材(批號(hào)為121081-201406)、茯苓對(duì)照藥材(批號(hào)為121117-201308)、山藥對(duì)照藥材（批號(hào)為121137-201305），均由中國(guó)食品藥品檢定研究院提供;六味地黃口服液（安徽黃山市天目藥業(yè)有限公司，批號(hào)為141201，150501，150801，規(guī)格為每瓶10 mL）;甲醇、乙酸乙酯、正己烷、氯仿、石油醚、甲苯、甲酸甲酯、甲酸(分析純，重慶西南化學(xué)試劑有限公司)，水為超純水。

2　方法與結(jié)果

2.1牡丹皮

取樣品(批號(hào)為150801)10 mL，50℃烘干，殘?jiān)蛹状? mL溶解，作為供試品溶液。另取牡丹皮對(duì)照藥材1 g，加甲醇20 mL，超聲提取30 min，離心5 min (8 000 r/min)，濾過，上清液濃縮為1 mL，作為對(duì)照藥材溶液。按六味地黃口服液處方制備缺牡丹皮陰性樣品，同法制成陰性對(duì)照品溶液。吸取上述3種溶液各2 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G254薄層板上，以氯仿-醋酸乙酯-甲醇-甲酸（40∶5∶10∶0.2）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以2%香草醛硫酸乙醇溶液，紫外燈(254 nm)檢測(cè)。供試品溶液色譜中，在與對(duì)照藥材溶液色譜相應(yīng)位置上顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性對(duì)照品溶液無干擾，見圖1A。

2.2山茱萸

取樣品(批號(hào)為150801)10 mL，50℃烘干，殘?jiān)蛹状? mL溶解，作為供試品溶液。取山茱萸對(duì)照藥材粉末0.5 g，加醋酸乙酯10 mL，超聲處理15 min，離心5 min (8 000 r/min)，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状? mL溶解，作為對(duì)照藥材溶液。按六味地黃口服液處方制備缺山茱萸陰性樣品，同法制成陰性對(duì)照品溶液。吸取上述3種溶液各5 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-醋酸乙酯-冰醋酸(12∶4∶0.5）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品溶液色譜中，與對(duì)照藥材溶液色譜相應(yīng)位置上顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性對(duì)照品溶液無干擾，見圖1B。

2.3澤瀉

取樣品(批號(hào)為150801)10 mL，50℃烘干，殘?jiān)蛹状? mL溶解，作為供試品溶液。取澤瀉對(duì)照藥材粉末0.5 g，加甲醇10 mL，超聲處理15 min，離心5 min (8 000 r/min)，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状? mL溶解，作為對(duì)照藥材溶液。按六味地黃口服液處方制備缺澤瀉陰性樣品，同法制成陰性對(duì)照品溶液。吸取上述3種溶液各5 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷-醋酸乙酯-丙酮（4∶2∶1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以2%香草醛硫酸溶液-乙醇(4∶1）溶液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品溶液色譜中，與對(duì)照藥材溶液色譜相應(yīng)位置上顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性對(duì)照品溶液無干擾，見圖1C。

2.4山藥

取樣品(批號(hào)為150801)10 mL，50℃烘干，殘?jiān)蛹状? mL溶解，作為供試品溶液。取山藥對(duì)照藥材粉末1 g，加甲醇20 mL，加熱回流1 h，離心5 min (8 000 r/min)，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)尤爰状? mL溶解，作為對(duì)照藥材溶液。按六味地黃口服液處方制備缺山藥陰性樣品，同法制成陰性對(duì)照品溶液。吸取上述3種溶液各5 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以正丁醇-冰醋酸-水(4∶1∶1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品溶液色譜中，與對(duì)照藥材溶液色譜相應(yīng)位置上顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性對(duì)照品溶液無干擾，見圖1D。

2.5茯苓

取樣品(批號(hào)為150801)10 mL，50℃烘干，殘?jiān)蛹状? mL溶解，作為供試品溶液。取茯苓對(duì)照藥材粉末2 g，加乙醚20 mL，超聲處理30 min，離心5 min (8 000 r/min)，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状? mL溶解，作為對(duì)照藥材溶液。按六味地黃口服液處方制備缺澤瀉陰性樣品，同法制成陰性對(duì)照品溶液。吸取上述3種溶液各2 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G254薄層板上，以氯仿-醋酸乙酯-甲酸(10∶1∶0.2）為展開劑，展開，取出，晾干，紫外燈(254 nm)檢測(cè)。供試品溶液色譜中，與對(duì)照藥材溶液色譜相應(yīng)位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性對(duì)照品溶液無干擾，見圖1E。

