胸苷酸合成酶基因多態性與培美曲塞治療海南黎族肺腺癌患者效果的相關性

吳毓優　高炳玉　劉　玉　夏立平　蘇潔之　陳峙霖

(海南醫學院附屬醫院，海南　海口　570102)

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胸苷酸合成酶基因多態性與培美曲塞治療海南黎族肺腺癌患者效果的相關性

吳毓優高炳玉劉玉夏立平蘇潔之陳峙霖

(海南醫學院附屬醫院，海南海口570102)

目的探討胸苷酸合成酶(TS)rs34743033(5'端非編碼區28 bp重復序列)及rs34489327(3'非編碼區的1 494 bp處6 bp核苷酸片段的缺失或插入)與培美曲塞治療海南黎族肺腺癌患者療效與預后的相關性。方法手術后經病理診斷確認海南晚期肺腺癌患者104例，采用PCR的方法檢測5'端28 bp重復序列多態性；采用焦磷酸測序的方法檢測3'端6 bp核苷酸片段的缺失或插入，隨訪記錄患者的無進展生存時間和總生存期。結果TS 基因5'端非編碼區rs34743033多態性位點3R/3R、2R/3R、2R/2R基因型在肺腺癌患者所占的比例分別為67.3%(70/104)、17.3%(18/104)、15.4%(16/104)。3'端非編碼區rs34489327多態性位點+6 bp/+6 bp、+6 bp/-6 bp、-6 bp/-6 bp基因型在肺腺癌患者中所占比例分別為53.8%(56/104)、34.6%(36/104)、11.5%(12/104)。2R/2R和2R/3R基因型患者分別為12.00和18.50個月，3R/3R基因型患者中位無復發生存時間和總生存時間分別為11.63和18.17個月，二者之間無顯著相關；-6 bp/-6 bp 和-6 bp/+6 bp基因型患者分別為12.00和18.70個月，+6 bp/+6 bp基因型患者中位無復發生存時間和總生存時間分別為11.50和19.17個月，二者之間無顯著相關。結論TS基因rs34743033及rs34489327多態性可能與培美曲賽治療海南黎族肺腺癌的療效和預后無關。

肺腺癌；胸苷酸合成酶；培美曲塞；基因多態性

胸苷酸合成酶(TS)是催化dUMP轉化為dTMP關鍵酶，通過限制dTTP的合成而影響DNA生物合成的速度〔1～3〕。該酶的活性是腫瘤細胞生長的重要因素，因而對化療過程的敏感性及治療效果可能存在影響〔4，5〕。酶的活性受到結構及表達量的影響，而基因多態性尤其是位于表達調控部位的多態性位點是形成個體酶活性差異的重要影響因素。rs34743033是位于TS基因5'轉錄調控區域的一個多態性位點，可以與諸多轉錄調節因子結合從而影響啟動子的轉錄效率〔6〕。rs34489327是位于TS基因3'末端的插入缺失多態性位點，可影響轉錄產物mRNA的穩定性，進而影響蛋白質的翻譯效率。以上兩個位點多態性與胃癌、腸癌及食管癌藥物臨床療效及預后存在相關性，可作為臨床個體化治療的參考指標之一。培美曲塞在海南肺腺癌的臨床治療中屬于常規治療藥物〔7〕。本研究擬探討海南黎族肺腺癌患者TS基因多態性與培美曲塞治療肺腺癌療效和預后的相關性。

1　材料和方法

1.1一般資料選擇2011年1月至2013年8月在我院手術治療的晚期肺腺癌患者104例(男84例，女20例)，年齡44～80〔平均(56.9+18.97)歲〕，均經病理學檢查診斷確診為肺腺癌。患者化療前血常規、肝腎功能均正常，心電圖無明顯異常。化療方案：注射用培美曲塞二鈉500 mg/m2，靜滴；同時口服地塞米松、葉酸和肌注維生素B12，每21 d為一個治療周期，共進行4個周期。觀察療效及安全性，隨訪時間至2016年3月30日，每例患者的隨訪時間最長達40個月。

1.2方法①DNA提取。QIAamp?DNA Blood Kit提取全血DNA，采用NanoDrop2000微量紫外分光光度計(Thermo SCIENTIFIC)進行質量控制。② rs34743033多態性檢測。采用PCR擴增檢測TS基因5'端轉錄起點上游附近存在的28個堿基對(bp)的串聯重復序列多態性。上游引物：5'AGCAGGAAGAGGCGGAGCG3'，下游引物：5'AGCTCCCCGTGCGGCGGAC3'，2R/2R基因型擴增片段為222 bp，3R/3R基因型為250 bp，2R/3R基因型出現222 bp和250 bp的兩個條帶。反應體系：2×QIAGEN Multiplex PCR Master Mix，10 μl，上、下游引物各0.2 μl，模板DNA 2 μl，滅菌蒸餾水補足至20 μl。反應條件：98℃預變性15 min；95℃，30 s，55℃，30 s，72℃，60 s，40個循環。③rs34489327多態性檢測。采用焦磷酸測序技術檢測3'端UTR多態性。上游引物5'AGCAGGAAGAGGCGGAGCG3'，下游引物：5'AGCTCCCCGTGCGGCGGAC3'(5'端生物素標記)，測序引物：5' TGATGTAGAGTGTGGTTATGAAC3'。④療效評價指標：記錄無進展生存時間(PFS)和總生存期(OS)。

1.3統計學處理應用SPSS19.0軟件行單因素分析。

2　結　果

2.1rs34743033多態性檢測結果TS基因5'端非編碼區重復序列在肺腺癌患者中，3R/3R、2R/3R、2R/2R基因型所占的比例分別為67.3%(70/104)、17.3%(18/104)和15.4%(16/104)。

