正交設(shè)計(jì)優(yōu)選皂礬洗劑的水提工藝

陳　珂，黃　銳，任桂林，趙　劍，明俊男，楊文信，楊春艷，蒲清榮

（1.四川省瀘州市食品藥品檢驗(yàn)所，四川瀘州646000;2.西南醫(yī)科大學(xué)附屬中醫(yī)醫(yī)院，四川瀘州646000）

正交設(shè)計(jì)優(yōu)選皂礬洗劑的水提工藝

陳珂1，黃銳2，任桂林2，趙劍2，明俊男2，楊文信2，楊春艷2，蒲清榮2

（1.四川省瀘州市食品藥品檢驗(yàn)所，四川瀘州646000;2.西南醫(yī)科大學(xué)附屬中醫(yī)醫(yī)院，四川瀘州646000）

目的優(yōu)選皂礬洗劑的提取工藝。方法以苦參堿為指標(biāo)，對(duì)加水量、浸泡時(shí)間、提取時(shí)間、提取次數(shù)4個(gè)影響因素進(jìn)行考察，采用正交試驗(yàn)法優(yōu)選皂礬洗劑的提取工藝。結(jié)果皂礬洗劑的最佳水提工藝是，按處方比例稱取藥材，加入10倍量水，浸泡1.5 h，提取3次，每次1 h。結(jié)論優(yōu)選的水提工藝簡(jiǎn)單可行，穩(wěn)定可靠，具可操作性和重復(fù)性。

皂礬洗劑;水提工藝;正交設(shè)計(jì);苦參堿

皂礬洗劑來源于西南醫(yī)科大學(xué)附屬中醫(yī)醫(yī)院皮膚科楊文信教授的多年臨床經(jīng)驗(yàn)總結(jié)，由苦參Radix Sophorae Flavescentis、皂角Gleditsia Sinensis、白礬Alum等7味中藥組成，可殺菌止癢、清熱燥濕，可用于脂溢性皮炎，或其他可能引起油脂分泌異常的疾病，如銀屑病、濕疹、頭癬等的輔助治療，且具有一定的抑菌功能［1］。苦參中含苦參堿，具有抗菌作用［2-3］。因此本試驗(yàn)中選用苦參堿作為指標(biāo)成分，采用正交試驗(yàn)法對(duì)皂礬洗劑的提取工藝進(jìn)行了篩選。

1　儀器與試藥

1.1儀器

LC-20AT型高效液相色譜儀(日本島津);AUW120D型電子天平(日本島津);JP型全數(shù)字超聲波發(fā)生器(武漢嘉鵬電子有限公司);DB211型電熱鼓風(fēng)干燥箱(成都電烘箱廠);BO-200T型多功能粉碎機(jī)(永康鉑歐五金廠); HH型數(shù)顯電熱恒溫水浴箱(江蘇國(guó)勝實(shí)驗(yàn)儀器廠)。

1.2試藥

苦參堿對(duì)照品(批號(hào)為110805-200508)，購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院;甲醇，乙腈(色譜純)，水為哇哈哈純凈水，其余試劑均為分析純;處方中藥材均購(gòu)自瀘州百草堂中藥飲片有限公司，經(jīng)西南醫(yī)科大學(xué)附屬中醫(yī)醫(yī)院趙劍主任中藥師鑒定，均符合2015版《中國(guó)藥典（一部）》相關(guān)項(xiàng)下規(guī)定。

2　方法與結(jié)果

2.1正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)及因素水平

取苦參、皂角、白礬等7味中藥，采用加水煎煮法提取有效成分，以加水量（因素A）、浸泡時(shí)間（因素B）、提取時(shí)間（因素C）、提取次數(shù)（因素D）為因素，采用正交試驗(yàn)法安排試驗(yàn)，以干浸膏收率、提取物中有效成分苦參堿相對(duì)含量作為評(píng)價(jià)指標(biāo)，優(yōu)選皂礬洗劑的最佳水提取工藝。因素水平見表1。按處方比例稱取適量藥材9份，每份275 g，按表1中9種工藝條件組合加水提取，提取液濃縮成稠浸膏，備用。

表1　L9(34)正交試驗(yàn)因素水平表

2.2干浸膏收率測(cè)定

取2.1項(xiàng)下得到的稠浸膏，置已烘干至恒重的蒸發(fā)皿中，水浴蒸干，于80℃烘至恒重，計(jì)算干浸膏收率［(干浸膏重/總藥材重)×100%］。