圖1　薄層色譜圖

3　討論

2015年版《中國(guó)藥典(一部)》記載了六味地黃丸、濃縮丸、軟膠囊、顆粒劑的薄層色譜鑒別方法，部分方法提取、鑒別比較煩瑣，未見口服液的鑒別方法。因此，筆者對(duì)六味地黃口服液劑型進(jìn)行薄層色譜鑒別，并對(duì)藥典的方法進(jìn)行了改進(jìn)。本試驗(yàn)直接采用醋酸乙酯超聲提取，按照熊果酸的檢測(cè)方法，采用甲苯-醋酸乙酯-冰醋酸(12∶4∶0.5）為展開劑，色譜斑點(diǎn)唯一，適用于鑒別［5-6］。

鑒別牡丹皮藥材時(shí)，按照2015年版《中國(guó)藥典(一部)》檢測(cè)方法，以環(huán)己烷-醋酸乙酯-冰醋酸（4∶1∶0.1）為展開劑，以2%香草醛硫酸乙醇溶液為顯色劑，但色譜斑點(diǎn)較少，同時(shí)斑點(diǎn)分離效果并不理想。因此，改用氯仿-醋酸乙酯-甲醇-甲酸（40∶5∶10∶0.2）為展開劑，可以得到多個(gè)斑點(diǎn)［7-8］。

鑒別茯苓藥材時(shí)，以1∶1的乙醚-石油醚（60～90℃）為展開劑展開，晾干，噴以磷鉬酸試液，105℃下加熱顯色，結(jié)果斑點(diǎn)拖尾較嚴(yán)重，且陰性對(duì)照品溶液有干擾，故未采用此方法。后采用10%硫酸乙醇溶液作為顯色試劑，可檢測(cè)出色譜斑點(diǎn)。但紫外檢測(cè)法既可減少硫酸試劑的使用，又可靈敏地檢測(cè)色譜斑點(diǎn)［9-10］。

鑒別澤瀉藥材時(shí)，曾嘗試乙醚-食鹽水、氯仿-鹽酸-水混合液的方法制備供試品溶液，結(jié)果顯色斑點(diǎn)較少，故改為甲醇處理，同時(shí)展開劑改為環(huán)己烷-醋酸乙酯-丙酮（4∶2∶1），獲得較理想的斑點(diǎn)［11-12］。

鑒別山藥藥材時(shí)，2015年版《中國(guó)藥典(一部)》以二氯甲烷為提取試劑，對(duì)環(huán)境污染較大，改進(jìn)后采用甲醇提取。同時(shí)，對(duì)其中展開劑加以改良，以正丁醇-冰醋酸-水(4∶1∶1）為展開劑。試驗(yàn)中曾以10%磷鉬酸乙醇溶液、茚三酮、10%硫酸乙醇顯色劑，經(jīng)比較，以10%硫酸乙醇顯色效果最佳［13-14］。

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Identification of Liuwei Dihuang Oral Liquid by TLC

Liu Jinkun，Wang Qin，Bai Shutong，Gao Hongyan，Yu Xiaowen，Wu Bin
（Chongqing Traditional Chinese Medicine Hospital，Chongqing，China400021）

ObjectiveTo explore the thin layer chromatography（TLC）method for identification of the Chinese herbal components in Liuwei Dihuang Oral Liquid.MethodsThe method for determination of Paeonia suffruticosa，Cornus officinalis，Alisma，F(xiàn)uling，and Chinese Yam in Liuwei Dihuang Oral Liquid was established utilizing TLC method.ResultsThe TLC spots were fairly clear and the characteristic spots corresponded well while the negative control revealed no interference.ConclusionTLC is proved to be convenient，accurate and stable for identifying the five herbs，which can be served as the quality control of Liuwei Dihuang Oral Liquid.

Liuwei Dihuang Oral Liquid；TLC；Paeonia suffruticosa；Cornus officinalis；Alisma；Fuling；Chinese Yam

R284.1;R286.0

A

1006-4931（2016）13-0068-03

劉金坤（1985-），男，執(zhí)業(yè)中藥師，研究方向?yàn)橹兴幩幚碜饔脵C(jī)制，(電話)023-67633702(電子信箱)liujinkun007@163.com;吳斌，博士研究生，主任中醫(yī)師，主要從事風(fēng)濕病與老年病的基礎(chǔ)與臨床研究工作，本文通訊作者，(電子信箱)wuubinn@126.com。

2016-02-20;

2016-03-02）

＊重慶市科委科技專項(xiàng)，項(xiàng)目編號(hào):cstc2015jbky330025011;重慶市衛(wèi)生局中醫(yī)藥科技重點(diǎn)項(xiàng)目，項(xiàng)目編號(hào):2012-1-6。