高效液相色譜法測定鹽酸丁卡因注射液中鹽酸丁卡因的含量及有關物質

劉曉玲，楊麗娜，倪曉霞，王慶芬，陳錦珊

(解放軍第一七五醫院　廈門大學附屬東南醫院制劑科，福建 漳州　363000)

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高效液相色譜法測定鹽酸丁卡因注射液中鹽酸丁卡因的含量及有關物質

劉曉玲，楊麗娜，倪曉霞，王慶芬，陳錦珊

(解放軍第一七五醫院廈門大學附屬東南醫院制劑科，福建 漳州363000)

目的建立高效液相色譜法測定鹽酸丁卡因注射液中鹽酸丁卡因含量及有關物質檢查的方法。方法采用高效液相色譜法，色譜柱為Agilent ZORBAX SB-C18柱(250 mm×4.6 mm,5 μm)，流動相A和B為0.05 mol·L-1磷酸二氫鉀溶液[用稀磷酸或三乙胺調節pH值至(3.0±0.1)]和甲醇(70∶30)，梯度洗脫，流速為1.0 mL·min-1，柱溫30 °C，鹽酸丁卡因含量測定檢測波長310 nm，有關物質檢測波長為280 nm，進樣量為20 μL。結果鹽酸丁卡因在10.0～100.0 mg·L-1范圍內線性良好(r=0.999 9)，平均回收率為98.73%，RSD值為0.72%(n=9)。結論該方法精密度高、準確可靠，可用于鹽酸丁卡因注射液質量控制。

丁卡因/分析;色譜法,高壓液相

鹽酸丁卡因注射液臨床上常用于表面麻醉、神經傳導阻滯及椎管內阻滯,收載于《中國人民解放軍醫療機構制劑規范》(2002年版)[1](以下簡稱《制劑規范》)?！吨苿┮幏丁芳坝嘘P文獻[2-3]中采用電位滴定法、紫外-可見分光光度法與雙相中和滴定法測定鹽酸丁卡因含量。紫外法測定過程中吸光度值不穩定，雙相中和法在滴定分析過程中水層與氯仿層易發生乳化現象、終點突躍不明顯。鹽酸丁卡因含有酯鍵,結構不穩定,在H+、OH-或廣義酸堿的催化下易發生水解，產生對丁氨基苯甲酸、對氨基苯甲酸等雜質。為了加強鹽酸丁卡因注射液的質量控制，筆者參考相關文獻[4-6]，建立高效液相色譜法測定鹽酸丁卡因含量，并對有關物質進行檢查，現報道如下。

1　儀器與試藥

Agilent 1200 Series高效液相色譜儀；分析天平 AUX220(SHIMADZU)；實驗室超純水系統U-S15；超聲波清洗機(北京天鵬新技術有限公司)；甲醇(HPLC/spectro，TEDIA COMPANY，MS1922-801)；鹽酸丁卡因對照品 (中國藥品生物制品鑒定所，100456-200301)；對氨基苯甲酸對照品(中國藥品生物制品鑒定所，100017-200509)；對丁氨基苯甲酸對照品(中國藥品生物制品鑒定所，101183-201001)鹽酸丁卡因注射液(本院制劑室配制，批號：20150127，南制字(2006)B25008)；其余試劑均為分析純。

2　方法與結果

2.1色譜條件Agilent ZORBAX SB-C18柱(250 mm×4.6 mm,5 μm，流動相A為0.05 mol·L-1磷酸二氫鉀溶液[用稀磷酸或三乙胺調節pH值至(3.0±0.1)] -甲醇(70∶30)，流速為1.0 mL·min-1，柱溫30 °C，流動相B為甲醇，檢測波長310 nm，進樣量為20 μL，按下表進行梯度洗脫。

表1　梯度洗脫表

2.2對照品溶液配制精密稱取105 ℃干燥至恒重的鹽酸丁卡因對照品0.010 00 g，置100 mL容量瓶中，加水溶解、搖勻定容，即得濃度為100 mg·L-1的對照品儲備液。

2.3供試品溶液配制精密量取樣品溶液5.0 mL，置100 mL容量瓶中，加水定容，繼續精密量取上述溶液10.0 mL,置100 mL容量瓶中，搖勻，加水定容，經0.45 μm濾膜過濾，作為供試品溶液。

2.4系統適應性試驗在上述色譜條件下，取對照品溶液、供試品溶液(批號：20150127)分別進樣20 μL，記錄色譜圖。結果表明： 在310 nm處供試品溶液中鹽酸丁卡因保留時間為14.714 min，基線穩定，見圖1。

圖1　鹽酸丁卡因含量測定色譜圖

2.5線性關系與回歸方程分別量取鹽酸丁卡因儲備液適量于潔凈10 mL量瓶中，依次用水稀釋為每1 mL中含鹽酸丁卡因10.0、30.0、50.0、70.0、100 μg，按上述色譜條件分別進樣，記錄色譜圖。以鹽酸丁卡因質量濃度(X)為橫坐標；峰面積(Y)為縱坐標進行線性回歸，得鹽酸丁卡因的線性回歸方程Y=80.488 1X-57.427 7(r=0.999 9)，結果表明：鹽酸丁卡因的質量濃度在10.0～100.0 mg·L-1范圍內與峰面積線性關系良好，方法可行。