2.3苦參堿含量測(cè)定

2.3.1色譜條件及系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱:Inertsil ODS-SP C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm);流動(dòng)相:乙腈-0.05 mol/L磷酸二氫鉀溶液(15∶85，用三乙胺調(diào)節(jié)pH為6.5)，二元高壓梯度;流速:1 mL/min;柱溫:40℃;檢測(cè)波長(zhǎng):205 nm;進(jìn)樣量: 10 μL。理論板數(shù)按苦參堿峰計(jì)算應(yīng)不低于4 000［4-6］。在此條件下的色譜圖見圖1。

2.3.2溶液制備

精密稱取減壓干燥至恒重的苦參堿對(duì)照品適量，置20 mL容量瓶中，用適量蒸餾水溶解后，再用流動(dòng)相稀釋得苦參堿質(zhì)量濃度為0.575 g/L的對(duì)照品貯備液。

圖1　高效液相色譜圖

精密吸取對(duì)照品貯備液4.0 mL至10 mL容量瓶中，以流動(dòng)相定容至刻度，搖勻，經(jīng)0.45 μm微孔濾膜濾過，即得對(duì)照品溶液。

分別取2.2項(xiàng)下干浸膏，研細(xì)，精密稱取0.2 g，置100 mL錐形瓶中，超聲提取2次，每次加氯仿20 mL，1 mL氨水，每次30 min，濾過，合并提取液，蒸干，用流動(dòng)相溶解并定容至10 mL，搖勻，經(jīng)0.45 μm微孔濾膜濾過，即得供試品溶液。

按處方比例，稱取苦參以外的中藥材適量，模擬水提工藝制成不含苦參的陰性對(duì)照樣品，按供試品制備方法制備不含苦參藥材的陰性對(duì)照品溶液。

2.3.3方法學(xué)考察

線性關(guān)系考察:取2.3.2項(xiàng)下對(duì)照品貯備液0.4，0.8，1.0，2.0，4.0 mL分別置10 mL棕色容量瓶中，流動(dòng)相定容至刻度，搖勻，取10 μL注入液相色譜儀，按擬定色譜條件進(jìn)行試驗(yàn)，記錄峰面積。以苦參堿峰面積積分值（Y）為縱坐標(biāo)、進(jìn)樣質(zhì)量濃度（X，g/L)為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得苦參堿的回歸方程為Y=8 421X-273.613，R2=0.999 6(n=5)。結(jié)果表明苦參堿進(jìn)樣質(zhì)量濃度在0.023～0.23 mg/mL與峰面積積分值呈良好的線性關(guān)系。

精密度試驗(yàn):取2.3.2項(xiàng)下同一對(duì)照品溶液10 μL，按擬訂色譜條件測(cè)定，連續(xù)進(jìn)樣6次。結(jié)果苦參堿峰面積的RSD為0.52%(n=6)，表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn):取同一供試品溶液，分別于0，1，2，4，6，8，12 h時(shí)進(jìn)樣10 μL注入液相色譜儀，測(cè)定苦參堿峰面積。結(jié)果的RSD為1.21%(n=7)，表明供試品溶液在12 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

重復(fù)性試驗(yàn):取同一樣品制備的供試品溶液6份，按2.3.1項(xiàng)下色譜條件測(cè)定苦參堿面積，結(jié)果的RSD為1.51%(n=6)，表明方法的重復(fù)性良好。

加樣回收試驗(yàn):取2.1項(xiàng)下已知含量的正交試驗(yàn)5號(hào)的供試品溶液，加入2.3.2項(xiàng)下苦參堿對(duì)照品溶液1 mL，按擬訂色譜條件進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算加樣回收率。結(jié)果見表2。

表2　苦參堿加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n=6）

2.4正交試驗(yàn)結(jié)果及方差分析

取2.1項(xiàng)下9份稠浸膏，按2.3.2項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按擬訂色譜條件進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果見表3，方差分析結(jié)果見表4。由方差分析結(jié)果可知，因素C提取時(shí)間對(duì)于指標(biāo)具有顯著影響。經(jīng)直觀分析，因素影響大小的順序?yàn)樘崛r(shí)間＞提取次數(shù)＞加水量＞浸泡時(shí)間。綜合考慮，得優(yōu)化處方條件為A3B3C2D3，即皂礬洗劑原藥材加入10倍量水，浸泡1.5 h，提取1 h，共提取3次。

2.5工藝驗(yàn)證

精密稱取3份處方中所含的藥材，照上述確定的最佳工藝條件制成皂礬洗劑，烘成干浸膏，再按2.3.2項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按擬定色譜條件進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果3批樣品浸膏收率平均值為14.85%，RSD為0.48%;所含苦參堿的平均含量為11.84 mg/g，RSD為1.35%。結(jié)果表明，該優(yōu)選工藝穩(wěn)定可行。