2.2TS基因rs34489327多態性檢測結果三種基因型+6 bp/+6 bp、+6 bp/-6 bp、-6 bp/-6 bp在肺腺癌患者中所占比例分別為53.8%(56/104)、34.6%(36/104)、11.5%(12/104)。

2.3TS 基因多態性與肺腺癌預后的相關性104例肺腺癌患者中，2R/2R+2R/3R基因型患者中位PFS和OS分別為12.00和18.50個月，3R/3R基因型患者中位PFS和OS分別為11.63和18.17個月，二者之間無顯著相關性。提示患者TS 基因5'端非編碼區重復序列多態性與肺腺癌預后缺少相關性。-6 bp/-6 bp及-6 bp/+6 bp基因型患者中位PFS和OS分別為12.00 和18.70個月，+6 bp/+6 bp基因型患者則分別為11.5和19.27個月，組間差異亦無統計學意義。見圖1。

圖1　海南肺腺癌患者不同基因型與PFS、OS的相關性

3　討　論

TS的表達與腫瘤的惡性生物學行為密切相關〔5〕。rs34743033與多種轉錄調節蛋白結合有可能刺激和增強啟動子的活性，從而影響基因表達效率。Shintani等〔8〕研究發現，3R/3R基因型肺癌組織蛋白水平較2R/2R，2R/3R高，而且基因型與mRNA表達水平存在相關性。rs34489327是也可能通過影響TS mRNA的穩定性從而影響TS基因的表達。Mandola等〔9〕通過體外熒光標記檢測發現-6 bp等位基因在體外降低TS mRNA的穩定性，在體內降低TS的表達。

培美曲塞在非鱗非小細胞肺癌(NSCLC)的亞組分析中體現了治療優勢〔10〕。研究發現腺癌與非腺癌組織中TS基因表達存在顯著差異〔11〕。患者個體和種族的差異往往會影響個體

對腫瘤的易感性以及對化療藥物的敏感性甚至預后。本研究選擇海南黎族肺腺癌患者作為研究對象，初步的研究結果表明，以上兩個多態性位點可能與培美曲賽治療海南黎族肺腺癌的療效和預后無關。在現今倡導個體化醫療的時代，需要綜合考慮組織類型、基因突變和更多的生物標志物的表達情況作為患者臨床用藥和預后的評估因素。本研究檢測的TS多態性只是TS基因多態性中的兩種，要得到更準確的結果，需要結合考慮更多的因素、進行更多大樣本的前瞻性研究。

1張婷婷,崔蓮花,于壯,等.胸苷酸合成酶基因多態性與肺癌易感性關系〔J〕.中國公共衛生,2011；27(11):1378-80.

2Balboa-Beltrán E,Cruz R,Carracedo A,etal.Delimiting allelic imbalance of TYMS by allele-specific analysis〔J〕.Medicine,2015;94(27):e1091.

3Goff LW,Thakkar N,Du L,etal.Thymidylate synthase genotype-directed chemotherapy for patients with gastric and gastroesophageal junction cancers〔J〕.PLoS ONE,2014;9(9):e107424.

4Avallone A,Gennaro ED,Silvestro L,etal.Targeting thymidylate synthase in colorectal cancer:critical re-evaluation and emerging therapeutic role of raltitrexed〔J〕.Expert Opin Drug Saf,2014;13(1):113-29.

5Jagielska EB,Ucienniczak AP,Browska MD,etal.Trichinella pseudospiralis vs.T. spiralis thymidylate synthase gene structure and T.pseudospiralis thymidylate synthase retrogene sequence〔J〕.Parasit Vectors,2014;7(1):64-8.

6Dunna NR,Naushad SM,Vuree S,etal.Association of thymidylate synthase 5'-UTR 28bp tandem repeat and serine hydroxymethyl transfarase C1420T polymorphisms with susceptibility to acute leukemia〔J〕.Asian Pac J Cancer Prev,2014;15(4):1719-23.

7于飛,劉曉晴,李曉燕,等.培美曲塞單藥或聯合鉑類三線及以上治療晚期非鱗型非小細胞肺癌的臨床觀察〔J〕.中國肺癌雜志,2012;15(2):117-21.

8Shintani Y，Ohta M，Hirabaynshi H，etal.New prognostic indicator for non-small-cell lung cancer，quantitation of thymidylate synthase by real-time reverse transcription polymemse chain reaction〔J〕.Int J Cancer，2003;104(6)：790-5.

9Mandola MV,Stochlmaeher J,Zhang W，etal.A 6 bp polymorphism in the thymidylate synthase gene causes message instability and is associat-ed with decreased intratumoral TS mRNA levels〔J〕.Pharmacogenetics，2004;14(3)：319-27.

10Assinri D,Scarpi E,Saqrtori S,etal.Second-line treatments in non-small cell lung cancer：a systematic reviews of literature and metaanalysis of randomized clinical trials〔J〕.Chest， 2009;135(6):1596-609.

11Tanaka F，Wada H，Fukui Y，etal.Thymidylate synthase(TS)gene expression in primary lung cancer patients：a large-scale study in Japanese population〔J〕.Ann Oncol，2011;22(8)：1791-7.

〔2016-02-10修回〕

(編輯徐杰)

高炳玉(1976-)，男，主任醫師，主要從事乳腺疾病的研究。

吳毓優(1976-)，男，副主任醫師，主要從事心胸外科疾病研究。

R73

A

1005-9202(2016)17-4244-02；doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2016.17.053