2.6精密度試驗取對照品溶液，按上述色譜條件連續進樣6次，記錄峰面積，結果得鹽酸丁卡因峰面積RSD為0.060%，表明方法精密度良好。

2.7重復性試驗取鹽酸丁卡因注射液(批號：20150127)，按2.3項下樣品供試液的制備方法制備供試品溶液6份，按上述色譜條件連續進樣，按外標法計算含量。結果平均含量為0.91%，RSD為0.035%(n=6)。

2.8穩定性試驗取同一批鹽酸丁卡因注射液(批號為20150127)，按2.3項下供試品溶液配制方法配制供試品溶液，分別于1、2、3、4、5、6 h時，按上述色譜條件進樣，記錄鹽酸丁卡因的峰面積，結果得鹽酸丁卡因峰面積RSD為0.032%(n=6)，表明樣品的穩定性良好。

2.9回收率試驗取鹽酸丁卡因注射液(批號：20150127)，按2.3方法配制供試品溶液，精密量取供試液5.0 mL，分別置于10 mL量瓶中，共9份；取2.2項下對照品溶液，分別精密量取2.0、2.5、3.0 mL于上述10 mL量瓶中，配制成80%、100%和120%濃度的樣品溶液各3份。按上述色譜條件進樣，記錄色譜圖，按外標法以峰面積計算含量，結果見表2。

表2　加樣回收率實驗結果

2.10樣品含量測定取3批樣品(批號為150127、140918(冷藏)、140918)，按2.3項下供試品溶液配制方法配制供試品溶液，按上述色譜條件分別進樣，記錄色譜圖，按外標法計算含量，結果見表3。

表3　鹽酸丁卡因注射液含量測定結果(n=3)

3　有關物質檢查

精密稱取對氨基苯甲酸、對丁氨基苯甲酸對照品0.01000 g、0.01070 g，分別置于50 mL量瓶中，用水溶解定容，即得200.0、214.0 mg·L-1的儲備液。分別精密量取2.2項下的鹽酸丁卡因及上述對氨基苯甲酸、對丁氨基苯甲酸對照品溶液各1 ml于10 mL容量瓶中，加水定容作為系統適用性溶液；另取批號為20140918(冷藏)、20140918、20150127三個批次產品，照2.3項下方法配制三個供試品溶液，分別注入液相色譜，以280nm作為檢測波長，進樣，結果顯示鹽酸丁卡因與兩個有關物質完全分開，如圖2所示。

4　討論

4.1檢測波長的選擇取鹽酸丁卡因對照品溶液、對氨基苯甲酸對照品溶液及對丁氨基苯甲酸溶液進行紫外可見光(200～400 nm)掃描，鹽酸丁卡因在310 nm處有最大吸收，以上兩個有關物質分別在275 nm和295 nm有最大吸收，筆者參考有關文獻[7-8]與中國藥典[9]，最后采用310 nm、280 nm雙波長測定。

注：1.對氨基苯甲酸；2.鹽酸丁卡因；3.對丁氨基苯甲酸。

4.2流動相比例選擇筆者先采用0.05 mol·L-1磷酸二氫鉀溶液[用稀磷酸或三乙胺調節pH值至(3.0±0.1)] -乙腈(70∶30)作為流動相，結果顯示鹽酸丁卡因出峰時間適宜(4.5 min)，但無法對有關物質進行監測，故采用上述梯度洗脫方法。

綜上所述，本方法精密度高，結果準確可靠，可用于測定鹽酸丁卡因注射液中的鹽酸丁卡因的含量測定及有關物質監測，三批樣品在有效期內有關物質均無檢出，安全穩定。

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Determination of tetracaine hydrochloride and the related substances in Tetracaine Hydrochloride Injection by HPLC

LIU Xiaoling,YANG Lina,NI Xiaoxia,et al

(DepartmentofPharmacy,The175thHospitalofPLA,TheAffiliatedSoutheastHospitalofXiamenUniversity,Zhangzhou,Fujian363000,China)

ObjectiveTo establish an HPLC method for determining the content of tetracaine hydrochloride and the related substances in Tetracaine Hydrochloride Injection.MethodsHPLC was used.The analytical column was Agilent ZORBAX SB-C18(5 μm,4.6×250 mm),0.05 mol·L-1potassium dihydrogen phosphate solution[adjusted with phosphoric acid or triethylanune to pH(3.0±0.1)]and methanol(70∶30) were adopted as mobile phase using gradient elution with the flow rate of 1.0 mL·min-1.The detection wavelength was 310 nm for tetracaine hydrochloride,and 280 nm for the related substances.The column temperature was 30°C and the injection volume was 20 μL.ResultsThe good linear relationship of tetracaine hydrochloride ranged from 10.0 to 100.0 mg·L-1(r=0.999 9),and the average recovery was 98.73% with theRSDof 0.72%(n=9).ConclusionsThe method is reliable,accurate and can be used for the quality control of Tetracaine Hydrochloride Injection.

Tetracaine/analysis;Chromatography,high pressure liquid

王慶芬：女，主管藥師，研究方向：藥學管理、醫院制劑，

E-mail:1018943143 @qq.com

10.3969/j.issn.1009-6469.2016.09.012

2016-03-05，

2016-06-11)