3　討論

預(yù)試驗(yàn)曾考察藥材粗細(xì)度、吸水率、加水量、浸泡時(shí)間、煎煮時(shí)間、提取次數(shù)對(duì)苦參堿相對(duì)含量的影響［7-9］，最終選取對(duì)提取效果相對(duì)影響較大的4個(gè)因素（加水量、浸泡時(shí)間、提取時(shí)間、提取次數(shù)）作為本試驗(yàn)的考察因素。結(jié)果表明，L9(34)正交試驗(yàn)所優(yōu)選的水提工藝穩(wěn)定可行。

表3　L9(34)正交試驗(yàn)結(jié)果

表4　方差分析結(jié)果表

皂礬洗劑以苦參為君藥，水提工藝以苦參堿作為質(zhì)量控制指標(biāo)。苦參堿含量測(cè)定方法參考了2015年版《中國(guó)藥典（一部）》苦參藥材的液相色譜條件［10］及0.05mol/L磷酸二氫銨水溶液(H3PO4調(diào)節(jié)pH為2.5)-甲醇-乙腈-高氯酸鈉(900 mL∶20 mL∶80 mL∶6 g)［11-12］，結(jié)果分離效果不好且峰形不對(duì)稱，后改用以乙腈-0.05 mol/L磷酸二氫鉀溶液(用三乙胺調(diào)節(jié)pH為6.5)流動(dòng)相并分別以不同比例測(cè)定，確定以乙腈-0.05 mol/L磷酸二氫鉀溶液(15∶85，用三乙胺調(diào)節(jié)pH為6.5)為流動(dòng)相時(shí)能較好地將苦參堿分離。參考文獻(xiàn)［13-15］，考察了C18色譜柱和氨基色譜柱下苦參堿的色譜峰形、分離度，發(fā)現(xiàn)采用適宜的流動(dòng)相比例均可達(dá)到苦參堿分離度的要求;C18色譜柱下無法檢測(cè)出氧化苦參堿，有待于進(jìn)一步驗(yàn)證。C18色譜柱較氨基色譜柱耐用，氨基色譜柱維護(hù)保養(yǎng)較復(fù)雜，故本試驗(yàn)采用C18色譜柱，這有別于藥典中采用氨基柱來測(cè)定苦參堿相對(duì)含量，可作為高效液相色譜法測(cè)定苦參堿的一種方法參考。

本試驗(yàn)中以苦參堿相對(duì)含量為指標(biāo)，通過正交試驗(yàn)法優(yōu)選水提工藝，簡(jiǎn)單可行，穩(wěn)定可靠，具可操作性和重復(fù)性，可為大規(guī)模生產(chǎn)提供理論依據(jù)。

綜上所述，苦參中苦參堿可作為提取工藝的篩選指標(biāo)，有利于提高該洗劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。所建立的HPLC法快速、準(zhǔn)確、靈敏度高，可作為皂礬洗劑生產(chǎn)過程中的質(zhì)量控制方法。

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Optimization of Water-Extraction Technology of Melanterite Lotion by Orthogonal Design

Chen Ke1，Huang Rui2，Ren Guilin2，Zhao Jian2，Ming Junnan2，Yang Wenxin2，Yang Chunyan2，Pu Qingrong2
（1.Luzhou Institute For Drug Control，Luzhou，Sichuan，China 646000；2.The Affiliated TCM Hospital of Southwest Medical University，Luzhou，Sichuan，China646000）

ObjectiveTo optimize the preparation technology of melanterite lotion.MethodsThe contents of matrine was taken as the indexes，the factors of the amount of water，time of soaking and extraction，and extraction times were investigated.Orthogonal design was used to optimize the prepartion technology for extrating melanterite lotion.ResultsThe optimal preparation technology was as follows：adding 10 folds of water，soaking for 1.5 h，extracting 3 times，1 h/time.ConclusionThe optimized preparation technology for melanterite lotion is reasonable，feasible，stable，reliable and has good reproducibility.

melanterite lotion；water-extraction technology；orthogonal design；matrine

TQ461;R286.0

A

1006-4931（2016）13-0037-03

陳珂(1970-)，女，大學(xué)本科，副主任藥師，研究方向?yàn)樗幬锓治觯?電話)0830-3162253(電子信箱)365369747@qq.com;蒲清榮，大學(xué)本科，主任藥師，研究方向?yàn)橹兴幹苿疚耐ㄓ嵶髡撸?電話)0830-3162253(電子信箱)365369747@qq.com。

2016-02-10;

2016-03-20）